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摘要：

目的研究聚多巴胺-阿霉素納米顆粒對癌細胞的化療-光熱治療協同作用。方法將單分子巴多胺聚合成PDA納米顆粒，通過共價鍵作用和仔-仔作用，將抗癌藥物阿霉素（Dox）負載在PDA表面，形成聚巴多胺納米顆粒-阿霉素聚合物（PDA-Dox）。分析PDA-Dox藥物的釋放性能。結果利用PDA良好的光熱轉換能力，通過激光照射，在酸性條件下釋放阿霉素，在阿霉素與化療-光熱治療協同作用下，極大地提高扼殺癌細胞的效率。結論PDA-Dox對癌細胞的化療-光熱治療具有協同作用，可增強扼殺癌細胞能力，提高療效。

關鍵詞：

聚巴多胺納米顆粒；阿霉素；癌細胞；化療；光熱治療

納米顆粒載藥聚合物己經成為納米技術領域的新熱點和關注的焦點，具有生物相容性強、毒性小、可降解等傳統納米載體藥物所不具備的特點，成為新的具有巨大發展潛力的供藥方式和供藥體系[1]。

1材料與方法

1.1儀器設備與試劑

電子顯微鏡，紫外可見分光光度計，傅里葉變換紅外光譜儀（NicoletIS10型），動態光散射儀（ZEN300型），共聚焦熒光顯微鏡（TCSSP2型），激光器（LSR808NL-2W型）。鹽酸阿霉素，30%的氨水、乙醇（均為分析純），98%鹽酸多巴胺、鈣黃綠素，噻唑藍（MTT）、MDEM細胞培養基、胎牛血清。化學試劑均未預處理，實驗用水為純水。

1.2方法

1.2.1聚多巴胺合成。在40mL乙醇與90mL水的混合溶液中加入30%氨水40mL，振蕩攪拌30min，將0.5g鹽酸多巴胺加入10mL水溶解，然后加入到上述混合溶液中繼續攪拌，24h后水洗，使其再次分散在水中從而得到聚巴多胺納米顆粒懸濁液。

1.2.2光熱轉換。取0.1、0.2、0.3、0.5mg/mL濃度下的PDA懸濁液1mL加入到石英池，采用激光對其進行持續照射，波長808nm，功率5W/cm2，照射10min，每隔20s對溶液的溫度記錄1次，繪制升溫曲線。

1.2.3阿霉素的負載及釋放。稱取PDA納米粒子4.0mg分散在4mL0.1mg/mL阿霉素磷酸緩沖液中（pH=8.0），遮光攪拌，完成負載后進行離心，然后采用阿霉素磷酸緩沖液（pH=7.4）進行洗滌，去除表面的阿霉素分子，獲得負載Dox的PDA，即PDA-Dox。

1.2.4癌細胞與組織間環境模擬。采用pH=5.0、pH=7.4磷酸鹽緩沖液作為藥物釋放液，對癌細胞與組織間環境進行模擬。

1.2.5細胞毒性實驗。采用MTT比色法對PDA細胞毒性進行評價，選用HeLa細胞，使用含10%胎牛血清的DMEM培養基（青霉素100U/mL，鏈霉素100mg/mL），置于含5%CO2的37益細菌培養箱中培養[2]，3耀4d消化傳代。

1.2.6共聚焦成像。將HeLa細胞接種到20mm細胞培養皿中，在培養完成后采用磷酸鹽緩沖液進行清洗，清洗3次后分別加入500滋g/mLPDA與500滋g/mLPDA-Dox（含Dox50滋g/mL），繼續培養24h，采用激光照射處理每組細胞，然后加入鈣黃綠素（2滋g/mL），培養30min，采用共聚焦熒光顯微鏡進行活細胞觀察。

1.3觀察指標

觀察PDA表征、光熱轉換性能以及PDA-Dox對癌細胞的殺傷情況。

1.4數據統計方法

采用Excel表對研究數據進行錄入和分析，細胞活性采用構成比表示。

2結果

2.1PDA表征

PDA為形貌均一的單分散體系，粒子平均大小（158.9依11.2）nm，利于細胞的內吞作用。紫外線可見吸收光譜顯示，可滿足光熱治療材料光吸收性質的基本要求。

2.2PDA光熱轉換性能

PDA-Dox能夠安全、有效地運用于光熱治療，取0.2mg/mLPDA-Dox進行光熱穩定實驗，激光反復、連續照射5次，發現光熱穩定性良好。

2.3PDA-Dox與癌細胞的相互作用

研究20、40、80、160、320、640、1280滋g/mL不同濃度PDA-Dox溶液中的HeLa細胞活性，結果發現在濃度約1280滋g/mL時，細胞毒性很低。在無激光照射下，游離的Dox表現出較高細胞毒性，負載等量Dox的PDA表現出弱細胞毒性，表明PDA對Dox起到了緩釋作用；經激光照射10min，PDA對HeLa細胞殺傷效果使其活性下降到25%，負載Dox的PDA細胞殺傷效果更為顯著，HeLa細胞活性下降至10%。而控制組、游離的Dox組中HeLa細胞活性無明顯變化。

3討論

細胞實驗發現，PDA具有十分優異的光熱轉換能力[2]，并且其表面可負載大量的抗癌藥物Dox，可在酸性條件下加速藥物釋放，負載了Dox的PDA能夠很好地將化療與光療相結合，PDA-Dox配合激光與HeLa細胞相互作用下，細胞幾乎全部死亡。由此可見，PDA-Dox對癌細胞的化療-光熱治療具有協同作用，可增強癌細胞扼殺能力，提高療效。

參考文獻：

[1]宋雪嬌,劉莊.有機納米材料在腫瘤光熱治療中的應用[J].化學通報,2015,78(4):292-298.

[2]劉宇煒,郭卓.聚多巴胺-阿霉素納米顆粒對癌細胞的化療-光熱治療協同作用[J].高等學校化學學報,2015,36(7):1389-1394.

作者:李艷麗 單位:黑龍江省泰來縣婦幼保健院