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第1篇

關鍵詞同位素標記； 衍生化； 液相色譜串聯質譜； 代謝物； 生物樣本； 評述

1引 言

小分子代謝物作為人體內生物過程的中間體和終產物，是正常生理過程、病理過程以及對治療干預的藥理學反應的重要指標＼[1＼]。研究體液和組織中小分子代謝物水平的變化，可深入了解代謝通路和疾病機制并有助于疾病的診療與預后。但復雜生物樣本中的代謝物，一般含量較低，基質對分析和測定的干擾較大，直接對其進行分析往往難以達到理想的檢測要求。而衍生化可以通過化學反應改變目標化合物的結構和性質，將難于分析檢測的目標物定量地轉化為更適合特定分析的化合物＼[2＼]。隨著對生命科學領域研究的不斷深入，代謝組學研究中對小分子代謝物的定量分析日益重要。基于同位素標記內標化合物的同位素稀釋法可獲得精準可靠的絕對定量分析結果，但同位素內標物合成困難且昂貴，商品化的種類有限，難以獲取所有目標分析物的同位素內標是不現實的，從而限制了該定量方法的廣泛應用＼[3＼]。

近年來，為了克服對同位素標記內標化合物的依賴，一些課題組采用穩定同位素標記衍生化（Isotope coded derivatization，ICD）技術＼[4～7＼]，通過衍生化反應分別向生物樣本及其對照組引入化學結構相同，但質量不同的穩定同位素標簽，再利用LCMS/MS對兩組樣本進行比較，確定目標物的含量變化。這種標記方法使具有相同官能團的一類分析物同時獲得相應的同位素衍生物，將同位素標記的分析物作為內標可以提高定量分析的精確度和準確度，并解決同位素內標物獲取困難的問題。此外，ICD借助衍生化反應引入的同位素標簽，能夠增加分析物的電離效率，改善其在LCMS/MS中的色譜質譜行為，提高方法的靈敏度與選擇性＼[8～10＼]。基于ICD的LCMS/MS方法能夠對復雜生物基質中具有相同標記反應特性的生物分子進行定量分析、差異分析及譜圖分析，具有廣泛的應用前景?，F已有數篇關于小分子代謝物＼[3， 11～15＼]和定量蛋白組學＼[15～17＼]等方面的ICD綜述，而本文是以ICD試劑靶向的目標物官能團進行分類，以ICD試劑為導向，總結了近幾年報道的ICD試劑及其結合LCMS/MS在動物樣本中小分子代謝物的最新進展。

2定同位素標記衍生化技術

ICD最早出現在蛋白組學相對定量研究中，主要用于鑒定和定量分析不同時期生物樣本中蛋白質表達的差異。隨著新型ICD試劑的不斷出現，該技術已擴展到代謝組學和轉化醫學等領域。這種標記策略將化學反應與生物分析有機結合在一起，產生了更大的實際應用價值。

ICD技術是以待分析物的目標基團為反應活性部位，通過特定的化學反應使其與ICD試劑相連，從而將不同同位素標記形式的質量差異標簽引入到目標物中。應用ICD進行相對定量分析的基本原理是：輕質和重質同位素標記試劑分別與兩份樣本中的目標物進行衍生化反應，按比例混合后進入LCMS/MS分析，最后根據“輕”“重”衍生物產生的離子對的峰面積比值即可對含相同功能基團的系列組分進行相對定量分析，其工作流程見圖1＼[3＼]。當其中一組樣本是濃度已知的標準品時，將其衍生物作為內標物，可以實現樣本中目標組分的絕對定量分析。如ICD試劑采用多種同位素編碼的標簽，可對目標物進行多重定量分析標記，適用于多組樣本間的同時比較及生物學過程的動態監測，提高了分析效率和實驗的重復性。其中利用同位素標記相對和絕對定量分析（iTRAQ）和串聯質量標簽（TMT）可對多肽的氨基分別實現八重＼[18＼]和十重＼[19＼]標記。Dephoure等＼[20＼]將三重代謝標記與六重TMT結合，實現了18組樣本的同時分析，大大提高了蛋白質組相對定量分析的通量。

由于“輕”“重”衍生物只相差幾個確定的質量數，具有相同的結構，理化性質相似，洗脫時間和質譜離子化能力幾近相同，通過比較衍生物的質譜響應信號，可實現兩個比較樣本中代謝物的差異分析，隨后進行數據統計分析和數據庫搜索，有助于潛在生物標志物的發現。ICD還可以有效解決次級代謝物分析時感興趣的目標物與背景峰區分困難的問題。所有衍生的分析物在質譜圖中呈現特定質量差值（等于同位素標簽的質量差×標記位點數量，如：H4/D4標記試劑的質量差為4 Da×官能團數量）且保留時間相同的一對峰，而背景峰和未衍生的分析物呈現單峰，從而有利于目標物的鑒定＼[21＼]。

ICD試劑的設計和選擇是ICD技術的關鍵步驟。ICD試劑一般由三部分組成：與目標物官能團反應的反應基團；為目標物的衍生物提供不同質量的同位素標簽；用于提高目標分析物分離性和可檢測性的性能修飾基團，包括質子親和、易離子化、帶電荷和疏水基團。當目標物的疏水性提高時，反相色譜（RPLC）可以采用有機溶劑比例更高的流動相，這種流動相適合電噴霧電離（ESI）中帶電液滴的產生，因而ESIMS響應更高＼[8＼]。理想的ICD試劑需滿足如下要求＼[3， 22＼]：（1）“輕”“重”同位素試劑易合成，且成本較低；（2）衍生化反應足夠穩健以抵抗各種復雜的基質成分，并在溫和的條件下獲得高產量；（3）特異性地與目標物官能團反應，過量的衍生化試劑或副產物不干擾樣本的分離和檢測；（4）“輕”“重”同位素試劑衍生化的反應時間、過程及產率均相同；（5）“輕”“重”衍生物在色譜分離中同位素效應不明顯，色譜行為一致，可以有效地校正保留時間漂移產生的基質效應；（6）衍生物通過低能碰撞誘導裂解（CID）產生相同的特征子離子或中性碎片（來源于ICD試劑），與母離子結構無關等。

ICD與 LCMS/MS相結合具有以下優勢，可以在大氣壓化學電離（APCI）模式下向分析物引入高親電或親核的結構，在ESI模式下引入永久性帶電荷或易離子化的結構，提高檢測靈敏度＼[8＼]；增加高極性和高親水性化合物的疏水能力，使其在RPLC上得以保留并分離；增加分析物的穩定性以及低分子量化合物的分子量；標記對象廣泛，同時獲得具有相同標記反應特性的某類分析物的同位素內標物；校正基質效應和每次運行間的電離差異，提高定量分析的精確度和準確度＼[23＼]；易于未知代謝物的鑒定等。

3穩定同位素標記衍生化的應用

ICD 結合LCMS/MS的方法適用于生物樣本中代謝物的定量分析、差異分析及次級代謝物的譜圖分析。本文以ICD試劑靶向的目標物官能團進行分類，重點介紹了針對不同基團的ICD試劑并對該方法在動物樣本中羧酸類、胺類、含羰基、含巰基和含羥基代謝物研究中的應用進行評述。

3.1羧酸類化合物羧酸類化合物在生物分子中占有極大的比例，已被證明與2型糖尿病、肥胖和代謝綜合征等疾病和生理病理學紊亂有著極為重要的關系。羧酸類化合物可在MS負離子模式下檢測，但靈敏度通常較低，同時用于分離羧酸類化合物的流動相并不總與ESIMS相容＼[12＼]。因此，常在分析前將其衍生為易離子化、更疏水或堿性的衍生物，使其在ESI或APCI正離子模式下具有更高的靈敏度。常用于靶向羧基的ICD試劑及其應用分別示于圖2與表1中。

Guo等＼[31＼]設計并合成了一對羧基ICD試劑12C2/13C2對二甲氨基苯甲酰甲基溴（DMPABr，圖2A）。DMPABr衍生物主要包含三個部分：提高檢測靈敏度的叔胺基團，增加疏水性進而改善RPLC保留的芳環以及利于代謝物鑒定和準確量化的同位素標簽。DMPABr衍生物的信號增強了2～4個數量級，但胺類可與DMPABr反應抑制羧酸類化合物的信號。Peng等＼[24＼]對該方法加以改進，在DMPABr標記前使用液液萃取富集羧酸化合物。液液萃取在酸性條件下（pH約為1）可有效地分離胺類與羧酸類化合物，并將樣本中降低標記效率的水移除＼[24＼]。

2，4二甲氧基6哌嗪基嘧啶（DMPP，圖2B）是一種高專一性的羧基標記試劑，在基于碳二亞胺縮合的標記條件下，15 s即可實現快速標記且不需要諸如高溫等苛刻的反應條件。DMPP具有高質子親合能（嘧啶環）和適中的疏水性，可提高多種含羧基化合物，如小分子有機酸、脂肪酸、多肽、蛋白質等底物的質譜響應＼[5＼]。H6/D6DMPP試劑已應用于尿液＼[5＼]和甲狀腺組織＼[25， 26＼]中脂肪酸的定量分析及差異分析。

二甲基乙二胺（DMED，圖2C）中的叔胺基團能夠提高羧酸類化合物的質子親和力，使其在ESI源中更易電離。Zhu等＼[27＼]借助H4/D4DMED將血清中19種類花生酸的靈敏度增加了5～138倍，實現了類花生酸同分異構體的色譜分離。該課題組將H4/D4DMED試劑與雙中性丟失掃描（QNLS）相結合實現了脂溶性羧酸類代謝物的全面分析，在ESI源中，輕重標記的DMED衍生物分別特異性地丟失質量為45和49 Da的中性碎片二甲胺，產生含有特定質量差（4 Da×羧基數）且保留時間相同的離子對，與全掃描模式相比，QNLS能顯著提高z測準確度和選擇性，有益于目標物的鑒定（圖3）＼[21＼]。

Ogawa等＼[28＼]合成了H4/D41＼[（4二甲基氨基苯基）羰基＼]哌嗪（DAPPZ，圖2D），用于二十碳五烯酸（EPA）和花生四烯酸（AA）的定量分析，衍生物的酰胺鍵斷裂產生特征性產物離子m/z 148。EPA和AA的羧基經衍生化后，MS檢測靈敏度分別提高了100和300倍。

Han等＼[29＼]利用12C6/13C63硝基苯肼（3NPH，圖2E）對10種腸道微生物來源的2～6個碳的短鏈脂肪酸（SCFA）進行定量分析，獲得了良好的精密度（≤8.8%）和準確度（93.1%～108.4%）。但該方法缺乏衍生化后的淬滅步驟，可能導致NPH與殘留乙酸（LCMS系統常見的共溶劑）發生非預期反應。而Chan等＼[30＼]利用12C6/13C6苯胺（圖2F）對15種SCFAs建立的定量分析方法，優化了苯胺衍生化反應的淬滅條件，幾乎消除了乙酸的在線衍生。

上述ICD試劑衍生化反應簡單易行，標記效率高，不僅憑借同位素標簽實現了羧酸類化合物的準確定量分析，還通過引入質子親合能高和疏水性強的基團（哌嗪基、嘧啶基和苯環等），大大提高了質譜儀從復雜生物樣本中檢測羧酸類化合物的能力。與上述LCMS/MS方法相比，ICD較少應用于氣相色譜串聯質譜（GCMS/MS）對羧酸類代謝物的分析中。Bruheim等＼[11＼]綜述了3種ICD結合GCMS的分析策略，其中H3/D3氯甲酸甲酯（MCF，圖2G）＼[32＼]和H6/D6N（特丁基二甲基硅）N甲基三氟乙酰胺（MTBSTFA，圖2H）＼[33＼]可用于分析羧酸代謝物。由于氯甲酸烷基酯在水相介質中與氨基和/或羧基衍生化快速，衍生物穩定，并且可以對氨基和羧基分別進行標記，最近，Tumanov等＼[34＼]將H3/D3MCF應用于大鼠肝臟、血漿和尿液中氨基酸和非氨基有機酸的定量分析。

3.2胺類化合物

胺類代謝物，如氨基酸、神經遞質和生物胺等在生物功能中起著重要作用。研究表明，體液中胺類代謝物的失調與帕金森、阿爾茨海默癥和腎癌等疾病相關＼[1＼]。胺類物質在酸性條件下通常容易質子化，在ESIMS正離子模式下能達到合適的靈敏度，但其堿性、強極性及高水溶性等特點，使其難以在RPLC中保留，離子抑制效應嚴重＼[35＼]。而通過衍生化將胺轉化為疏水性更高的化合物，可以使得衍生物在RPLC上更易與干擾物分離且提高檢測靈敏度。圖4與表2分別顯示了靶向氨基的ICD試劑及其應用。

丹磺酰試劑在堿性介質中可以對一級胺、二級胺和酚羥基實現快速標記，而不包括叔胺和醇羥基類化合物。丹磺酰化能夠改善分析物的帶電性和疏水性，引入的堿性叔胺基在酸性LC流動相中易離子化，萘基能增加衍生物的疏水性及其在RPLC上的保留＼[36＼]。丹磺酰氯（DNSCl，圖4A）可將胺、氨基酸和苯酚ESI正離子響應信號增強1～3個數量級＼[4＼]， 該試劑現已應用于尿液＼[4， 38～40＼]、 汗液＼[36＼]、 腦脊液＼[37＼]和糞便＼[39＼]等樣本的次級代謝物分析及生物標志物的發現。5二乙基氨基萘1磺酰氯（DENSCl，圖4B）在結構上與DNSCl類似，其中連接到萘基胺的兩個甲基被乙基替代，乙基可以增加疏水性并提供更強的給電子傾向，使得DENSCl衍生物在離子化時有更強的表面活性而易生成更多的氣相離子，并具有更高的質子親和力＼[41＼]。此外，DENSCl可形成3種同位素質量差異標簽（12C4/12C213C2/13C4），能同時對3個樣本進行分析，比DNSCl雙重同位素試劑（12C2/13C2）具備更高的靈敏度和分析速度＼[41＼]。

N羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯為羧酸活性酯， 是一級胺和二級胺的高反應性親電試劑， 且具有副產物及過量試劑不干擾分離和檢測的優點，除了已實現商品化的iTRAQ試劑（圖4C）外，近年也開發了焦谷氨酸NHS酯（PGAOSu，圖4D）＼[7＼]、苯甲酸NHS酯（BZOSu，圖4E）＼[45＼]、4二甲基氨基苯甲酰氨基乙酸NHS酯（DBAANHS，圖4F）＼[44＼]、4甲氧基苯甲酰氨基乙酸NHS酯（MBAANHS，圖4G）＼[44＼]、甲基哌嗪基丁酸NHS酯（MPBS，圖4H）＼[43＼]和二甲基氨基丁酸NHS酯（DMABS，圖4I）＼[43＼]等ICD試劑。Wagner 等＼[45＼]利用12C6/13C6BZOSu相對定量分析含氨基代謝物，未衍生的胺類代謝物大多在1.5 min內洗脫，而BZOSu衍生物因苯基的引入，色譜保留增加，分離度改善且具有更高的信號響應（圖5）。Toyo′oka課題組開發了一系列用于手性氨基酸和羧酸次級代謝組學的衍生化試劑＼[7， 4649＼]。借助手性試劑H5/D5LPGAOSu， 9種疏水性D/L氨基酸在1.7 μm的十八烷基甲硅烷基（ODS）柱上實現對映體分離＼[7＼]。Zhou等＼[44＼]設計并合成了兩種氨基ICD試劑DBAANHS和MBAANHS，由于二甲基氨基在ESI源中更易質子化，DBAANHS比MBAANHS提高代謝物靈敏度的能力更顯著。但MBAANHS衍生物在MS3（源內CID加MS/MS）中可以產生更多有價值的碎片離子以提供目標物的結構信息，從而有助于代謝物的鑒定＼[44＼]。

上述氨基標記試劑的衍生條件簡單，衍生物穩定且可以顯著增強胺類化合物的離子化效率。但由于丹磺酰基和NHS酯較高的反應活性，這些氨基ICD試劑還能與酚羥基類和巰基類化合物發生反應，不能實現對氨基專一性的標記。因此，進一步開發新型氨基特異性ICD試劑是很有必要的。

3.3含羰基化合物

內源性含活性羰基的醛和酮，通常與糖代謝和氧化應激相關，其參與神經退行性疾病、糖尿病及并發癥和動脈粥樣硬化等多種疾病的發展＼[50＼]。在使用大氣壓離子化技術時，醛和酮的中性羰基會降低離子化效率。通過衍生化反應引入帶電荷的結構，可以提高羰基化合物的電離效率，消除脂肪醛和脂肪酮的揮發性和反應性，使其更適于LCMS分析。常用于標記含羰基化合物的ICD試劑及其應用分別示于圖6與表3中。

羰基ICD試劑吉拉德試劑P（GP，圖6A）主要由能夠改善分析物色譜質譜行為的季銨和與羰基反應的肼兩部分組成，H5/D5GP已應用于血清中含3酮和3β羥基的固醇＼[51＼]及人卵泡液中7種類固醇＼[52＼]的分析。

2肼基1甲基吡啶（HMP，圖6B）可用于含羰基化合物的標記，HMP衍生物的電離效率相當高且在CID下產生特征性的子離子m/z 108。但由于會形成多個帶電離子（＼[M-H＼]

Symbolm@@ 和＼[M＼]2+）及其它碎片離子，HMP并不適用于多羰基化合物的衍生化＼[56＼]。Higashi等＼[53＼]利用H3/D3HMP對大鼠腦內別孕烯醇酮（AP）及其前體孕烯醇酮（PREG）進行量化和差異分析，AP和PREG的靈敏度分別提高了500和3000倍，方法的精密度和準確度也得以顯著提高。

Tie等＼[54＼]建立了利用美拉肼（T3，圖6C）對內源性脂肪醛進行全面表征的策略，衍生化在37℃反應15 min，衍生化效率>98%，檢測限低至0.1～1.0 pg/mL。T3能增加脂肪醛的疏水性及色譜保留，改善分離度，并通過引入的堿性基團大幅增強了離子化效率。

4（2（三甲基銨基）乙氧基）苯胺鹵化物（APC，圖6D）是一種醛基標記試劑，其中的苯胺能選擇性地與含醛基化合物快速反應，季銨基團可以改善MS靈敏度。Yu等＼[55＼]在QNLS下通過特異性地監測H4/D4APC衍生物碰撞產生的中性碎片（87和91 Da），實現了對尿液中含醛基代謝物的非靶向分析。

（A）H5/D5吉拉德試劑P；（B）H3/D32肼基1甲基吡啶；（C）H20/D20美拉肼；（D）H4/D44（2（三甲基@基）乙氧基）苯胺鹵化物；（E）12C2/12C113C1/13C2N甲氧基N（2氨氧基乙基）丙酸酯；（F）12C2/12C113C1/13C22氨氧基乙基丙酸酯

（A）H5/D5Girard′s reagent P（GP）；（B）H3/D32Hydrazino1methylpyridine（HMP）；（C）H20/D202，4Bis（diethylamino）6hydrazino1，3，5triazine（T3）；（D）H4/D44（2（Trimethylammonio）ethoxy）benzenaminium halide（APC）； （E）12C2/12C113C1/13C2 NMethoxyN（2aminooxyethyl）propionate（MAP）；（F）12C2/12C113C1/13C22Aminooxyethyl propionate（AEP）

GP、HMP和T3這類含有肼基的ICD試劑，衍生化條件相對苛刻（如高溫或酸性介質），同時由于肼還能與小分子羧酸發生反應，標記反應缺乏特異性＼[57＼]。而APC衍生化反應條件溫和（pH 5.7，10℃），無需額外的樣本預處理步驟，對醛的特異性較高。此外，氨氧基試劑，如N甲氧基N（2氨氧基乙基）丙酸酯（MAP，圖6E）＼[58＼]和2氨氧基乙基丙酸酯（AEP，圖6F）＼[59＼]可用于羰基化合物的GCMS/MS分析中，利用AEP或MAP與羰基發生肟化反應生成的肟醚在電子轟擊源中碎裂生成同位素標記的乙基碳f離子（m/z 32～34），可實現多重分析中羰基化合物的鑒定與相對定量分析。

3.4含巰基和羥基化合物

硫醇分析的主要問題在于不穩定性，因為游離的巰基反應活性高，可通過自氧化和硫醇二硫化物的交換反應轉化為氧化硫醇＼[60＼]。而ω溴丙酮基喹啉f溴化物（BQB，圖7A）可與巰基烷基化反應生成硫醇喹啉f加合物，穩定巰基的同時引入永久帶電的結構，增加MS檢測靈敏度。Liu等＼[6＼]利用H7/D7BQB在母離子掃描模式下監測衍生物CS鍵斷裂產生的離子（m/z 218和225），實現了含巰基代謝物的非靶向分析。該課題組也將H7/D7BQB應用于健康人和5種癌癥患者尿液中含巰基代謝物的差異分析＼[61＼]。

含羥基化合物在LC流動相的酸度范圍內通常是中性的，缺乏可電離的基團，MS響應低，且一些羥基化合物較強的親水性使其難以在RPLC中很好地保留。靶向羥基的ICD試劑能夠增加含羥基化合物的色譜保留和電離效率，從而提高分析方法的靈敏度和重現性（應用列于表4）。DNSCl除了用于標記胺外，還可用于含羥基化合物的分析，通過液液萃取將羥基代謝物富集到乙酸乙酯層，干燥后復溶于乙腈中，接著將代謝物提取物用經堿激活的12C2/13C2DNSCl標記＼[62＼]。丙酮（圖7C）可選擇性地與含順式二醇化合物反應，通過引入更疏水的異丙亞基阻斷順式鄰二羥基以降低極性，從而改善其在反相色譜柱上的分離。Li等＼[63＼]利用H6/D6丙酮在QNLS下監測目標衍生物產生的中性碎片172 Da（H標核苷）和178 Da（D標核苷），對核糖核苷進行鑒定。Chu等＼[64＼]采用二氧化鈰分散固相萃取法富集尿液中的

修飾核苷，同時選擇性地捕獲修飾核苷中的順式鄰二羥基，再用H6/D6丙酮對其進行同位素標記和分析，該方法可以顯著降低基質效應，提高檢測靈敏度并將非核糖結合物等假陽性結果最小化。

4總結與展望

隨著ICD的不斷發展，該項技術已經在簡化樣品復雜性、提高方法的靈敏度和準確度等方面逐漸顯示出了強大的功能，為結構多樣、樣本來源復雜的代謝物的定量分析、差異分析以及譜圖分析提供了很好的思路。但該技術仍存在諸多限制，如ICD試劑高昂的成本、衍生化苛刻的反應條件及時間的耗費、標記效率的有限性、部分ICD試劑與待分析物的專一性不強、后續分離檢測過程引入的定量分析誤差等。此外，H/D同位素思鞘約戀難萇物存在同位素效應，其色譜行為差異會影響定量分析結果的準確性。但該問題可以通過減少D的個數，并將標記位點選擇在親水基團附近，或者選用12C/13C或14N/15N同位素標記試劑而得以緩解。 ICD試劑在廉價易得、對靶標分析物具有更高的反應性及特異性、更加準確靈敏、適合高通量及大規模定量分析等方面仍具有很大的發展空間。相信隨著新型ICD試劑與標記策略的不斷發展和改進，ICD技術將為生物體內重要分子的代謝途徑、疾病作用機制的闡述，生物標志物的發現以及疾病的診療和預后提供更可靠的信息，必將得到更廣泛的應用。

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第2篇

臨海市文化館根據上級主管文化部門的要求，通過近幾年積累起來的工作經驗教訓，談談我們一些不成熟的看法，以起到拋磚引玉的效果，共同探索這項具有挑戰性的工作。

一、提高認識，轉變態度。臨海市是一個有著兩千年歷史的古城，文化底蘊深厚，傳統文化活動項目繁多，千百年來豐富著人民群眾的文化生活。通過這幾年對民族民間藝術的資源普查工作，使我們進一步認識，民族民間資源是群眾文化活動取之不盡、用之不竭的源泉。進入20世紀80年代以來，隨著電子傳媒等新形式的娛樂文化的迅速進入，民間音樂、舞蹈、民間故事、諺語歌謠的搜集、整理、出版工作依然還停留在靜態保護上，沒有做到提倡動態或活態保護，更沒有提出傳承弘揚的行動口號。以致傳統文化項目漸漸地被淡忘，在眾多新的、外來的文化藝術活動中被邊緣化了。

所以我們認為，在研究傳統文化與新農村文化建設的過程中，首先必須了解探究廣大群眾文化工作者對傳統文化與新農村文化建設的思想認識。自2003年以來，我市廣大群眾工作者積極參與了對民族民間藝術資源全面的普查工作，已經認識到傳統文化是民族的瑰寶，是發展民族文化的根源，是發展先進文化的精神資源。作為文化工作者，就必須進一步做好宣傳工作，特別要結合進一步挖掘非物質文化遺產的機遇，創造重視傳統文化的氛圍，開展必要的理論研討，還可以組織參觀介紹一些典型經驗，來提高普通民眾對傳統文化的思想認識。

二、認同目標，勇于實踐。統一了領導與群文工作者對傳統文化與新農村文化建設的關系、作用認識，群文工作者就必須為黨政部門的決策做好參謀，出謀劃策，提供可行性的工作計劃。

首先，我們要從鄉鎮尚存的傳統文化中，選擇有一定知名度或在社會上有一定影響，有群眾基礎，易于普及創新，且資金投入量少，或利用開發后有一定經濟效益的項目開展工作。例如我市的“上盤花鼓”“黃沙獅子”“括蒼剪紙”等。以上盤鎮的“上盤花鼓”為例，上盤鎮于2006年被浙江省文化廳評為省民間藝術之鄉（上盤花鼓），并相繼列入臨海市、臺州市首批非物質文化遺產代表作名錄和2007年省第二批非物質文化遺產名錄項目（舞蹈篇）。有近500年的歷史“上盤花鼓”自1955年挖掘、整理后，每年都在省級演出獲獎。特別是近年來，該鎮的上盤花鼓表演隊已從原來的1個發展到現在的8個隊，100多演職人員，其中農村一級俱樂部中就有6個表演隊。不僅增加農村俱樂部的活動項目，也豐富農村群眾的文化生活。使上盤花鼓的影響力和知名度，在全市、臺州地區進一步擴大。為鞏固該傳統文化在當地群眾文化活動中起到了不可動搖的地位，亦成為上盤鎮保護、傳承、弘揚優秀傳統文化的榜樣。

三、在普及中提高，在提高中普及。在群眾文化的工作中，經常都會碰到先普及后提高，或是先提高后普及的工作方法矛盾。在新農村文化建設中，對待傳統文化工作亦會同樣遇到同樣的問題。我們認為，普及是基礎，提高是關鍵。任何一項群眾文化活動，只有在普及中才能發現人才，有了人才該項活動的質量就會進一步提高。活動項目的質量提高了，才能吸引更多的群眾參與，就能達到普及的目的。

上盤鎮文化站始終堅持這一鮮明的指導思想，積極發揮傳統文化“上盤花鼓”在新農村文化建設中的作用。他們在鎮黨委、政府的領導重視下，制訂了一些切實可行的工作計劃。例如要在近兩年內，使上盤花鼓在全鎮21個一類農村俱樂部中，建立表演隊，到2010年時在42個行政村全部普及；每年舉辦一次上盤花鼓培訓班，以提高各隊的表演質量；擬在上盤花鼓的11首歌曲中選出《寄生草》《姑嫂看花燈》等幾首作為鄉土教材，在中小學、幼兒園中教唱普及；計劃在上盤鎮中心成立舞蹈中心組，培訓演員20人左右，通過比較正規的培訓，提高藝術表演質量；計劃在近期舉辦一次全鎮范圍“上盤花鼓”的表演賽，促進該表演藝術的提高。

這些普及與提高的措施，既是交叉地進行，促進了兩者的工作開展，又體現了矛盾的統一。

四、不斷豐富創新，適應社會進步。任何傳統文化都是人民群眾在生活、生產的實踐中創造的。只有經過不斷加工，不斷豐富，不斷創新發展，才能滿足娛樂的需要，娛神的需要，適應社會發展的需要。上盤花鼓也不例外。據我們了解，上盤花鼓在1955年挖掘整理時，為了宣傳參軍保家衛國的需要，對幾首歌曲的部分唱詞作了修改，演出時加上樂隊伴奏。1959年則把2人花鼓改為5人表演，同時根據上盤花鼓音樂素材，創作了一名為“舞龍調”的新曲，第二次上省演出。2000年，臨海市文化館和臺州群藝館分別以“上盤花鼓”的音樂、舞蹈動作為基礎，創作了舞蹈“花鼓情”。無論是音樂、動作、隊形、人數都作了大膽的創新探索，受到專家和群眾的肯定、贊揚。

第3篇

戲曲，作為“傳統文化進校園”活動的先行示范，生動地將音樂、詩歌、舞蹈、服飾等藝術結合于一體，有著其他藝術無法替代的獨特藝術表現形式。其中，立德樹人、舍生取義、精忠報國、孝敬父母的劇目比比皆是。戲曲中的思想精華對青少年樹立正確的世界觀、人生觀和價值觀有著積極的引導作用和重要的教育意義，在積極培育和踐行社會主義核心價值觀的道路上，傳統戲曲文化育人成為必不可少的一部分。

實施“傳統文化進校園”活動

2012年以來，文化部國家公共文化發展中心結合現代化的科學技術手段，以青少年喜愛的動漫形式推廣普及傳統戲曲文化：編輯動漫版《小學生學戲曲》、《幼兒版戲曲動漫畫冊》等教輔讀本；捐贈書籍和20萬套戲曲動漫光盤；活動中建立“一送一培”公共電子閱覽室等數字化平臺覆蓋近170萬學生、對千名藝術類教師和少先隊輔導員進行了培訓。2014年文化部全國公共文化發展中心計劃將“傳統文化進校園”活動（湖南模式）在全國10～15個省推廣，力爭2～3年覆蓋全國。

“傳統文化進校園”活動聯合中國教育科學研究院專家對教學方面進行指導，在湖南、海南、武漢等地相繼開展后，取得了良好成效，深受學校教師與孩子們的熱烈追捧。為青少年推廣普及優秀傳統文化開辟了有效途徑的同時，也提高了他們的藝術素養和綜合素質。中央電視臺、《人民日報》（海外版）、《人民政協報》、《中國文化報》等主流媒體先后多次對活動進行專題報道，在國內外引起強烈反響。

優秀戲曲文化的傳承僅僅通過記錄、保護和傳承人之間的延續是遠遠不夠的。因此，實現中華傳統文化的發展繁榮，必須要做到文化與教育相結合，以青少年喜聞樂見和易于接受的動漫為載體，將戲曲文化引進校園，通俗易懂地詮釋、表現和傳播優秀戲曲文化。通過全面推廣“傳統文化進校園”活動，可以進一步擴大傳統文化的影響力，從而實現真正的全民普及、全民推廣、全民傳承。

研發“中國戲曲經典原創動畫”

2006年，民進中央向全國政協遞交了《關于搶救、整理、傳承“中國地方戲曲精品折子戲”》的提案，民進湖南省委會主委謝勇提出《關于為搶救、整理、傳承精品折子戲建立保護基地》的建議。文化部在答復中指出：“通過學校教育、社會教育等途徑，使優秀傳統表演藝術的傳承后繼有人，并通過大眾傳媒和互聯網進行宣傳和傳播，使地方戲曲與新的時代相融合?！睘樘嵘⒆訉W習戲曲的興趣，在中國藝術研究院專家的指導和支持下，湖南省探索將傳統戲曲與現代動漫相結合，創造性地利用數字化平臺和新媒體等現代科學技術作為橋梁，成功研創出一種深受孩子喜愛的獨特藝術形式――戲曲動畫。經過7年的錘煉，湖南動漫湘軍創造和推出了原汁原味的本土品牌《中國戲曲經典原創動畫》，并獲得文化部扶持資金以及全國30強動漫創意品牌（2012年）、中國原創手機動漫大賽銀獎等殊榮?！爸袊鴳蚯浀湓瓌搫赢嫛爆F已成為全國具有獨特性、唯一性的品牌。

建議推廣“傳統文化進校園”活動

將具有鮮明的民族特色、時代特征和地域特點的傳統文化通過數字化手段普及傳承到青少年中，是一項需要全社會共同參與的系統工程，范圍廣、影響大，應該引起國家層面的高度重視。為此建議：

1.政府組織文化、教育專家對傳統文化學習內容，就階段性的必修、選修分別進行頂層設計和科學界定。制定從幼兒園到大學等不同階段的課程、課時、教學方法、教學目標和評價體系。將傳統文化學習納入義務教育階段學生素質教育和新課程改革體系中進行統籌謀劃。采取動畫寓教于樂的方式，把傳統文化和藝術教育融入相應課程。

2.將“傳統文化進校園”活動納入公共財政保障范圍，建立專項事業經費。整合文化資源進入學校，開展學校教育資源與文化藝術素質兩大培訓。借鑒“傳統戲曲文化進校園”的經驗，在文學、書法、繪畫、民間技藝等相關領域積極探索傳統文化與現代科學技術相融合的手段，創新傳統文化在青少年中的傳承及傳播方式。

3.對“傳統戲曲文化進校園”動畫制作提供專項經費支持，將已列入世界非物質文化遺產名錄的昆曲、京劇、秦腔、黃梅戲、花鼓戲等地域性戲曲進行創造性地普及推廣。通過在繼承中發展，在發展中繼承，將民族精神與時代精神有機結合起來，不斷創新文化傳承品牌和大眾普及方式。