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《水科學進展》2018年第2期

[摘要]目的觀察無果枸杞芽水提物（FLSAE）促眠效果。方法選取成年2月齡C57BL/6J小鼠，采用戊巴比妥鈉協同FLSAE致小鼠睡眠的方法。將FLSAE按照5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的濃度溶解在蒸餾水中，0.2mL/10g•d，灌胃給藥，持續11d，對照組給予等量蒸餾水，觀察小鼠入睡潛伏時間和睡眠持續時間。在上述研究的基礎上，找出最佳藥物濃度，檢測各時間點小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間，篩選出最佳起效時間點。結果與對照組比較，FLSAE各濃度組小鼠睡眠潛伏期均縮短（P<0.05），睡眠時間均延長（P<0.01）；以中濃度組（10mg/kg）延長小鼠睡眠時間最為顯著（P<0.05）。以10mg/kg給藥，給藥第1d，與對照組比較，小鼠睡眠潛伏期有縮短（P<0.05）、睡眠時間有延長（P<0.05）；至灌胃給藥5d時小鼠睡眠時間延長最顯著，與對照組比較，P<0.01，與其它給藥時間點比較，P<0.05；至灌胃11d小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間與對照組比較，P<0.05。結論FLSAE能夠促進小鼠的睡眠，其中10mg/kg組灌胃5d促進小鼠睡眠效果最佳。

[關鍵詞]睡眠；無果枸杞芽；量效；時效

隨著工作節奏的加快和生活壓力的增加，失眠的人數逐年增加。探尋毒副作用小，效果穩定可靠的、改善和治療失眠的藥材是研究者關注的熱點，國內關于中藥材改善睡眠研究報道較多[1-5]。枸杞為傳統中藥材，其葉和果都具有安神功效。課題組前期研究發現寧夏枸杞類新產品無果枸杞芽茶可改善中老年人睡眠，為進一步研究其改善睡眠的量效、時效及可能機制，本研究采用戊巴比妥鈉協同無果枸杞芽水提物（FruitlessLyciumSproutAqueousExtract，FLSAE）所致小鼠睡眠的方法，對FLSAE影響小鼠睡眠的量效和時效關系進行研究，明確FLSAE改善睡眠的最佳劑量和作用時間，以期為FLSAE改善睡眠作用的機制研究提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物：兩月齡SPF級C57BL/6J小鼠由寧夏醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（寧）2005-0001，雌雄各半，喂養于晝夜12h交替、室溫（24±2）℃環境中，自由進食。

1.2.2主要試劑：無果枸杞芽干品由寧夏杞芽食品科技有限公司提供，無果枸杞芽水提取物由寧夏回族自治區中醫醫院制劑室制備，制備方法如下。1.2方法1.2.1FLSAE的制備：將無果枸杞芽干品浸泡12h，煎煮5h之后，過濾取出藥液，藥渣加冷水再煎，反復三次，將藥液合并，靜置沉淀，再用4層紗布過濾3次，煎出的藥液放到小火上煎煮蒸發濃縮，使之逐漸形成稠膏狀。采用水提法制作無果枸杞芽浸膏，每克無果枸杞葉浸膏含生藥量約3.17g。以小鼠體重20g相當于成人體重60kg為參考進行中草藥的劑量換算（2005版《中國藥典》）。

1.2.2FLSAE改善小鼠睡眠的量效關系研究：將40只小鼠隨機分為：低劑量（5mg/kg，FLSAE1）組、中劑量（10mg/kg，FLSAE2）組、高劑量（20mg/kg，FLSAE3）組和對照組，每組10只。將FLSAE按照不同濃度溶解在蒸餾水中，按0.2mL/10g體重，1次/d，灌胃給藥，對照組灌胃等量蒸餾水。每天定時灌胃給藥，30min后，腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg，將小鼠腹部朝上放在37°C溫熱板上，以翻正反射消失時間記為睡眠潛伏時間，以翻正反射消失的持續時間記為睡眠時間（即翻正反射消失時間至翻正反射重復出現時間），持續11d，觀察小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間。

1.2.3FLSAE改善小鼠睡眠的時效關系研究：在FLSAE改善小鼠睡眠的量效關系研究的基礎上，選取最佳促眠藥物濃度組，分析1、3、5、7、9、11d小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間，篩選出最佳給藥時間。

1.3統計學方法：采用SPSS19.0統計軟件進行實驗數據統計分析。計量資料以sx±表示，比較采用單因素方差分析，兩兩之間比較采用LSD檢驗，以P<0.05差異有統計學意義。

2結果

2.1無果枸杞芽提取物促眠作用的量效關系研究：與對照組比較，無果枸杞芽提取物各濃度均可縮短小鼠睡眠潛伏時間（P<0.05），并延長各組小鼠睡眠時間（P<0.05）。其中以中濃度組（10mg/kg）效果最顯著，與其它濃度組比較，有顯著差異（P<0.05）。

2.2無果枸杞芽提取物促眠作用的時效關系研究：無果枸杞芽提取物以10mg/kg灌胃，給藥1d時開始起效，與對照組比較，對小鼠入睡的潛伏時間有縮短作用，對小鼠睡眠持續時間有延長作用，有顯著性差異（P<0.05）；至給藥3d時，對小鼠睡眠潛伏期縮短最顯著，至連續給藥5d時，對小鼠睡眠持續時間延長作用最顯著，與其它時間點FLSAE組比較，有顯著性差異（P<0.01）；至給藥11d，小鼠睡眠持續時間的延長作用及對入睡潛伏時間的縮短作用仍然保持，與對照組比較差異顯著（P<0.05）。

3討論

睡眠不僅是維持個體生存所必需的過程，并促進機體生長，促進腦功能發育、發展、保持腦的能量、鞏固記憶及保證大腦發揮最佳功能，增強免疫力，延緩衰老等多方面功能。隨著生活節奏的加快及生活壓力的增加，失眠的人數逐年增加,據調查約33％的美國人、37.2％的法國和意大利人、38.2％的中國城市居民患有失眠[1-4]。目前臨床常用鎮靜催眠藥可緩解患者入睡困難、増加睡眠時間，但常引起次日頭暈、嗜睡等現象，且長期使用會產生藥物耐受性、依賴性和成癖性[1]。中醫中藥治療失眠效果顯著，近年來，國內許多學者致力于中藥促眠作用研究，如酸棗仁總皂苷棗仁顆粒、人參益智膠囊等都有較好的促眠作用，但煎藥、藥味、方便性等方面限制其使用和發展[5-13]，故探尋藥食同源、毒副作用小、效果穩定可靠的促眠中藥材是研究者關注的焦點。枸杞和枸杞葉的安神作用早在唐代甄權的《藥性論》中就有記載：臣，子葉同說，味甘，平。能補益精諸不足，易顏色，變白，明目，安神，令人長壽。寧夏枸杞類新產品無果枸杞芽多種有效成分和生物活性物質明顯高于枸杞果有果枸杞葉，本課題組前期研究發現泡服無果枸杞芽（葉）茶可改善失眠患者的睡眠。為進一步研究寧夏無果枸杞芽促眠功效，本實驗觀察了FLSAE促眠的最佳濃度和最佳起效時間，以期為FLSAE促眠作用機制研究提供先期準備。

結果在寧夏FLSAE促眠作用的量效關系研究中，在本實驗所設的3個濃度中，各濃度組均有促眠作用，其中10mg/kg濃度組效果最佳，此結果提示在10mg/kg濃度范圍內，隨著藥物濃度的增加，促眠作用增強，當大于10mg/kg濃度范圍后，隨著藥物濃度的增加，促眠不再增強。在FLSAE促眠作用的時效關系研究中，以10mg/kg灌胃，給藥1d時對小鼠入睡的潛伏時間有縮短作用，對小鼠睡眠持續時間有延長作用；至連續給藥5d時，對小鼠睡眠持續時間延長作用最顯著，至給藥11d，小鼠睡眠持續時間的延長作用及對入睡潛伏時間的縮短作用仍然保持，此結果提示FLSAE用藥5d促眠作用最佳，至用藥11d仍有促眠作用，課題組也曾觀察至灌藥21dFLSAE促眠作用仍然保持，說明無藥物耐受性。本研究結果表明寧夏無果枸杞芽具有促眠作用，因寧夏無果枸杞芽中含有多種營養成分和生物活性物質（如黃酮類、萜類化合物、微量元素、維生素E/C、生物堿等），到底哪些成分、通過哪些途徑起促眠作用有待進一步深入研究。

參考文獻

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作者：侯亞楠3;楊曉婷3;黃辰3;吳彪3;王君潔3;仇萌萌3;宋東3;苗婷婷3;張蓮香1,2 單位：寧夏醫科大學：1.基礎醫學院人體解剖學系，2.顱腦疾病重點實驗室，3.臨床醫學院