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《糧食與食品工業(yè)雜志》2014年第五期

1方法

1．1標準溶液的配制稱取齊墩果酸標準品8．0mg，用無水乙醇溶解并定容至10．0mL，分別制成0．8mg／mL的母液，置4℃冰箱中保存。用母液依次配置濃度為0．05、0．10、0．20、0．40、0．80mg／mL的標準溶液。

1．3．2齊墩果酸得率的計算供試樣進樣得到齊墩果酸峰面積，由回歸方程計算其百分含量，用齊墩果酸的得率來衡量原料提取效果。

1．3齊墩果酸的提取稱取粉碎過篩的60目木瓜粉20．00g，按照料液比為1∶10（w／v）分別加入溶劑，混合均勻后，加入到壓力反應釜中，開啟攪拌，反應完成后于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上回收有機溶劑，濃縮樣品，即為齊墩果酸粗品。考察不同溶劑種類（甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯）、提取溫度（20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）、提取時間（0．5、l．0、2．0、3．0、4．0h）對齊墩果酸得率（OA得率）的影響。

1．4齊墩果酸的純化將制備得到的齊墩果酸粗品，分別添加無水甲醇配置成0．1g／100mL，1g／100mL及1．5g／100mL并升溫至60℃溶解（黃褐色液體），同時添加總質(zhì)量1％的活性炭于60℃脫色，真空過濾后得到無色液體，分別在0℃～30℃下結晶，重復結晶后即可得到較為純凈的齊墩果酸。考察提取純度與得率的影響。

2結果與討論

2．1標準曲線的繪制由圖1可以看出，齊墩果酸標準溶液配成濃度為0．05～0．80mg／mL時，表現(xiàn)出較好的線性關系，此時的回歸方程為Y＝2×10－8X＋0．0151，此時R＝0．9998，其中齊墩果酸檢測限最低位為5ng。

2．2齊墩果酸提取條件的研究

2．2．1不同溶劑對齊墩果酸得率的影響準確稱取粉碎過篩的60目木瓜粉20g，在50℃下浸提3h，料液比為1∶10（w／v），為保證最大提取率所以提取3次，提取溶劑依次為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，過濾浸提液，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上回收有機溶劑，濃縮樣品，用溶劑定容樣品至100mL。由圖2可知，甲醇提取得率最高，其次是丙酮乙醇，最差是乙酸乙酯，因此可以選擇甲醇作為提取溶劑。

2．2．2不同提取溫度對齊墩果酸得率的影響選用甲醇作為提取劑，準確稱取粉碎過篩的60目木瓜粉20g，用甲醇浸提3h，料液比為1∶10（w／v），提取l次。由于甲醇沸點僅為64．5℃，可以通過加壓來提升甲醇沸點，加壓氣體可選擇氮氣，壓力選擇參見表1。不同提取溫度齊墩果酸得率的影響見圖3。由圖3可知，由于甲醇沸點僅為64．5℃，越接近沸點，對設備要求較高，同時得率有所降低，因此最佳提取溫度選擇50℃。

2．2．3不同提取時間對齊墩果酸的得率影響準確稱取粉碎過篩的60目木瓜粉20g，用甲醇在50℃下提取，料液比為1∶10（w／v），提取l次，不同提取時間對齊墩果酸的得率影響見圖4。由圖4可知，2h以內(nèi)齊墩果酸的得率隨著時間的延長逐漸增加，而2h后，得率趨穩(wěn)，因此最佳提取時間選擇2h。

2．3齊墩果酸純化條件的研究

2．3．1不同結晶溫度對齊墩果酸純度和得率的影響由表2、圖5、圖6可知，樣品純度隨著溫度升高逐漸提高（雜峰逐漸減少），但得率逐漸降低，可能溫度越低其它類型雜質(zhì)同樣析出，超過30℃，無晶體析出；綜合考慮結晶純度和得率，且溫度不易控制，在室溫下操作較方便，選擇15℃較合適。

2．3．2不同齊墩果酸粗品濃度對齊墩果酸純度和得率的影響分別考察0．1、1．0、1．5g／100mL齊墩果酸粗品濃度對齊墩果酸純度和得率的影響。齊墩果酸純度分別為82％、73％、62％，但粗品濃度越低費時長。據(jù)實驗結果，綜合選擇齊墩果酸粗品濃度為1g／100mL，此時得到齊墩果酸結晶的純度較高，結晶所需時間較短。

2．3．3結晶次數(shù)的選擇結晶次數(shù)選擇可以根據(jù)HPLC來衡量，結晶次數(shù)對齊墩果酸純度和得率的影響見表3，3次結晶后的圖譜見圖7。由圖7可看出，多次結晶可以有效分離純化齊墩果酸，但是重結晶后留在溶液中的少部分，因濃度太低不易再結晶，可以考慮結合柱層析來繼續(xù)純化。

2．4齊墩果酸紅外光譜如圖8所示，根據(jù)紅外光譜中1245～1330cm－1、1335～1392cm－1兩個區(qū)域中碳氫吸收的數(shù)目，即在前一區(qū)域有3個吸收峰，而在后一區(qū)域有2個吸收峰，判斷其骨架結構類型為齊墩果酸烷型。

3結論

（1）采用無水甲醇作為溶劑對木瓜中齊墩果酸進行提取，在50℃條件下提取時間2h，齊墩果酸得率約52％。（2）齊墩果酸純化時，在4℃結晶時純度最低，得率最大；20℃結晶時純度最高，得率較低。綜合考慮純度及得率，選擇在室溫15℃下進行結晶。（3）重復結晶3次后能夠得到較為純凈的齊墩果酸樣品，采用紅外光譜輔助結構鑒定，根據(jù)官能團的吸收峰來判斷，與文獻報道的解釋接近。

作者：郭濤單位：豐益（上海）生物技術研發(fā)中心有限公司