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掃描電鏡觀察以青枯菌HX6為供試菌株，廣藿香試管苗傷根處理后浸泡于濃度為0×108cfu/mL的菌液中，以無菌水浸泡的廣藿香試管苗為對照。分別取青枯菌侵染后3、12、24、48、72h的植物樣品，以體積分數5%戊二醛固定，4℃冰箱保存12h，再用磷酸鹽緩沖液(PBS)(0.2mol/L、pH7.2)清洗3次，并于該PBS保存24h，用鋒利的雙面刀片迅速切取幼根及莖段2～3mm，沿縱切面剖開，經酒精梯度脫水，再用醋酸正戊酯置換，CO2臨界點干燥后，噴金并鏡檢，采用掃描電鏡觀察并照相。

光學顯微鏡觀察以青枯菌HX6為供試菌株，廣藿香試管苗傷根處理后浸泡于濃度為0×108cfu/mL的菌液中，以無菌水浸泡的試管苗為對照。分別取青枯菌侵染1、2、4、7d及對照的植物樣品，莖段粉末采用常規方法制備，并取葉片下表皮徒手制片，在光學顯微鏡下觀察植株莖部導管及葉下表皮的變化情況。

統計方法實驗數據均以均數±標準差(x珋±s)表示，采用SPSSStatistics17.0軟件進行統計學分析，多處理的多重比較采用LSD方法測驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

結果與分析

1青枯菌對廣藿香的致病效應在1周內，每天統計供試植株的病情指數(DI)，根據DI的計算公式，發病最重的DI值為100，完全無病為0。結果表明:傷根及不傷根的對照植株，在1周內均保持健康，DI值為0。青枯菌侵染的處理結果見圖1。結果顯示:在侵染前4d，傷根的植株發病更為嚴重，處理第4天時傷根植株的DI值為84.9，而不傷根植株的DI值為67.5。在侵染第5天時，不傷根處理的植株發病指數迅速增加，至第6天時，2種侵染處理的植株DI值均接近100。表明植株根部傷口有利于青枯菌快速入侵;植株沒有傷根時，大量青枯菌聚集于植物根表組織，也能主動破壞根表細胞壁，再從根部入侵。

2青枯菌侵染廣藿香的掃描電鏡觀察圖2(見彩圖頁第287頁)結果顯示:對照幼根切面光滑，結構完整無損(圖2-a);青枯菌侵染3、12h的根部樣品中，未觀察到青枯菌;侵染24h后，在根切面中可觀察到少量的青枯菌，菌液中的細菌胞外分泌物也隨之進入根部組織，可見白色絮狀物質(圖2-b);侵染48h后，青枯菌在根切面中大量聚集，根組織結構破壞(圖2-c)。對照莖部導管完整，導管壁可見木質化增厚和紋孔(圖2-d);青枯菌侵染3、12、24h的莖段切片中，未觀察到菌體細胞，侵染48h后，莖部導管中可見青枯菌的定殖(圖2-e);侵染72h后，青枯菌在莖部導管中逐漸增多，并可見大量白色絮狀物，充填整個導管組織，導管壁破碎(圖2-f)。

3青枯菌侵染后廣藿香的組織病理變化圖3(見彩圖頁第288頁)結果顯示:未經侵染的對照植株的莖部導管排列緊密，管壁可見環紋或螺紋木質化增厚(圖3-a);青枯菌侵染2d后，導管間略微分離(圖3-b);侵染4d后，導管彎曲殘破，離析(圖3-c);侵染7d后，導管出現扭曲及斷裂(圖3-d)。未經侵染的對照植株的葉下表皮細胞為不規則長方形或卵圓形，細胞排列緊密，結構完整，葉綠體飽滿，呈扁平橢球形或者球形(圖3-e);侵染2d后，表皮細胞部分瓦解，氣孔微合，部分葉綠體解體(圖3-f);侵染4d后，表皮細胞的細胞壁扭曲，氣孔干癟，葉綠體破壞，消失(圖3-g);侵染7d后，表皮細胞壁殘破，細胞內含物混為一體，氣孔皺縮變形、關閉(圖3-h)。

4青枯菌侵染后廣藿香的表型變化青枯菌侵染廣藿香的試驗中觀察到:植株表現為漸進的發病過程，侵染第1天時，絕大多數植株莖桿保持直立，葉片舒展;第2天時，葉子從上而下出現不明顯的卷縮下垂，莖桿有所彎曲;第4天時，大部分葉片萎蔫失水，根部開始褐變;第7天時，葉片萎蔫枯黃，植株倒伏，絕大部分植株死亡。比較青枯菌侵染后植株表型及組織病理變化情況，結果表明植株的病程發展與其組織結構損傷破壞的進程較為一致。

討論

研究青枯菌侵染廣藿香的組織病理學與致病機制，可為從根本上揭示青枯菌致病的本質及尋找控制病害的途徑提供理論依據。青枯菌侵染寄主植物，從接觸、吸附、侵入、定殖到最后的擴展并引起枯萎死亡是一個復雜的過程。病原細菌的致病力由侵染力和致毒性決定。本研究結果表明:青枯菌對廣藿香具有很強的侵染力，接種24h后，青枯菌在根部切片出現;48h時后，在莖部導管出現。

但病原細菌并非只要入侵植物導管分子就能導致枯萎的發生，病菌的致萎過程是伴隨著細菌在輸水組織內的大量增殖、移動及擴散，堵塞和或損壞導管及相鄰組織而發生。本研究對青枯菌入侵廣藿香的觀察表明:青枯菌從根部入侵、在莖部導管定殖及擴張，同時，菌液中胞外分泌物也大量進入維管組織，充填并破壞植物的輸導組織。隨著侵染時間的延長，莖部導管離析、扭曲及破裂，隨之，葉表皮組織由于得不到水分和養分的供給，逐漸解離，植株萎蔫死亡。

有關青枯菌的侵染途徑，在其他植物中的研究表明:細菌主要從植物根部的傷口或天然孔口侵入，如伸根時的生理性傷口、細胞生長中自然造成的裂口、地下害蟲及土壤線蟲造成的傷口等，均有利于病菌侵入。本研究結果表明:青枯菌侵染后，傷根的廣藿香植株發病更迅速，但不傷根的植株也表現出發病癥狀，且隨著侵染時間的延長，不傷根處理病情指數迅速增加;侵染后期，2種處理的病情指數均達100，表明青枯菌在根表聚集后，除了從根表傷口侵入外，還可通過分泌一些胞外酶等物質破壞寄主細胞壁，再從破壞的根表細胞進入植株體內。廣藿香連作年限越長，則土壤中積累的青枯菌越多，在高溫多雨的季節，有利于青枯菌的繁殖和入侵，造成連作的土地發病更為嚴重。因此，在廣藿香生產中應盡量避免連作，收獲后應及時清除病殘體，并進行土壤消毒。

作者：徐燃賀紅鄧素堅李潤美楊玉秀鄧志成金華單位：廣州中醫藥大學中藥學院