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《油氣田地面工程雜志》2014年第六期

1脫硫菌脫硫條件的優(yōu)化

（1）培養(yǎng)基的優(yōu)化。以BSM培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，分別取5g/L葡萄糖、2.5g/L蔗糖、6mL/L乙醇、8mL/L甘油、4g/L乙酸鈉和1.2g/L檸檬酸鈉作為碳源，72h培養(yǎng)后用紫外分光光度計測定并計算2—HBP含量，確定最適宜的碳源。以最佳碳源作為BSM碳源，分別取2.5g/LNH4Cl、2g/LNH4O3、5g/LKNO3、10g/L牛肉膏和25g/L蛋白胨作為氮源，72h培養(yǎng)后測定菌體產(chǎn)生2—HBP量，確定最適宜的氮源。（2）培養(yǎng)條件的優(yōu)化。培養(yǎng)基選取最佳碳源和氮源，以DBT為唯一硫源，以2％、4％、6％、8％、10％的接種量培養(yǎng)72h。通過測定菌體產(chǎn)生的2—HBP量確定最佳接種量。在最佳碳源、氮源和接種量的培養(yǎng)基中添加濃度為20、40、60、80和100mg/L的DBT，培養(yǎng)72h確定最佳的DBT濃度。最佳培養(yǎng)基中設置6、7、8、9、10不同pH值，培養(yǎng)72h確定最佳的pH值。設置20、25、30、35、40℃不同溫度，培養(yǎng)72h確定最佳溫度。選取冰箱保存的菌株活化培養(yǎng)2、3、4、5天，將不同菌齡的菌分別接種于最佳培養(yǎng)基，培養(yǎng)72h確定最佳菌齡。設置不同裝液量，即每個250mL三角瓶分別裝液體培養(yǎng)基40、50、60和70mL，培養(yǎng)72h，研究通氣量狀況對菌體脫硫影響。

2結(jié)果與分析

2.1脫硫菌的富集與分離對煉化公司聚合物二廠工業(yè)廢水進行系列稀釋與劃線分離，在BSM平板上得到優(yōu)勢菌6株，分別為B1~B6。菌落形態(tài)見表1。

2.2菌株降解效果的測定篩選得到的6株菌在以DBT為唯一硫源的BSM2培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，產(chǎn)物與Gibb’s試劑在堿性環(huán)境中均可生成藍色復合物[5]，證明產(chǎn)物含2—HBP。利用分光光度計測出這幾種菌在610nm處的吸光度，代入回歸方程計算生成2—HBP量，以判定菌體脫硫能力的高低。通過不同菌株的降解效果對比可知，菌株B5的2—HBP濃度最高，說明B5脫硫效果最好。

2.3脫硫菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化

2.3.1培養(yǎng)基的優(yōu)化碳源分別是葡萄糖、蔗糖、乙醇、乙酸鈉、甘油和檸檬酸鈉時B5的脫硫情況表明，該菌在幾種碳源作用下均可脫硫，但葡萄糖作碳源時，菌體脫硫效果最好，最高可產(chǎn)生7.97mg/L的2—HBP。從不同氮源對菌B5脫硫效果可看出，菌體在牛肉膏作氮源時最高可產(chǎn)生1.56mg/L的2—HBP。

2.3.2培養(yǎng)條件的優(yōu)化從不同接種量對菌B5脫硫效果的影響可以看出，接種量小，脫硫效果不好；隨著接種量的增高，脫硫效果有所提高，但接種量達8%以后，隨著接種量的增加，脫硫效果反而有所下降。接種量大容易造成雜菌污染[6]，因此最佳接種量為8%，可產(chǎn)生2.23mg/L的2—HBP。從不同DBT濃度對菌B5脫硫效果的影響可見，濃度為20mg/L時，B5最高可產(chǎn)生0.973mg/L的2—HBP，顯示這時脫硫效果最好；隨著DBT濃度的增高，脫硫有所減弱，在80mg/LDBT濃度以后脫硫效果隨著DBT濃度的增加大幅下降，分析可能與脫硫底物抑制物有關。從不同pH值對菌B5脫硫效果的影響可見，脫硫效果在pH值為8時最好，可生成3.16412mg/L的2—HBP。從不同溫度（20、25、30、35、40℃）對菌株B5脫硫影響可見，溫度太高或太低都不利于菌的脫硫效果；在30℃時，2—HBP產(chǎn)生量可達最大值，為4.569mg/L。

從不同菌齡的菌株（2、3、4、5天）對B5脫硫效果的影響可見，活化3天以后的菌株脫硫效果最好，可產(chǎn)生5.47mg/L的2—HBP。裝液量的大小主要影響培養(yǎng)過程中的通氣及溶氧情況，從不同裝液量（40、50、60、70mL）對菌株B5脫硫效果的影響可見，菌株的脫硫效果隨著裝液量的增多而減弱，這與好氧菌培養(yǎng)特點一致。根據(jù)以上優(yōu)化實驗結(jié)果，配置以葡萄糖為碳源、牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基，選擇3天菌齡的菌株，按8%比例接種，裝液量40mL，在pH值為8、溫度30℃的培養(yǎng)條件下研究脫硫狀況。實驗發(fā)現(xiàn)，B5菌株在前兩天脫硫效果不好；從第4天起，脫硫效果明顯增強，最高可產(chǎn)生13.12mg/L的2—HBP；但一周以后脫硫效果沒有明顯上升，結(jié)果與優(yōu)化預期結(jié)果一致。

3結(jié)論

（1）實驗分離得到6株可降解DBT的脫硫菌，經(jīng)比較確定了B5為高效脫硫菌株，需進一步進行菌種鑒定。（2）對B5菌株的脫硫條件進行優(yōu)化，確定脫硫最佳培養(yǎng)基是葡萄糖作碳源、牛肉膏作氮源，最佳接種量為8%，最佳DBT的含量為20mg/L，最佳pH值10、溫度30℃，最佳菌齡3天，裝液量在最少的時候脫硫效果最好。

作者：張虹袁紅梅尤鳳麗黃永紅單位：大慶師范學院