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1器材
1.1藥品與試劑注射用紅景天苷，由成都恒基醫藥科技有限公司提供，純度大于90%；葛根素注射液，北京協和藥廠生產；注射用鹽酸地爾硫卓（合貝爽），天津田邊制藥有限公司進口分裝；垂體后葉素注射液，上海第一生化藥業有限公司生產；連二亞硫酸鈉，天津市福晨化學試劑廠生產，分析純；溴化-(4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美國sigma公司出品；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒及肌酸激酶(CK)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；其它試劑均為市售分析純。
1.2儀器ECG-6511型心電圖機，日本光電工株式會社出品；紫外可見分光光度計(TU-1800)，北京普析通用儀器有限責任公司出品；DG-5031型酶聯免疫檢測儀，華東電子集團醫療裝備有限責任公司出品。
1.3動物SD大鼠，雌雄各半，（220±20）g，清潔級；SD孕大鼠，清潔級；均由河南省實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(豫)2005-0001。
2方法
2.1紅景天苷對垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響［3］SD大鼠70只，雌雄各半，隨機分為7組。分別為正常對照組和模型組（均給予等量生理鹽水），葛根素組（12.0mg/kg），地爾硫卓組（1.5mg/kg），紅景天苷高、中、低劑量組（24.0，12.0，6.0mg/kg）。以上各組以不同濃度等容積給藥0.5ml/kg。
將大鼠用3％的戊巴比妥鈉以40mg/kg的劑量腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，記錄一段正常心電圖（S點不高于基線為合格，異常者棄去不用）。靜脈給藥5min后尾靜脈注射腦垂體后葉素0.75U/kg［4,5］，給藥容積為1.0ml/kg，注射速度為5～10s。記錄注射后5，10，30s，1，2，5，10，20min的Ⅱ導聯心電圖，觀察T波和J點的變化。
2.2紅景天苷對心肌細胞的影響
2.2.1對缺氧/復氧（Na2S2O4）所致心肌細胞損傷的影響根據文獻［6～8］方法體外培養原代乳鼠心肌細胞。
取生長良好的細胞隨機分為正常組（給予等量PBS液）；模型組（給予等量PBS液）；葛根素組（終濃度為10-5mol/L）；鹽酸地爾硫卓組（終濃度為10-5mol/L）；紅景天苷高、中、低劑量組(終濃度分別為10-4，10-5，10-6mol/L)。每組6個孔，加入藥物4h后除對照組外均加入Na2S2O4（終濃度為5mmol/L），刺激細胞1h。缺氧損傷1h后，換去細胞培養液為正常含血清DMEM培養液繼續培養1h［9，10］。用MTT染色法測定96孔培養板內心肌細胞的活力(A570表示)。取培養液測定其中LDH和CK的含量。
2.2.2對H2O2誘導心肌細胞損傷的影響［11］取生長良好的細胞隨機分組同“2.2.1”。每組6個孔，加入藥物4h后再加H2O2（終濃度為0.5mmol/L）刺激細胞4h。用MTT染色法測定96孔培養板內心肌細胞的活力(A570表示)。取培養液測定其中LDH和CK的含量。
2.3統計學處理實驗數據用±s表示。采用單因素方差分析進行組間顯著性比較，兩組間樣本均數比較采用t檢驗，P<0.05認為有統計學差異。
3結果
3.1紅景天苷對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響與對照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現明顯的T波抬高(P<0.01)，持續30s，隨后T波降低。與模型組相比，紅景天苷高劑量組(24.0mg/kg)于5，10s時能明顯抑制T波抬高(P<0.01)；中劑量組(12.0mg/kg)于5，10s時也可抑制T波抬高(P<0.05)；低劑量組(6.0mg/kg)不能抑制T波抬高。紅景天苷高、中劑量組作用強度與地爾硫卓組(1.5mg/kg)和葛根素組(12.0mg/kg)比較無顯著差異（P>0.05）。結果見表1。
與對照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現明顯的J點升高(P<0.01)，且持續至藥后20min尚未恢復。與模型組相比，紅景天苷高、中劑量組（24.0，12.0mg/kg）能顯著抑制J點升高(P<0.01)，低劑量組6.0mg/kg無明顯作用。紅景天苷高、中劑量組作用強度與地爾硫卓組1.5mg/kg和葛根素組12.0mg/kg比較無顯著差異（P>0.05）。結果見表2。
表1紅景天苷對垂體后葉素所致心肌缺血大鼠T波的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01，#P<0.05；n＝10
表2紅景天苷對垂體后葉素所致心肌缺血大鼠J點的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01，#P<0.05；n＝10
3.2紅景天苷對乳鼠心肌細胞的影響
3.2.1對缺氧/復氧（Na2S2O4）所致心肌細胞損傷的影響與對照組比較，模型組的細胞存活率明顯下降，差異有顯著性（P<0.01）；培養液中的LDH和CK的含量也顯著升高（P<0.01），均表明心肌細胞活性下降，損傷較嚴重。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細胞存活率，均可顯著降低培養液中的LDH和CK的含量，說明紅景天苷對缺氧/復氧損傷的心肌細胞有一定的保護作用。結果見表3。
表3紅景天苷對缺氧/復氧所致心肌細胞損傷的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；n=6
3.2.2紅景天苷對H2O2誘導心肌細胞損傷的影響與對照組比較，模型組的細胞存活率明顯下降，差異有顯著性（P<0.01）；培養液中的LDH和CK的含量也顯著升高（P<0.01），均表明心肌細胞受到嚴重損傷，活性下降。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細胞存活率，均可顯著降低培養液中的LDH和CK的含量，說明紅景天苷具有顯著的抗氧化損傷能力，對氧化損傷的心肌細胞有一定的保護作用。結果見表4。
表4紅景天苷對H2O2誘導心肌細胞損傷的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；n=6
4討論
垂體后葉素誘發的急性心肌缺血動物模型廣泛應用于篩選抗心肌缺血藥物的研究［12］。靜脈注射垂體后葉素后心電圖立刻發生變化，可分為兩期：第1期，注射后5～20s，T波顯著升高，ST段明顯抬高；第2期，注射后30s至數分鐘，ST段下移,T波降低、平坦、雙相或倒置。該實驗給予大鼠垂體后葉素后，模型組立刻出現明顯的T波抬高，持續30s，隨后T波降低；同時出現明顯的J點升高并持續較長時間，表明大鼠發生急性心肌缺血。預先給予藥物后，觀察到紅景天苷對第1期中的T波升高和J點抬高都有顯著的抑制作用，對第2期的T波降低也有一定的抑制作用，表明紅景天苷對垂體后葉素所致的大鼠心肌缺血有較明顯的保護作用。
研究發現氧自由基的產生及脂質過氧化物反應增強與心肌缺血損傷的病理改變關系密切。心肌缺血時由于氧自由基生成增加，導致細胞膜的結構和功能損傷，從而加劇缺血心肌的組織損傷及功能障礙。
本實驗的缺氧/復氧模型中，Na2S2O4處理細胞存活率明顯下降，培養液中LDH和CK活性增高，表明心肌細胞抗氧化損傷能力下降，細胞發生了氧自由基損傷；給予紅景天苷后，能夠明顯提高心肌細胞的存活率，同時顯著降低LDH和CK的含量。LDH和CK是細胞內的酶，當機體細胞膜受到損傷時，膜的流動性降低，細胞內物質的釋放量會大大增加。紅景天苷可減少細胞內酶的釋放，表明該藥物可以保持細胞的結構完整，維持細胞膜的相對穩定，保護細胞不受氧自由基的損傷。同時LDH和CK含量的減少還可間接增強細胞清除氧自由基的能力，降低細胞脂質過氧化程度，因而可以保護缺血/再灌后的心肌細胞。
過氧化氫(H2O2)是有機體氧化代謝產物，同時是一種活性氧，大量堆積會對心肌細胞產生細胞毒性，造成心肌細胞的嚴重損傷。本實驗中，紅景天苷可以提高H2O2處理后的心肌細胞存活率，降低H2O2處理后培養液中LDH和CK的含量，表明該藥物可明顯減少H2O2造成的心肌細胞的脂質過氧化反應和膜損傷，可以提高心肌細胞抗氧化損傷能力。