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作者：劉婧言瑩史冰楠王德海單位：華中農業大學動物醫學院武漢

方法

1試驗設計及指標檢測

根據預試驗結果進行設計。將100只6周齡健康SPF級昆明系小鼠隨機分為2組:對照組50只，灌服生理鹽水0．4mL/d;試驗組50只，灌服含ica的生理鹽水0．4mL/d，ICA的終濃度為100mg/kg，連續灌服。在試驗開始后第0，1，4，7，10，13，16，19天每組分別隨機選取5只小鼠采血。采血后一部分血液立即進行紅細胞、白細胞分類計數的測定，另一部分血液加入溶血劑后進行血紅蛋白含量的測定。血液涂片采用酸性α－醋酸萘酯酶(ANAE)染色法進行T淋巴細胞活性的測定。

2組織學觀察

將浸泡于10%甲醛固定液中的小鼠胸腺、脾臟和腸系膜淋巴結修整標號，制備石蠟切片，H．E．染色，在光學顯微鏡下進行組織學觀察，照相。

3數據處理

應用SPSS統計學分析軟件處理試驗數據，并用t檢驗進行差異顯著性分析。

結果與分析

1ICA對小鼠血液學指標的影響(結果見表1，2)

由表1可見:試驗組小鼠在灌服ICA后，血液中白細胞數量一直呈現升高趨勢，并在試驗后第7天達到最高值，隨后維持在較高水平，在試驗結束時(試驗后第19天)略有下降，其中在試驗后第13天顯著高于對照組(P＜0．05)，在試驗后第7，10，16，19天極顯著高于對照組(P＜0．01)。血液中的紅細胞數也一直呈升高趨勢，在整個試驗期內都高于對照組，并在試驗開始后第16天達到最高值，其中在試驗后第13，16天顯著高于對照組(P＜0．05)。

由表2可見:試驗組小鼠在灌服ICA后，血紅蛋白濃度在試驗初期變化并不明顯，直到試驗后第16天才顯著高于對照組(P＜0．05)，在試驗后第19天極顯著高于對照組(P＜0．01)。ANAE+T淋巴細胞的認定以淋巴細胞中有紅色顆粒為指示指標(見164頁彩圖1A)，經統計后發現，ANAE+T淋巴細胞比率與對照組相比一直處于較高的水平，并于試驗后第4天達到最高值，與對照組相比差異極顯著(P＜0．01)，隨后略有下降，但顯著高于對照組水平(P＜0．05)，并直至試驗結束。

2ICA對小鼠免疫器官影響的組織學觀察

組織學觀察發現，在整個試驗周期內，對照組小鼠淋巴結的被膜完整，結構清晰，皮質區可見較多淋巴小結和淋巴竇，髓質區的髓索和髓竇清晰完整，淋巴竇內有大量淋巴細胞和巨噬細胞;胸腺中可見散在的大量胸腺小體，皮質部可見各種分化程度的淋巴細胞，髓質部淋巴細胞少而稀疏;脾臟被膜完整，脾臟巨噬細胞和淋巴細胞較多，脾小梁和脾小體結構清晰(見164頁彩圖1B)，并可見到較多的血竇。試驗組小鼠的胸腺、脾臟和淋巴結在整個試驗周期內與對照組相比無明顯眼觀差異(見164頁彩圖1C)。

討論

ICA作為傳統補益類中藥淫羊藿黃酮類提取物，其免疫功能已被研究證實。趙連梅等［6］通過灌服方法對環磷酰胺所致的免疫抑制小鼠給予ICA。結果發現，ICA能極顯著提高小鼠脾臟指數和胸腺指數，使脾淋巴細胞的數量增加和增殖反應提高，促進小鼠脾自然殺傷和細胞毒性T淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷活性和脾細胞腫瘤壞死因子(TNF－α)的產生，并增加脾臟CD4T淋巴細胞和自然殺傷T淋巴細胞的比率，表現為明顯的逆轉化療小鼠免疫抑制狀態的作用，同時也說明ICA對機體的免疫調節作用主要表現為激活T淋巴細胞。

汪海東等［7］利用流式細胞儀技術檢測了脾CD4T淋巴細胞的凋亡率，利用電泳遷移率(EMSA)技術檢測了細胞NF－κB的活性，并利用Western－blot印跡法檢測了細胞P65蛋白的表達水平，認為ICA可經NF－κB信號通路提高NF－κB的活性和誘導P65蛋白的高表達，進而抑制機體淋巴細胞的過度凋亡，延緩動物免疫衰老。而本試驗的結果也表明，小鼠灌服ICA后可明顯提高其外周血中紅細胞和白細胞的數量，并可使血紅蛋白濃度升高，這一結果與趙連梅等［8］的結論相同。同時本試驗也發現，ICA引起外周血ANAE+T淋巴細胞比率的增加要早于對機體淋巴細胞數量的提升，這表明ICA在體內首先發揮激活T淋巴細胞的功能，并繼而表現為刺激機體產生大量的免疫細胞，但本試驗對小鼠免疫器官的組織學觀察發現，ICA對機體免疫器官的作用并不明顯，免疫組織的淋巴細胞數量并未見眼觀變化，這一結論與王洪武等［5］的研究結果并不一致，產生這種不一致的原因可能是試驗檢測方法的不同。

灌服ICA可明顯增強小鼠免疫功能，但對機體免疫組織結構的影響不顯著，可見ICA對機體免疫功能的調節是以刺激、激活機體內原有免疫細胞為主的，此種作用及其機制有待進一步研究。