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作者：黃秀紅，馮靈平，廖建維，熊吉

【摘要】目的用RP-HPLC法測定復方魚腥草片中金絲桃苷的含量。方法HPLC用外標一點法，KromasilC-18柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（18：82）為流動相，柱溫為30℃，流速為1.0ml/min，λ=360nm。結果金絲桃苷在0.0675～1.35μg范圍內呈良好線性,回歸方程為Y=20.345X-12.118，R2=0.9999，平均加樣回收率100.5%，RSD%為1.4%（n=9）。結論方法簡便、準確，專屬性強，測定結果重復性好。為復方魚腥草片中魚腥草的定量分析提供了科學有效的方法。

【關鍵詞】復方魚腥草片；金絲桃苷；HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofhyperosideinFufangYuxingcaoPionbyRP-HPLC.MethodsUsingKromasilC18Column,acetonitrile-0.1%phosphoricacidsolution（18：82）asthemobilephase,detectionwavelengthas360nmandcolumntemperatureas30℃.Theflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof0.0675～1.35μgforthehyperosideandlinearequationwasY＝20.345X-12.118R2＝0.9999.Theaveragerecoverywas100.5%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was1.4%（n=9）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofhyerosideinFufangYuxingcaoPion,andthereduplicateoftheresultwasgood.

【Keywords】fufangyuxingcaobrt；hyperoside；RP-HPLC

復方魚腥草片為《中國藥典》收載品種，亦為民間常用藥，具有清熱解毒的功效，用于外感風熱所致的急喉痹、急乳蛾，癥見咽部紅腫、咽痛；急性咽炎、急性扁桃體炎見上述癥候者。本方由魚腥草、黃芩、金銀花、連翹等5味中藥經提取加工制成。據現行藥典及多數文獻的報道，對復方魚腥草片的質量控制多以黃芩苷作為指標進行研究。而在實際處方中，魚腥草所占的量高達一半以上，為君藥，故控制其中的魚腥草的含量極其必要。現經實驗論證，對方中的魚腥草中所含的金絲桃苷的含量測定方法進行方法學研究，認為線性、重復性、回收率、精密度等均較理想。

1儀器與試藥

Agilent1100系列高效液相色譜儀、G1322A（DEGASSER）溶劑脫氣器、G1311A（QuatPump）四元泵、G1313（ALS）自動進樣器、G1316A（COLOM）柱溫箱、G1315B（DAD）檢測器及Agilent工作站；UV－可見紫外分光光度計（SHIMADZU）；乙腈為色

譜純，其余均為分析純；對照品金絲桃苷Hyperoside（批號1521-200202）購于中國藥品生物制品檢定所；樣品復方魚腥草片由海正藥業提供（批號為050301，050302，050303）。

2測定方法的研究

2.1測定波長的確定取金絲桃苷的甲醇溶液做光譜圖測定，在360nm處有最大吸收，故檢測波長選定360nm。

2.2流動相的選擇根據文獻報道及《中國藥典》的采用的流動相，比較了（1）乙腈-甲醇-四氫呋喃（1：1：19.4：78.6）；（2）乙腈-0.1%磷酸（16:84），并設定柱溫為30℃。根據上述二種流動相的實驗結果，認為流動相（2）較理想。經調整，將“色譜條件與系統適用性試驗”確定為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸（W/V）（18：82）為流動相；流速為1.0ml/min；檢測波長：360nm；柱溫30℃。理論板數按金絲桃苷峰計算應不低于4000。色譜圖1、2、3。圖1金絲桃苷對照品色譜圖2復方魚腥草片樣品圖圖3缺魚腥草陰性樣品

圖

2.3提取方法選擇經查閱相關資料，對提取方法、提取溶劑、溶劑用量、提取時間進行考察，采用正交表L9（34）進行實驗。見表1，2。表1復方魚腥草片含量測定法正交試驗的因素表2復方魚腥草片含量測定法正交試驗的計算

從對金絲桃苷進行正交試驗的簡單計算來看，其中提取方法的影響相對較為明顯，它的極差最大，其余各項的極差小，說明這些因素對金絲桃苷幾乎沒有什么影響。結合經濟和環保等因素以及相對比較考慮，認為最佳的提取方案為采用60%的乙醇，加入樣品50倍量的溶劑，回流提取40min。按此條件，又對同一批樣品進行復核試驗，根據復核試驗的結果，金絲桃苷的平均含量為0.3512mg/g，與正交試驗中的最大值0.3440mg/g相比較提高2.1%，由此證明所選最佳方案比較合理的。

2.4標準曲線、定量限、檢測限將對照品金絲桃苷配制成不同濃度的溶液，如表3。表3線性關系考察

2.5對照品溶液及供試品溶液的制備

2.5.1對照品溶液的配制取經真空干燥24h的金絲桃苷對照品12.5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻備用。精密吸取上述對照品溶液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含金絲桃苷25μg的溶液，作為對照品溶液。

2.5.2供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取1.0g，置圓底燒瓶中，精密加入60%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流提取40min，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，蒸干，殘渣加60%乙醇溶解并定容到5ml量瓶中，搖勻，以微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.5.3測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.6重復性試驗取批號為050301的本品，按上述供試品溶液的制備方法，制備6份樣品，按法測定，結果見表4。表4重復性試驗結果

2.7回收率試驗精密稱取本品（批號：050301）測定量的半量按高、中、低取樣品各3份，分別加入濃度為0.1510mg/ml的金絲桃苷對照品溶液1.2、1.0、0.8ml，按上述供試品溶液的制備方法，按法測定。見表5。表5回收率試驗結果

2.8精密度和穩定性實驗取批號為050301的樣品1.0g，精密稱定，按制備方法制成供試品溶液，同法測定6次，金絲桃苷的RSD為0.3%。見表6。表6精密度試驗取同一樣品分別在0、1、2、4、12、24h測定，金絲桃苷的RSD為0.4%，說明該成分在制劑中提取后較為穩定。見表7。表7穩定性試驗

2.9樣品測定取批號為050301、050302、050303的三批復方魚腥草片樣品，分別進行測定，結果見表8。表8樣品測定表由上述結果可知，此含量測定方法可運用于復方魚腥草片中金絲桃苷的含量測定。

3討論

本品樣品的制備條件，經按正交設計多因素提取比較，也進行了方差分析，結果幾乎不呈顯著性，說明金絲桃苷在所設的因素中互相影響較小，也說明它在甲醇和乙醇中溶解性都比較好。為此做了簡單的計算得出了比較合理的樣品溶液的制備方法。

對魚腥草藥材的含量也做了測定，魚腥草藥材含金絲桃苷為0.32mg/g,按制劑中每片含有魚腥草的量來計算,計算金絲桃苷的轉移率為80%以上。由于本品中含的魚腥草大部分為生藥粉，所以制劑中的轉移率相對比較高，也使得本品在臨床治療感冒的效果比較好新晨