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番瀉葉(Foliumsennae)為中國藥典2005年版一部收載的常用瀉下導滯藥之一，為豆科植物狹葉番瀉(CassiaangustifoliaVahl)或光葉番瀉(C.acutifoliaLelile)的干燥小葉[1]。

番瀉葉味甘、苦，性寒，有瀉熱行滯、通便的功能。主要用于治療熱結便秘、積滯腹脹。近些年來發現番瀉葉可治療流行性出血熱、急性胰腺炎及中毒性腸麻痹等[2，3]。本品長期以來依靠進口，主要進口國是印度。20世紀80年代以來，我國在海南、廣西等省引種成功，但商品售價僅為進口的1/3～1/2。國產番瀉葉外觀、性狀、顯微特征與進口商品無明顯差異，但其有效成分的多寡和活性如何還需要進一步研究。為此我們課題組從化學成分、活性成分的定性定量以及藥理作用等多方面進行一系列的比較研究。現將兩種商品番瀉葉提取物對小鼠排便和腸蠕動作用的比較及由國產番瀉葉制備而得的番瀉總苷提取物的雌性激素樣抗骨質疏松作用的結果報告如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1動物：健康昆明種小白鼠，體重(20±2)g，雌雄兼用。進行雌性激素樣抗骨質疏松作用研究時僅用雌性小鼠。由沈陽藥科大學提供。

1.1.2藥材：藥材A，產于我國海南省陵水地區，總番瀉苷以番瀉苷B計算為2.30%。藥材B，印度進口，中華人民共和國進口藥材批件受理號為：JZC2003292；天津藥品檢驗所進口藥品檢驗報告書編號為：20040112/13；檢驗結果含總番瀉苷以番瀉苷B計算為2.50%，收驗日期：2004-09-02。兩者經沈陽藥科大學中藥學院路金才副教授鑒定均為豆科植物狹葉番瀉（CassiaangustifoliaVahl）的干燥葉。

1.1.3試劑：含碳末的生理鹽水，含碳末0.1g/ml；含50%墨汁（5%炭末，10%阿拉伯膠制成的混懸液）生理鹽水；乙醇；己烯雌酚；苦味酸染色劑。DA101大孔吸附樹脂（遼寧鑫泰）。

1.1.4儀器：超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司，型號KQ-500DE型數控超聲波清洗器；電子分析天平（MettlerAB204-A上海）；冷凍干燥儀；計時器；注射器。

1.2實驗方法

1.2.1供試樣品的制備

1.2.1.1樣品制備原則：活性物質采用國際上通用的兩種溶劑即乙醇和水提取制備[4]，乙醇的濃度根據文獻采用65%[5]。

1.2.1.2乙醇提取：分別取藥材A和藥材B各100g，各加65%乙醇1500ml浸漬30min后超聲提取：超聲功率為80%，超聲溫度為20℃，超聲時間為10min。減壓回收乙醇各制成含生藥2.0g/ml。標記為：A-e（國產番瀉葉乙醇提取物），B-e（印度進口番瀉葉乙醇提取物）。

1.2.1.3水提取：分別稱取藥材A和藥材B各100g，分別加蒸餾水1500ml浸漬30min后超聲提取：超聲功率80%，超聲溫度20℃，超聲時間10min。減壓濃縮各制成含生藥2.0g/ml。標記為A-w（國產番瀉葉水提物），B-w（印度進口番瀉葉水提物）。

1.2.1.4番瀉總苷提取物制備：稱取藥材A100g，用65%乙醇加熱回流提取，減壓回收乙醇，調pH至7～8，通過DA101大孔吸附樹脂純化，流出液經冷凍干燥即得。臨用前配成含生藥2.0g/ml的溶液。

1.2.2對小鼠排便的影響[6]：取禁食24h小鼠75只，隨機分成5組，每組15只，用苦味酸標記。各給藥組動物分別灌服A-e、B-e、A-w、B-w番瀉葉提取物的碳末混懸液（含碳末0.1g/ml），對照組給予生理鹽水碳末混懸液（含碳末0.1g/ml），給藥容積0.3ml/10g。給藥后，每組小鼠分別置于鋪有濾紙的安鐘罩內進行觀察，記錄小鼠首次排黑色糞便的時間、糞便數量，并觀察糞便性狀以及糞便沾染肛門的情況，連續觀察6h。

1.2.3對小鼠腸蠕動的影響[6]：取禁食24h小鼠75只，隨機分為5組，每組15只，用苦味酸標記。各給藥組分別灌胃A-e、B-e、A-w、B-w四種供試樣品（含50%墨汁），對照組給予含50%墨汁的生理鹽水，給藥容積為0.3ml/10g。給藥后30min脫頸椎處死。打開腹腔分離腸系膜，剪取上端至幽門，下端至回盲部腸管，置于托盤上。輕輕將小腸拉成直線，測量腸管的長度作為小腸總長度，從幽門至墨汁前沿的距離作為墨汁在腸內推進的距離。利用如下公式計算墨汁推進的百分率，并注意觀察各組小腸容積是否增大。墨汁推進率（%）＝墨汁在腸內推進的距離/小腸全長×100%。

1.2.4雌性激素樣抗骨質疏松作用研究[7,8]：將小鼠按體重隨機分為5組，即假手術組、模型對照組、番瀉總苷低劑量組（低劑量組，3.0mg/kg）、番瀉總苷高劑量組（高劑量組，6.0mg/kg）、己烯雌酚組（2.0mg/kg），每組15只。假手術組行雙側卵巢摘除假手術，另4組行雙側卵巢摘除術。術后5d開始做陰道涂片，在給藥過程中每天做小鼠陰道涂片觀察動情期出現情況。以灌胃方式給藥，每天給藥1次，連續給藥49d，對照組給予等體積蒸餾水。于末次給藥24h后自眼眶取血，分離血清，測血鈣、血磷和降鈣素的含量，記錄小鼠體重、副性器官子宮重和左側股骨重，計算臟器系數。

1.2.5統計學處理：數據處理使用SPSS12.0軟件，多組間均數比較用單因素方差分析，進一步兩兩比較用LSD法檢驗。

2結果

2.1國產與進口商品番瀉葉提取物對小鼠排便的影響（見表1）實驗過程中觀察了小鼠糞便的性狀，對照組為成形的濕軟的小棗狀，各給藥組均為不成形的稀便。

2.2國產與進口商品番瀉葉提取物對小鼠腸蠕動的影響（見表2）實驗過程中觀察了腸容積的變化，除對照組不變外，其他組均明顯增大。

2.3番瀉總苷對去勢雌性小鼠動情周期的影響（見表3）結果顯示，模型對照組與假手術組間有顯著性差異（P<0.01），與模型對照組比較，番瀉總苷高低劑量組均可明顯縮短去勢小鼠動情周期（均P<0.01），表明番瀉總苷具有雌性激素樣作用。且番瀉總苷高劑量組與己烯雌酚組比較無顯著性差異（P>0.05）。

2.4番瀉總苷對去勢雌性小鼠子宮重和左股骨重的影響（見表4）結果顯示模型對照組子宮系數和左股骨系數與假手術組間均有顯著性差異（均P<0.01）；己烯雌酚組和番瀉總苷高低劑量組子宮系數和左股骨系數與模型對照組之間均有顯著性差異（均P<0.01），表明番瀉總苷有雌性激素樣促進子宮增生和使骨質鈣化加重的作用。

2.5番瀉總苷對去勢雌性小鼠血鈣、血磷和降鈣素含量的影響（見表5）以血鈣為指標，模型對照組與假手術組間差異有顯著性（P<0.01）；番瀉總苷高低劑量組與模型對照組間差異有顯著性（P<0.01）。表明番瀉總苷可以降低血鈣，使骨質鈣化。以血磷為指標，假手術組和給藥組與模型對照組之間沒有顯著性差異。以降鈣素為指標，與假手術組比較，模型對照組小鼠血清降鈣素下降，番瀉總苷組與模型對照組比較血清降鈣素呈上升趨勢，但沒有顯著差異。

3討論

本研究所用樣品番瀉葉的活性成分，主要為番瀉苷A和番瀉苷B，采用國際上通用的乙醇和水兩種溶劑提取制備。根據文獻[6]的工藝考查，發現65%濃度的乙醇對番瀉苷A、B提取效果最佳，故采用65%乙醇作為醇提取溶劑。

方法1中計數黑便時，應隨時將小鼠排出的已計數的黑便清除，否則易混淆。方法2中實驗動物選取成年體大的健康小鼠為好，腸管粗大易于操作。

在小鼠排便和腸道炭末推進法實驗中，發現A-e、B-e、A-w、B-w各給藥組小鼠排泄的黑便不成形，成稀軟狀，而且與生理鹽水對照組相比兩種番瀉葉給藥組均具有明顯的增加排黑便數量，縮短首次排黑便時間和增大墨汁推進率的作用（均P<0.01），因此推斷其作用機制可能與加強腸蠕動有關。此外，無論A-e組與B-e組還是A-w組與B-w組在兩個實驗中各項指標均無統計學差異，這表明國產番瀉葉與進口番瀉葉不僅外觀性狀鮮有差別而且有著基本相同的藥效學作用。

本研究采用大孔吸附樹脂法富集純化番瀉總苷，與單純的乙醇或水提取方法相比，番瀉苷純度較高，一般番瀉苷A、B之和可達20%以上。

骨質疏松是中老年，尤其是老年女性的常見病、多發病，因此對此病的防治已成為醫學界普遍關注的重要課題。本實驗觀察到番瀉總苷能縮短去勢小鼠動情周期，有雌性激素樣促進子宮增生和使骨質鈣化加重的作用，提示了該藥的雌性激素樣抗骨質疏松作用。