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1材料

1.1動物新西蘭大耳白兔，購于南京金陵種兔場,許可證號SCXK(蘇)2002-0025。SD大鼠，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號SCXK(滬)2003-0003。

1.2供試品黃虎噴霧劑，含生藥0.2g/ml，批號060405，由江蘇天際藥業有限公司提供；黃虎噴霧劑賦形劑，批號060212，由江蘇天際藥業有限公司提供；紅花油，成都東洋百信制藥有限公司，批號20051001。

1.3器械家兔打擊器(自制)，由打擊錘、連接線、支架等組成，打擊錘頭部面積約1.5cm×1.5cm，重1.0kg，使用時自50cm高度自由落下。大鼠打擊器(自制)，由打擊棒、固定支架、橡皮筋等組成。打擊棒頭部截面直徑約10mm，一端與橡皮筋中部相連，另一端壓在固定板上，橡皮筋牽拉距離固定為6cm。

2方法［1～3］

2.1黃虎噴霧劑對家兔軟組織損傷的治療作用剪去家兔后肢外側的毛，用10％硫化鈉溶液脫毛，形成約4cm×5cm的去毛區。24h后將家兔后肢大腿外側固定于木板上，連續打擊家兔大腿肌肉部位2次造成軟組織損傷，次日可見皮下淤血、局部肌肉腫脹、皮膚深紫色等癥狀。選取軟組織損傷模型家兔30只，隨機分成5組，每組6只，另取6只家兔作為正常對照組，只脫毛，不造模。給藥各組動物均按0.5ml/kg的給藥量于上述損傷部位外敷給藥，正常對照組、模型對照組分別外敷等量的賦形劑；黃虎噴霧劑高劑量組外敷含生藥0.2g/ml的供試品，給藥劑量為0.1g生藥/kg，中、低劑量組依次減半，陽性對照組按0.5ml/kg局部外敷紅花油。給藥1次/d，連續給藥14d。造模后24h及給藥后第3，5，7，10，14天進行下列觀測指標的測定：肉眼觀察傷肢腫脹、皮下結節等表現，并分級評分，記錄評分結果，評分標準參照馮芳軍等［1，2］的評分辦法：

皮下淤血：多量塊狀記2分，少量點狀記1分，無淤血者記0分；

肌肉腫脹：明顯腫脹記2分，稍有腫脹記1分，無腫脹記0分；

肌肉顏色：紫暗色深記2分，暗紅色淺記1分，色澤正常記0分。

于給藥后第7天頸動脈放血處死2只動物，取打擊部位肌肉組織約3g，進行病理組織學檢查，觀察并記錄肌肉組織淤血、水腫、肌細胞壞死、結締組織增生等情況。其余家兔繼續給藥7d，按上法進行評分觀察，病理組織學檢查。

2.2黃虎噴霧劑對大鼠軟組織損傷的治療作用動物先用10％硫化鈉脫去右側后肢大腿肌肉部鼠毛，形成約1.5cm×1.5cm的去毛區。24h后用打擊器在脫毛區肌肉部位連續擊打2次，造成局部軟組織損傷(注意勿造成骨折)。次日選取模型大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，♀♂各半，另取10只(♀♂各5只)大鼠作為正常對照組，只脫毛，不造模。模型對照組及正常對照組外敷給予等量賦形劑，黃虎噴霧劑高劑量外敷含生藥0.2g/ml的供試品1ml/kg，給藥劑量為0.2g生藥/kg，中、低劑量組依次減半，陽性對照組局部涂予紅花油1ml/kg。給藥1次/d，連續給藥5d。給藥期間連續觀察動物病變的改變情況，并于造模后24h及給藥后第1，3，5天按杜志謙等［2］的評分標準分級評分，記錄損傷平均積分：

0分：損傷局部完全恢復，同正常軟組織；

1分：局部有輕微腫脹感，表面無出血灶；

2分：表面有腫脹感，可見有小塊出血或淤斑灶，面積0.5cm2左右；

3分：表面見明顯的皮下出血、淤斑、水腫，面積1.0cm2左右；

4分：表面見大面積出血、淤斑、水腫，面積大于2.0cm2。

以上實驗結果均與模型對照組進行組間t-檢驗統計學處理。

3結果

3.1黃虎噴霧劑對軟組織損傷家兔的治療作用見表1。造模后24h各組家兔均出現皮下淤血、局部肌肉腫脹、局部皮膚呈深紫色等明顯的軟組織損傷癥狀，模型對照組在給藥第7天仍有明顯的癥狀，至第10天僅見輕度的淤血等癥狀，2周后基本自愈（見表1）。黃虎噴霧劑高、中劑量組家兔給藥第3天就可以明顯地緩解上述癥狀，第5，7天的累計分值也明顯低于模型對照組(P<0.05～0.01)，給藥10d后基本恢復正常，與陽性對照藥紅花油的藥效基本相當；低劑量組在給藥后第5，7天的組織損傷情況也有一定緩解，積分值低于模型對照組，下降幅度達30%以上，但無統計學顯著性差異(P>0.05)，給藥10d后也基本恢復正常。

表1黃虎噴霧劑治療家兔軟組織損傷的評分平均分值（略）

與模型組比較（t－檢驗），*P<0.05，**P<0.01；正常組動物未見軟組織損傷，積分均為0；n=6

藥后2周各組的動物數為4只。

3.2黃虎噴霧劑對家兔肌肉損傷病理組織學檢查結果

3.2.1大體觀察模型組在造模后第7天的送檢標本肉眼可見有明顯的淤血與多量暗紅色斑點，各給藥組的淤血情況明顯減輕，僅見有少量的暗紅色斑點。第14天的送檢標本僅模型組有個別標本有少量暗紅色斑點，其余動物標本未見有肉眼可見的異常病變。

3.2.2鏡檢

空白對照組：7，14d各兔肌肉組織形態較一致，肌細胞呈束狀平行緊密排列，細胞呈長梭形，胞漿豐富，核呈短棒狀。

模型組：7d組可見大量肌細胞斷裂，局部可見大片炎性滲出及壞死，外周見豐富的肉芽組織，主要由炎癥細胞、纖維母細胞及毛細血管構成，斷裂的肌細胞周圍見增生的多核的肌母細胞，并伴有大量急、慢性炎細胞浸潤。14d組炎性滲出及壞死已完全消失，肉芽組織也減少，代之以大片的膠原纖維，斷裂處基本修復，修復處肌細胞排列稍紊亂。

黃虎噴霧劑高、中、低劑量給藥組：7d后未見滲出及壞死，肉芽組織面積較模型組明顯減小，肌細胞增生。14d組見打擊處肌肉已基本修復，肌細胞排列較整齊，局部見束狀的膠原纖維，肌細胞間見少量炎細胞浸潤。

陽性藥給藥組：7d組未見炎性滲出物，肉芽組織面積較模型組明顯減小，肌細胞增生。14d組見打擊處肌肉已基本修復，肌細胞排列較整齊，肌細胞間見少量炎細胞浸潤。

3.3黃虎噴霧劑造模后對大鼠軟組織損傷治療結果見表2。

表2黃虎噴霧劑治療大鼠軟組織損傷評分結果（略）

與模型對照相比（t－檢驗），*P<0.05，**P<0.01；正常組動物未見軟組織損傷，積分均為0；n=10

造模24h后傷肢迅速出現腫脹，皮膚淤斑及皮下血腫，表明形成了軟組織損傷模型，持續約72h，第4天開始模型對照組的病變情況有所恢復，至第6天(給藥后第5天)各組大鼠的受傷部位基本接近正常狀態。黃虎噴霧劑高劑量組大鼠在給藥1d后積分就有明顯下降(P<0.01)，下降幅度約10%，給藥后第3，5天的積分也明顯低于模型組(P<0.05)，局部腫脹、皮膚淤斑、淤血等癥狀明顯減輕，療效與紅花油接近；中劑量組在給藥后第1，3天的積分也明顯低于模型組(P<0.05)，其局部腫脹、淤血等癥狀也明顯減輕；低劑量組與模型組比較則未見統計學顯著性差異(P>0.05)。實驗結果提示本品對大鼠軟組織損傷模型有一定的治療作用。

4討論

本實驗通過肉眼觀察、局部組織切片光鏡觀察比較，發現黃虎噴霧劑可明顯緩解軟組織損傷動物的皮下淤血、局部肌肉腫脹、局部皮膚呈深紫色等癥狀。療效明顯優于紅花油組，從而證實了黃虎噴霧劑具有良好的促進組織腫脹和淤血消退作用。黃虎噴霧劑為臨床長期應用的藥方，按照現代制劑要求，研制加工而成的中藥制劑，藥效學實驗結果表明黃虎噴霧劑具有減輕創傷早期出血和炎性滲出、促進淤血、滲出物及壞死組織吸收的功能，從而可減輕創傷炎性反應，改善局部的缺氧和代謝紊亂狀態，促進損傷組織的再修復，為其應用于臨床治療骨傷科創傷性早期腫痛提供了實驗依據。