本站小編為你精心準備了薄層色譜熒光分光光度法測定黃連中小檗堿含量參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

摘要建立了薄層色譜-熒光分光光度法測定黃連中小檗堿的含量。以1%鹽酸甲醇為溶劑超聲提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)展開，甲醇洗脫，調節pH值為12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的條件下測定其熒光強度，線性范圍為0.012～0.12ng/ml，r＝0.9991，平均回收率為97.5%。

關鍵詞：薄層色譜-熒光分光光度法；黃連；小檗堿

黃連為毛莨科植物黃連(CoptischinensisFranch)、三角葉黃連(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云連(CoptisteetaWall)的干燥根莖。其主要生物活性成分為小檗堿。本文采用薄層色譜-熒光分光光度法測定黃連藥材中小檗堿的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器RF-540型熒光分光光度儀，CS-930雙波長薄層掃描儀(日本島津)。

1.2試藥鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所)；黃連藥材(市售)。

2方法與結果

2.1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加入甲醇制成1mg/ml貯備液。用前取貯備液適量用甲醇稀釋成20μg/ml的對照品溶液。

2.2薄層色譜條件〔1，2〕以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，展開前用氨水飽和15min，展距為13cm，晾干后置紫外燈(365nm)下檢視，小檗堿呈現黃綠色熒光斑點(Rf＝0.37)。

2.3熒光測定條件的選擇

2.3.1pH條件的選擇取0.1ml對照品溶液，加入不同體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm處測定鹽酸小檗堿的熒光強度。結果顯示20mmol/L氫氧化鈉溶液熒光強度最大(見表1)。

表1氫氧化鈉濃度對小檗堿熒光強度的影響

氫氧化鈉(mmol/L)512.5202550小檗堿熒光強度11.649.181.765.928.1

2.3.2熒光光譜的繪制取對照品溶液用甲醇稀釋成約100ng/ml(堿液濃度為20mmol/L)，進行熒光強度掃描測定，從掃描圖譜得到小檗堿最大激發波長365nm，最大發射波長為409nm(見圖1)。

2.4線性關系及精密度試驗取對照品溶液2，8，12，16，20μl分別點于同一薄層板上，依法展開、洗脫，將洗脫液依次移入試管內，精密加入甲醇2ml，1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻后測定熒光強度。結果表明，小檗堿在0.012～0.12ng/ml范圍內與熒光強度有良好的線性關系，線性方程為F＝24.17＋164.0C，r＝0.9991。采用外標兩點法計算樣品中小檗堿的含量。精密度實驗結果表明，同板誤差RSD＝2.14%，板間誤差RSD＝2.79%(n＝5)。

2.5樣品含量測定取黃連藥材粉末約0.2g，精密稱定，加1%鹽酸甲醇溶液約150ml，60℃水浴加熱15min，超聲30min，加甲醇稀釋至200ml，搖勻，靜置后取上清液作為供試品溶液。精密吸取對照溶液4，8μl及黃連提取液2μl點于同一硅膠G板上，展開，將板上相應斑點刮入離心管中，加入甲醇1ml，振搖約15min，超聲20min，離心10min(4000r/min)，吸取上清液0.8ml于試管內，加入甲醇2ml和1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻，測定熒光強度，結果3批黃連藥材中小檗堿平均含量為5.16%(g/g)。

2.6回收率試驗取已知小檗堿含量的黃連藥材5份，精密稱定，加入與小檗堿含量相當的對照品溶液，溶劑揮干后，依2.5項下操作，測定小檗堿的含量。結果表明平均回收率為96.5%，RSD＝5.70%。

3討論

文中采用的薄層展開條件優于文獻報道方法，靈敏度高，選擇性好，能夠將小檗堿與其他成分有效分離，且斑點圓整，無拖尾現象。適用于小檗堿的痕量分析及復方制劑中小檗堿的含量分析。

參考文獻

〔1〕中國藥典中藥薄層色譜彩色圖集.1993：70

〔2〕中國藥典2000年版.一部.2000：251

〔3〕藏鳳和.薄層-比色法測定黃連中小檗堿的含量.藥物分析雜志，1986，6(2)：100新晨