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《中成藥雜志》2015年第六期

1方法與結果

1.1苦杏仁苷的測定

1.1.1色譜條件VenusilXBP-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm，博納艾杰爾科技有限公司)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(8∶92)為流動相;體積流量1.0mL/min，柱溫為25℃，檢測波長為207nm。理論板數按苦杏仁苷峰計算應不低于7000。苦杏仁苷對照品及供試品的色譜圖，見圖1。

1.1.2標準曲線精密稱取干燥至恒定質量的苦杏仁苷對照品20.10mg，至50mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，作為對照品貯備液0.402mg/mL。精密量取配置好的苦杏仁苷對照品溶液0.5、1、2、4、5、10mL分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻。精密吸取上述稀釋對照品溶液20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以對照品進樣質量濃度(mg/mL)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線:Y=1.7×106X－4.2×105，r=0.9990。結果表明苦杏仁苷在0.0201～0.402mg/mL質量濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

1.1.3精密度試驗精密吸取對照品溶液，重復進樣6次，每次20μL，記錄峰面積，結果相對標準偏差(RSD)為1.18%，表明儀器精密度好。

1.1.4穩定性試驗取一份樣品約10mg，精密稱定，精密加入甲醇5mL，使完全溶解，過濾，精密量取續濾液1mL，置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得供試品溶液，分別于配制后的0、1、2、4、6、8、12h進樣，測定苦杏仁苷的峰面積，其相對標準偏差(RSD)為1.24%，說明供試品溶液在常溫下12h內穩定。

1.1.5重復性試驗取樣品6份，按“2.1.4”項下方法處理制得6份供試品溶液，并按“2.1.1”項下色譜條件進樣，結果苦杏仁苷的RSD為1.30%，表明方法的重復性良好。

1.1.6加樣回收率試驗取已經測定含有量的樣品9份，每份5mg，精密稱定，隨機分成3組，每組3份，按照供試品中苦杏仁苷的含有量，以其80%、100%、120%比例精密加入對照品貯備液，揮干甲醇后加入樣品，按“2.1.4”項方法處理并按“2.1.1”項下色譜條件進樣，結果見表1。 

1.2閃式提取方法的考察

1.2.1閃提電壓的考察在進行正交試驗前，先對其電壓進行單因素考察，分別取100V、120V、140V不同水平進行試驗。取桃仁藥材，粉碎成粗粉，先用石油醚回流提取1h，棄石油醚，藥渣分別加入6倍量70%乙醇閃提1次，每次1min，每個試驗組平行做3份，以桃仁中苦杏仁苷的含有量及轉移率為指標，結果見表2。由表2可見，苦杏仁苷轉移率最高時的電壓為120V，因此，選用120V為閃式提取的有效電壓。

1.2.2苦杏仁苷的閃式提取正交試驗選取乙醇體積分數(A)、料液比(B)和提取時間(C)為考察因素，以提取物中苦杏仁苷的含有量和轉移率為考察指標，選擇水平進行正交試驗。選桃仁藥材，粉碎，稱取50g，用石油醚(沸程30～60℃)回流1h，在120V電壓下按L9(34)正交表，分別閃式提取2次，合并濾液，回收乙醇，將濾液濃縮至浸膏，后冷凍干燥，得粗提物。取本品粗提物約10mg，精密稱定，精密加入甲醇5mL，使完全溶解，過濾，精密量取續濾液1mL，置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，按“2.1.1”項下色譜條件進樣，結果見表3～5。結果分析:由表3可知，三個因素的影響大小順序是乙醇體積分數＞料液比＞提取時間，在表4中可知，A因素對苦杏仁苷的含有量和轉移率有極顯著的影響(PA＜0.01)，且A2＞A3＞A1，故選A2;而因素B和因素C對苦杏仁苷的含有量和轉移率無顯著影響，根據表3的測定結果顯示，苦杏仁苷的閃提最佳工藝是A2B2C1，即加10倍70%乙醇閃式提取1min。

1.2.3驗證試驗為驗證正交設計實驗中最優工藝的重復性和可靠性，分別取50g桃仁，用閃提最優工藝進行提取，平行操作3份，藥材中苦杏仁苷的含有量分別為2.50、2.49、2.50mg/g，可見其工藝穩定性和重復性良好。

1.2.4閃提與乙醇回流提取法對比設計出乙醇回流提取苦杏仁苷的最優工藝:70%乙醇回流提取2次，每次30min，料液比是1∶12(g∶mL)，結果比較見表6。從表6可知，閃式提取法所用的時間比回流提取法所用的時間短，且閃式提取苦杏仁苷的轉移率高于回流提取的轉移率，故閃式提取法優于傳統的回流提取法。

2桃仁多糖的提取

2.1提取工藝分別取閃式提取與回流提取后的藥渣，用藥渣質量30倍量體積的蒸餾水80℃水浴提取多糖兩次，合并濾液，將濾液濃縮至料液比1∶1.5～1∶2(原料重:溶液體積)，加入乙醇使醇體積分數為80%(V/V)進行醇沉，在4℃冰箱中靜置12h，醇沉液離心，下層沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，真空干燥，即得桃仁多糖粗提物。

2.2多糖的測定

2.2.1多糖標準曲線的測定精密稱定干燥至恒定質量的無水葡萄糖對照品33.36mg，加至100mL的量瓶中，加水溶解并定容至刻度作為對照品溶液;精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分別置于具塞試管中，加水補足2mL，各精密加入5%苯酚試液1mL，搖勻，迅速加入硫酸5mL，搖勻放置10min，置40℃水浴中保溫15min，取出，迅速冷卻至室溫，以相應的試劑做空白，在490nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，顯色時多糖質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線:Y=61.103X－0.0817，r=0.9990，結果表明多糖在0.06672～0.3336mg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.2樣品的測定稱取樣品多糖2mg，蒸餾水溶解于25mL量瓶中定容搖勻，精密吸取2mL溶液于具塞試管中，空白對照以蒸餾水代替糖溶液，分別加5%苯酚溶液1mL，再加濃硫酸5mL，搖勻，放置10min，置40℃水浴中保溫15min，取出迅速冷卻到室溫，在波長490nm處測定吸光度，代入標準曲線計算多糖含有量，結果分析:閃式提取法提取苦杏仁苷后的藥渣提取多糖，多糖的出膏率高于回流提取法提取后藥渣中多糖的出膏率，可見閃式提取法將藥材粉碎更有利于多糖的提取。

3討論

3.1苦杏仁苷提取工藝的比較通過正交試驗對閃式提取桃仁中苦杏仁苷工藝的優化，即12倍量70%的乙醇閃式提取1min，與乙醇回流對比，結果顯示閃式提取對藥材有效成分的提取率高，提取時間短，提取效率高，其綠色、環保、高效、經濟等方面的優勢是傳統回流法不能比擬的。

3.2多糖結果分析從回流提取法提取多糖的結果分析，閃式提取苦杏仁苷后的藥渣提取多糖，多糖的出膏率高于回流提取后藥渣提取多糖的出膏率，原因是在閃式提取過程中藥材粒徑更小，從而更有利于有效成分在提取過程中的析出。閃式提取器的主要原理是在植物組織破壞提取法的基礎上，利用高速機械外力迅速破壞植物細胞組織，使組織細胞內部的有效成分與溶劑充分接觸，從而實現有效成分的快速提出。通過本實驗可以看出，閃式提取相對傳統的回流提取具有提取率高，節省時間，操作簡便的特點。然而閃式提取在提取藥材的過程中，藥材粉碎過細，易出現不易抽濾的現象;并且閃式提取操作時間不能太長，單次不能超過2min。因該方法是室溫提取，具有不易破壞有效成分的特點，因此適應于多種有效成分的提取，并且高效節能，是一種有發展潛力的新型提取技術。

作者：吳兆宇 郝鵬飛 馮素香 劉富崗 李建生 李曉玉 單位：河南中醫學院 南陽理工學院