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【摘要】目的研究滴通鼻炎水對(duì)蛙口腔黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響。方法采用蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn),用肉眼觀察給藥后小木屑在蛙上顎黏膜表面移動(dòng)一定距離所需要的時(shí)間；用顯微鏡觀察生理鹽水組和滴通鼻炎水組對(duì)離體蛙口腔上顎黏膜纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間的影響；蛙口腔上顎黏膜用生理鹽水或滴通鼻炎水浸潤(rùn)30min后，分離蛙口腔上顎黏膜，用顯微鏡觀察其纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間。結(jié)果①在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水常用濃度、高濃度組給藥前后對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)均無明顯影響（P>0.05）；②在離體實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水常用濃度、高濃度組對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)亦無明顯影響（P>0.05）；③在半在體法實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間有明顯縮短作用（P<0.05），但作用強(qiáng)度顯著弱于陽(yáng)性對(duì)照藥去氧膽酸鈉。結(jié)論滴通鼻炎水在整體實(shí)驗(yàn)和離體實(shí)驗(yàn)中對(duì)蛙黏膜纖毛的功能無明顯影響，但滴通鼻炎水浸潤(rùn)30min后對(duì)黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】滴通鼻炎水；纖毛運(yùn)動(dòng)；毒性
Abstract:ObjectiveToevaluatetheinfluenceofDitongnasitisdroponfrogpalatemucosaciliamovement.Methods①Recordthetimespanofthesmallchipsmovingonthesurfaceoffrogpalatemucosabyeyes;②Observationofthetimespanoffrogpalateciliumcontinuingsegmentalmotionindrugsolutionundermicroscope;③Observationthetimespanoffrogpalateciliumcontinuingsegmentalmotionaftersufficienteffectbydrugsolutionundermicroscope.Theabovewereusedasindicatorstoexaminetheeffectsofdifferentdrugconcentrationsonfrogpalatemucosaciliamovement.Result①Noapparenteffecthasbeenfoundonfrogmucosaciliummovementatthenormaldosageandhighdosage(theconcentrationofwhichare0.395gcrudedrug/mL&1.58gcrudedrug/mL)ofDitongnasitisdrophaddividedlyactedonfrogmucosacilia,withthedifferencesofnostatisticsignificance（P>0.05）inanimaltest;②NoobviouseffecthadbeenfoundonfrogmucosacilialmovementatthenormaldosageandhighdosageofDitongnasitisdroprespectively,withthedifferencesofnostatisticsignificance（P>0.05）invitro;③Effecthadbeenobservedonweakeningthecontinuingmovementoffrogmucosaciliainvitro,indicatingthatDitongnasitisdropinhibitscilialmovementwhenactingonfrogmucosaciliaforarelativelylongtime（P<0.05）.Buttheintensityismuchweakerthanpositivecontrolwithdeoxysodiumcholate.ConclusionDitongnasitisdrophadnoremarkableeffectoninjuringthefunctionoffrogmucosacilia.
Keywords:Ditongnasitisdrop;cilialmovement;toxicity
滴通鼻炎水由蒲公英、麻黃、黃芩、石菖蒲、蒼耳子、辛夷等組成，具有消炎止痛、抗過敏功能，用于傷風(fēng)鼻塞、急慢性鼻炎。理想的滴鼻劑或噴霧劑在治療疾病的同時(shí)，不應(yīng)對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生抑制作用。為了評(píng)價(jià)滴通鼻炎水對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)有無影響，本研究采用蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)該藥對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響，為臨床安全用藥提供參考。
1材料
1.1藥物滴通鼻炎水，批號(hào)：M1004，規(guī)格：10mL/瓶，廣州白云山制藥股份有限公司白云山外用藥廠生產(chǎn)。質(zhì)量濃度為0.395g生藥/mL，作為低劑量組用藥。滴通鼻炎水浸膏（與配制上述成藥同一批提取），按處方投料提取濃縮制成，廣州白云山制藥股份有限公司白云山外用藥廠生產(chǎn)，質(zhì)量濃度為4.266g生藥/g。試驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配成質(zhì)量濃度為1.58g生藥/mL，為成藥濃度的4倍，作為高劑量組用藥。
去氧膽酸鈉，Sigma產(chǎn)品，批號(hào)（lot）：61H0536。試驗(yàn)時(shí)，用生理鹽水配成ρ=1%去氧膽酸鈉溶液備用。
1.2動(dòng)物蛙80只，體質(zhì)量60~80g，雌雄兼用,粵監(jiān)正字2006C081號(hào)。
2方法與結(jié)果
2.1滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響取30只蛙，隨機(jī)分成3組，即滴通鼻炎水低劑量組、滴通鼻炎水高劑量組、1%去氧膽酸鈉組。
將蛙仰位固定于蛙板上，下頜扳開，用線貫穿，拉向下方并固定。并用圖釘釘住上頜，使上頜的黏膜面得以充分暴露，不時(shí)用生理鹽水少許濕潤(rùn)暴露的黏膜面。
于兩眼窩前緣間的黏膜上置放芝麻大小的軟木屑一粒。由于黏膜上皮的纖毛運(yùn)動(dòng)，將能看到小木屑逐漸向食道口方向移動(dòng)。以上下頜角之間作為終點(diǎn)，用秒表記錄木屑從起始線移動(dòng)到終點(diǎn)線所需時(shí)間(s)，連試3次，求出其平均值。然后用滴管加供試液0.1mL于上頜的黏膜面，3min后再以同法測(cè)試木屑從起始線移動(dòng)到終點(diǎn)線所需時(shí)間3次，求其平均值，并與加藥前的結(jié)果比較，計(jì)算相對(duì)運(yùn)動(dòng)比。如給藥后木屑移行所需時(shí)間超過360s，按360s計(jì)。
相對(duì)運(yùn)動(dòng)比=（給藥前木屑移行所需平均時(shí)間/給藥后木屑移行所需平均時(shí)間）×100%
Tab.1EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovement
與去氧膽酸鈉比較:*P<0.01（F檢驗(yàn)）；給藥前后對(duì)照:#P<0.01（t檢驗(yàn)）
滴通鼻炎水低、高劑量對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯的影響，給藥前后纖毛運(yùn)動(dòng)的差異無顯著性。陽(yáng)性對(duì)照藥1%去氧膽酸鈉能顯著抑制蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)。
2.2離體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響［1］取10只蛙，同2.1法將蛙仰臥固定在蛙板上，使口腔張開，用手術(shù)剪分離上腭黏膜。取約3mm×3mm黏膜，生理鹽水洗凈血塊及雜物，黏膜面向上，平鋪于載玻片上。于黏膜表面滴加0.2mL藥液，輕輕蓋上蓋玻片，于40倍光學(xué)顯微鏡下觀察黏膜纖毛的運(yùn)動(dòng)情況，隨后擱置于加有少量蒸餾水的層析缸中，密閉。使水蒸氣近飽和狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為25℃。此后每5min取出標(biāo)本，顯微鏡觀察，如纖毛繼續(xù)運(yùn)動(dòng)，放回層析缸中，直至纖毛運(yùn)動(dòng)停止，記錄從給藥開始至纖毛運(yùn)動(dòng)停止所持續(xù)的時(shí)間。結(jié)果見表2。
以上試驗(yàn)中，取自同一蛙上腭的黏膜分成4小塊，隨機(jī)分到各試驗(yàn)組中，以減少試驗(yàn)誤差。以給藥組的纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間除以對(duì)照組（給生理鹽水）時(shí)間得纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間（t）的相對(duì)百分率。百分率越接近100%，表示藥物對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的影響越小。
Tab.2EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovementinvitrofrogpalatemodel
與生理鹽水比較:*P<0.01(F檢驗(yàn));與1%去氧膽酸鈉組比較:#P<0.01(F檢驗(yàn))
表2說明，滴通鼻炎水低、高劑量組與生理鹽水組差異無顯著性，但這兩組與去氧膽酸鈉組比較差異均有顯著性。提示滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯影響，不像1%去氧膽酸鈉那樣有顯著抑制作用。
2.3半在體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響［2,3］取40只蛙，隨機(jī)分成4組，即生理鹽水組、滴通鼻炎水低劑量組、滴通鼻炎水高劑量組、去氧膽酸鈉組。同2.1法將蛙仰臥固定在蛙板上，使口腔張開，于上腭黏膜處滴加供試液0.5mL使完全浸沒上腭，接觸30min后用生理鹽水洗凈藥物，分離上腭黏膜以供顯微鏡觀察纖毛運(yùn)動(dòng)情況。黏膜分離后立即洗凈，平鋪于載玻片上，于黏膜表面滴加生理鹽水，蓋上蓋玻片，參照2.2法（離體法）觀察并記錄纖毛運(yùn)動(dòng)的持續(xù)時(shí)間及恢復(fù)情況。并計(jì)算給藥組纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)的相對(duì)百分率。結(jié)果見表3。
Tab.3EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovementinsitufrogpalatemodel
與生理鹽水組比較:*P<0.01（F檢驗(yàn)）；與1%去氧膽酸鈉組比較:#P<0.01（F檢驗(yàn)）
表3數(shù)據(jù)表明：滴通鼻炎水低、高劑量組與生理鹽水組比較,纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間差異有顯著性，且與去氧膽酸組比較差異均有顯著性。提示滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)有明顯抑制作用，但顯著弱于1%去氧膽酸鈉。
3討論
鼻腔表面襯以黏膜，黏膜表面是一層頂部長(zhǎng)有纖毛的假?gòu)?fù)層柱狀上皮，內(nèi)有分泌黏液的杯狀細(xì)胞，所分泌的黏液覆蓋在纖毛上。在正常情況下，纖毛協(xié)調(diào)一致地?cái)[動(dòng),清除鼻腔內(nèi)異物,具有清除作用。在病理狀態(tài)下,纖毛運(yùn)動(dòng)和黏液分泌受到影響,就很容易感染各種急慢性呼吸道疾病。正因?yàn)槿绱耍陙恚P(guān)于滴鼻劑對(duì)黏膜纖毛的毒性評(píng)價(jià)越來越受到關(guān)注。對(duì)于滴鼻劑和噴霧劑等鼻腔給藥制劑,特別是需要較長(zhǎng)時(shí)間用藥的,應(yīng)研究其對(duì)鼻黏膜組織和黏膜纖毛的毒性，從而避免對(duì)鼻黏膜組織及黏膜纖毛產(chǎn)生毒性作用，妨礙鼻腔的正常生理功能,增加感染幾率。
滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的研究表明：在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水低、高劑量（質(zhì)量濃度分別為0.395g生藥/mL和1.58g生藥/mL）對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯的影響(P>0.05)，提示無明顯纖毛毒性；在離體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水亦無明顯毒性；用半在體法觀察滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間有縮短作用，提示滴通鼻炎水較長(zhǎng)時(shí)間（30min）浸潤(rùn)于蛙黏膜纖毛后，可能對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)有抑制作用。在臨床用藥中，滴鼻或噴霧后，藥物難以長(zhǎng)時(shí)間高濃度浸潤(rùn)于鼻黏膜上，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床實(shí)際用藥情況不盡相符，不可簡(jiǎn)單套用于臨床，但可供臨床用藥參考。
從方法學(xué)來看，整體動(dòng)物黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能試驗(yàn)最為可靠。離體法試驗(yàn)由于黏膜離體后與實(shí)際用藥情況不符，可供參考。本文所說的半在體法，在一些文獻(xiàn)中稱為在體法，本法雖然在給藥期間，黏膜是在體的，但剖取口腔黏膜后，是離體的，因而只能算是半在體法。
綜合整個(gè)實(shí)驗(yàn)，滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯影響，如長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)用藥要注意其對(duì)黏膜的抑制作用。
【參考文獻(xiàn)】
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