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1儀器、試劑和原料
1.1儀器
WPS-1A數字熔點儀;X4型顯微熔點測定儀，溫度計未校正;島津UV-21;紫外可見分光光度計;BrukerDRX-300核磁共振儀;BrukerDRX-500核磁共振儀;高效液相色譜儀。
1.2試劑
實驗所用溶劑及試劑為分析純，色譜所用試劑為色譜純；柱色譜用硅膠為上海杜園精細化工有限公司所產（粒度100～200目）或煙臺匯友硅膠開發有限公司所產（粒度60～100目，100～200目）；反相C18Flash柱購自英國IST公司；薄層色譜板購于煙臺匯友硅膠開發有限公司以及青島海洋化工有限公司。
1.3原料
實驗所用材料為胡蘿卜（Daucuscarota）的肉質根，2005年購于上海市泰康路市場。
2方法與結果
2.1提取、分離采用新鮮胡蘿卜25kg，切條粉碎后，分別得到胡蘿卜渣和胡蘿卜汁。胡蘿卜渣，乙醇浸漬過夜，室溫下超聲提取，反復提取4次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀［4］。浸膏加水混懸，分別用極性不同的溶劑萃取，得到石油醚（PET）部分B；胡蘿卜汁依次用極性不同的溶劑萃取，得到石油醚部分A；合并石油醚部分A和石油醚部分B，得到石油醚部位；石油醚部分經硅膠柱色譜、石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫部分重結晶得到化合物A，粗分得到組分再經由反相C18FLASH柱［5］。水-梯度洗脫，最后高效液相色譜法（HPLC）純化得到化合物B和C。見圖1。
2.2結構鑒定
分離出的3種化合物分別為A、B、C，其結構如圖2所示。
其核磁共振1H-NMR譜與已知化合物譜圖比對可知b為Epilaserine，（2,3-Dimethyl-but-2-enoicacid-1-（7-methoxy-benzo〖1,3〗dioxol-5-yl）-2-（2-methyl-1-methylene-but-2-enyloxy）-propylester）。其1H-NMR譜如圖4所示。
圖2中c為白色針狀晶體（丙酮），易溶于氯仿、乙醚，難溶于水、甲醇。Mp：138℃-139℃（CHCl3），Liebermann-Burchard反應呈陽性，提示為甾體化合物。其波譜數據中1HNMR（CDCl3）δ：5.34（1H,d,J=8.92Hz,H-6），3.51（1H,d,J=5.87Hz,H-3）；13CNMR（CDCl3）δ：71.85（d，C-3），121.73（d，C-6），140.79（s，C-5），11.88（q，C-18），19.41（q，C-19）。均與已知化合物β-谷甾醇（β-Sitosterol）特征峰符合，且c在數種展開劑條件下進行薄層層析，其Rf值與β-谷甾醇對照品一致，兩者混合熔點不下降。由此可確定c為β-谷甾醇（β-Sitosterol）。
2.3Laserine、Epilaserine的藥理活性研究
藥物：將分得的Laserine和Epilaserine用乙醇溶解，備用。分組：Laserine濃度分別為10-4，10-5，10-6，10-7，10-8mol/L5組；Epilaserine濃度分別為10-4，10-5，10-6，10-7，10-8mol/L5組；空白對照組。PC12細胞接種于經多聚賴氨酸包被過的35mm培養板中，加入10%（V/V）馬血清和5%胎牛血清的DMEM培養液，并根據分組不同加入不同濃度的Laserine和Epilaserine，置37℃，5%CO2條件下培養。A549細胞用含10％小牛血清的DMEM高糖培養基在37℃、5％CO2細胞培養箱內進行培養，濕度75％。HL-60細胞在RPMI1640培養基中培養，其中有10%的小牛血清,100U/ml青霉素，和100mg/L鏈霉素，在5%CO2的37℃孵箱中孵育。
2.3.1Laserine對HL-60的抑制活性見圖5。
2.3.2Epilaserine對HL-60的抑制活性
見圖6?；钚詫嶒灥慕Y果顯示Laserine對HL-60有弱的抑制作用，Epilaserine對HL-60有強效抑制作用，其半數有效量IC50為0.52μm。
3討論
胡蘿卜具有抗衰老、抗氧化等多方面的藥理作用［6］。為進一步研究胡蘿卜的活性成分，從中發現具有這些藥理活性的單體化合物，對胡蘿卜的脂溶性部位進行了化學成分研究，并從中分離得到了β谷甾醇、Laserine和Epilaserine3個化合物。
胡蘿卜籽為中醫理論中的一種常見藥物，國內對胡蘿卜汁的藥理活性也有報道，但是對胡蘿卜脂溶性成分的研究較少［7，8］。對胡蘿卜的石油醚部位進行研究，并從中分離出具有一定活性的Laserine和Epilaserine2個化合物。
HL-60細胞為白血病細胞，是研究粒細胞誘導分化的理想模型，腫瘤細胞誘導分化的研究對腫瘤治療和抗癌藥物的篩選都具有重要意義［9］。活性實驗的結果顯示Laserine對HL-60有弱的抑制作用，Epilaserine對HL-60有強效抑制作用。Laserine和Epilaserine是從胡蘿卜中分離得到，為深入研究胡蘿卜中的天然活性成分提供了指導。4