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五味子作為傳統(tǒng)中藥［5］，是木蘭科植物五味子的干燥成熟果實(shí)，具有斂肺滋腎、止瀉澀精、寧心安神等功效，常用于治療夢(mèng)遺滑精、久咳虛喘、津傷口渴、遺尿尿頻、心悸失眠等癥狀［6］．本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)建立大鼠的胃潰瘍模型，以大鼠的病理切片及體重變化來(lái)研究五味子提取物對(duì)胃潰瘍的治療情況，為五味子提取物臨床治療胃潰瘍提供初步的實(shí)驗(yàn)支持．

1實(shí)驗(yàn)材料

1．1藥品和試劑高錳酸鉀、甲醇、二甲苯、無(wú)水乙醇、硫酸鋁鉀、氨水(分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司);磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉(分析純天津市密歐化學(xué)試劑有限公司);鹽酸(分析純天津市富宇精細(xì)化工有限公司);樹膠(加拿大進(jìn)口分裝上海化學(xué)試劑分裝廠);水溶伊紅、蘇木色素(天津市百世化工有限公司);石蠟(LEICA德國(guó)萊卡公司);生理鹽水(醫(yī)用)(沈陽(yáng)志鷹制藥廠);鹽酸雷尼替丁膠囊(杭州賽諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司);冰醋酸、乙醚為市售純品;實(shí)驗(yàn)用中性福爾馬林溶液、鹽酸酒精溶液及五味子提取物等自制．

1．2實(shí)驗(yàn)儀器組織脫水機(jī)、包埋機(jī)、切片機(jī)、攤片機(jī)、烘片機(jī)、封片機(jī)、染色機(jī)，以上均由德國(guó)萊卡公司制造;顯微鏡(NikonECLIPSEE600尼康公司)、電恒溫培養(yǎng)箱(DH4000B天津泰斯特儀器有限公司)．

1．3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠(雌雄各半)，體重為180～220g，購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào):SYXK黑2008001．

2實(shí)驗(yàn)方法

2．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為空白組，模型組，陽(yáng)性給藥組，給藥治療組，每組10只，雌雄各半．

2．2給藥劑量給藥劑量按照人和大鼠的體型系數(shù)的換算公式求得．給藥劑量計(jì)算公式:D2=D1×K2/K1×(W1/W2)1/3．公式中，D1、K1、W1為人所要求的用藥劑量、體型指數(shù)、體重，D2、K2、W2為已知?jiǎng)游锏挠盟巹┝俊Ⅲw型指數(shù)、體重．經(jīng)計(jì)算各組給藥劑量如表1所示．

2．3冰醋酸法大鼠胃潰瘍模型的制備造模組是將大鼠在乙醚麻醉狀態(tài)下剖開腹部，暴露胃部，用30%醋酸溶液0．02mL注射至腺胃部前壁的漿膜下，再將腹壁縫合［7］．造模術(shù)后從第2天開始，對(duì)大鼠進(jìn)行給藥，空白組和模型組分別給以與陽(yáng)性藥組和給藥治療組相同體積的蒸餾水，陽(yáng)性藥組和給藥治療組按大鼠體重給藥，每天上午給藥灌胃1次，共計(jì)14d．

2．4指標(biāo)觀察

2．4．1體重變化在實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)大鼠按實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行體重稱量，記錄，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，比較各組大鼠的體重變化．

2．4．2病理組織切片觀察實(shí)驗(yàn)大鼠末次給藥后，禁食不禁水24h，取出全胃，浸入10%福爾馬林固定后，對(duì)各組胃組織進(jìn)行病理切片觀察，在電子顯微鏡下觀察各組大鼠胃組織的病理變化情況［8］．

2．5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取材和保存

2．5．1取材將處死后的大鼠腹腔打開，結(jié)扎幽門和賁門后取出胃，向胃腔注入1%的甲醛溶液10mL，然后將胃浸入10%中性福爾馬林固定一周．

2．5．2組織脫水將固定好的臟器進(jìn)行修塊后，按甲醛(二次固定)—水洗—70%酒精—80%酒精—90%酒精—95%酒精—100%酒精I(xiàn)—100%酒精I(xiàn)I—二甲苯I—二甲苯II—石蠟I—石蠟II—石蠟III順序進(jìn)行臟器的脫水．

2．5．3組織切片用全自動(dòng)切片機(jī)進(jìn)行組織切片，放入恒溫箱保存．

2．5．4HE染色將保存一夜的切片放入染色機(jī)中，進(jìn)行HE染色，染色順序?yàn)?二甲苯I—二甲苯II—無(wú)水乙醇I—無(wú)水乙醇II—95%乙醇—90%乙醇—80%乙醇—70%乙醇—蒸餾水—蘇木素—蒸餾水—鹽酸酒精—蒸餾水—伊紅—蒸餾水—70%乙醇—80%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—無(wú)水乙醇I—無(wú)水乙醇II—二甲苯I—二甲苯II，用中性樹膠封片．

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1體重變化實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠體重變化如表2所示．

3．2病理組織學(xué)圖片及觀察結(jié)果由圖1可見(jiàn)，空白組內(nèi)實(shí)驗(yàn)大鼠胃黏膜完整，黏膜上皮細(xì)胞未見(jiàn)壞死、脫落．有豐富的腺體，部分大鼠黏膜內(nèi)有少量的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但是黏膜下層、肌層、漿膜層均無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)．模型組內(nèi)實(shí)驗(yàn)大鼠胃部可見(jiàn)嚴(yán)重潰瘍面，肌層可見(jiàn)嚴(yán)重水腫，胃黏膜損傷嚴(yán)重，有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)出現(xiàn)在表面．陽(yáng)性給藥組相對(duì)于模型組病變程度大有好轉(zhuǎn)，潰瘍面幾乎不見(jiàn)，肌層僅有輕度水腫，黏膜表面無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血小管也沒(méi)有充血現(xiàn)象．給藥組相對(duì)于模型組癥狀明顯減輕，胃部無(wú)明顯潰瘍面，胃黏膜有少量脫落，無(wú)肌層水腫，僅有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血小管無(wú)明顯充血現(xiàn)象．

4結(jié)語(yǔ)

通過(guò)對(duì)北五味子提取物對(duì)大鼠抗?jié)冏饔盟幮W(xué)的初步研究，可以得出以下結(jié)論:實(shí)驗(yàn)前后大鼠體重變化結(jié)果顯示，體重變化大小為:空白組＞陽(yáng)性藥組≈給藥組＞模型組，由此可以得出給藥組對(duì)大鼠的胃潰瘍有較好的療效;病理組織學(xué)切片圖顯示，給藥治療組的治療效果可以和陽(yáng)性藥組的治療效果相比較，有很好的療效．這一結(jié)論為五味子的進(jìn)一步臨床研究提供了前期實(shí)驗(yàn)支持．

作者：楊連榮 李曉梅 崔闊 楊爽爽 宗可昕 范卓文 單位：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院 通河縣人民醫(yī)院 北京秦脈醫(yī)藥咨詢有限責(zé)任公