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［摘要］抗生素的出現為感染性疾病的治療和人類健康做出了巨大貢獻。但是隨著抗生素的廣泛應用，尤其是不合理使用，使細菌對抗生素的耐藥現象日趨嚴重。耐藥菌的不斷增加和擴散，嚴重威脅著人類健康。細菌耐藥性問題已是一項亟待解決的全球性難題:常用抗生素對病原菌作用不斷減弱，甚至出現了“超級細菌”;開發(fā)新的有抗菌活性的化學合成藥物難度大、周期長。中藥在我國已有幾千年的歷史，具有資源豐富，不良反應低，不易產生耐藥性等優(yōu)點，故從中藥中開發(fā)新的抗菌和抗細菌耐藥性藥物越來越成為研究熱點。作者就近年來植物中藥抗細菌耐藥性的研究做一個綜述，包括了植物中藥抗常見致病菌的耐藥性研究報道、植物中藥抗細菌耐藥性的作用機制、影響植物中藥抗細菌耐藥性的因素和該領域的展望，希望能為從傳統(tǒng)植物中藥中篩選和開發(fā)抗菌藥物的研究提供參考。

［關鍵詞］中藥;抗菌;細菌耐藥性;抗菌活性

細菌耐藥性是指細菌產生對抗菌藥物不敏感的現象。隨著抗生素的廣泛應用，尤其是不合理使用，細菌耐藥性已經成為全球關注的健康問題。中國既是抗生素生產大國又是使用大國。據2006～2007年度衛(wèi)生部全國細菌耐藥監(jiān)測結果顯示，全國醫(yī)院抗菌藥物年使用率高達74%，而美國等發(fā)達國家使用率只達到22%～25%。另據1995～2007年疾病分類調查，中國感染性疾病占全部疾病總發(fā)病數的49%，其中細菌感染性疾病占全部疾病的18%～21%，也就是說80%以上屬于濫用抗生素。而抗生素的濫用不僅在人身上，在動物上也是同樣情況，中國每年要消耗掉大約6千噸抗生素用于喂養(yǎng)牲畜。當人們宰殺牲畜食用時，殘留的抗生素仍會轉移到人身上，這使抗生素耐藥的情況變得更加嚴重。一方面，常用抗生素對病原菌作用不斷減弱，另一方面，開發(fā)新的有抗菌活性的化學合成藥物難度大、周期長［1-4］。因此，研究者們把關注點投向了資源豐富、安全性高、毒副作用小、且不易產生耐藥性的中藥，希望能從中找到解決細菌耐藥性問題的新途徑或新思路。歷年已有不少關于中藥抗菌的綜述文章，因此作者聚焦于植物中藥抗細菌耐藥性的研究，總結了該領域近幾年的研究進展(表1)，并針對研究現狀提出展望，希望能為從傳統(tǒng)植物中藥中篩選和開發(fā)抗菌藥物的研究提供參考。

1植物中藥抗常見致病菌的耐藥性研究

通常具有清熱解毒功效的植物中藥在體外有一定的抗菌作用。某些解表藥、清熱藥、瀉下藥、利水滲濕藥、補虛藥、止咳藥、開竅藥、收斂藥、消食藥和外用藥等也有抗菌報道。植物中藥的抗菌范圍和抗菌程度各有不同，如麥冬、射干、艾葉、桔梗和側柏葉以抗革蘭陽性菌為主;白頭翁、秦皮、馬齒莧、桑葉等以抗革蘭陰性菌為主［5］。

1.1植物中藥抗金黃色葡萄球菌的耐藥王國俊等［6］研究中藥在左氧氟沙星對金黃色葡萄球菌耐藥突變選擇窗上的影響，研究發(fā)現雙黃連注射劑與左氧氟沙星聯用后可縮小左氧氟沙星對金黃色葡萄球菌的耐藥突變選擇窗，從而降低金黃色葡萄球菌對左氧氟沙星的耐藥性。高詠涵等［7］通過研究環(huán)丙沙星分別聯合中藥五倍子、黃柏和地榆對金黃色葡萄球菌突變選擇窗的影響，研究發(fā)現，環(huán)丙沙星與五倍子、黃柏和地榆聯用，可以明顯降低各自單獨用藥對金黃色葡萄球菌的防耐藥變異濃度，其中聯合黃柏降低其防耐藥變異濃度幅度最大，耐藥突變選擇窗縮小效果最好。王秋紅等［8］發(fā)現線葉菊對耐藥金黃色葡萄球菌具有抑制作用，且最低抑菌濃度(minimuminhibitoryconcentration，MIC)達到0.43g•L－1，初步的機制研究發(fā)現線葉菊通過破壞細菌的細胞壁到達抗耐藥菌作用。劉秀瑋等［9］研究發(fā)現中藥復方制劑———麻魚石黃湯可以治療金黃色葡萄球菌的感染，不論是否為耐藥菌株，均可取得良好效果，并可避免替考拉寧引起的不良反應及長期用藥引起的毒副作用或耐藥性。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)是臨床上常見的毒性較強的細菌。大量文獻表明，MRSA的耐藥機制主要是通過大量表達特殊耐藥蛋白—青霉素結合蛋白2a(PBP2a)，能夠補充或代償被抗菌藥物抑制的PBP2的轉肽酶功能，從而繼續(xù)維持細菌細胞壁合成產生耐藥;產生β-內酰胺酶，促進β-內酰胺酶類抗生素的水解;減少藥物積聚;還可通過改變抗生素的作用靶點、表達修飾酶和過表達藥物靶蛋白產生耐藥［10-15］。而有學者通過研究大黃素對MRSA體內、外抗菌作用及機制研究得出，大黃素具有顯著的體內、外抗MRSA作用，且不易誘導MRSA產生耐藥性［16-18］。此外，劉明的研究還表明，大黃素抗MRSA作用與其降低細胞膜流動性、破壞細胞膜完整性有關，而與其影響細胞壁合成與水解相關基因表達，PBP2a，β-內酰胺酶和藥物積聚無關。王禹等［19］研究發(fā)現MRSA經五倍子、綠茶、防風、丹皮、黃芩、浙貝的含藥血清處理后均能恢復了對β-內酰胺酶胺類抗生素的敏感性，推測其可能通過作用于mecA，femA或其調控因素，影響耐藥基因的表達程度，使PBP2a產生減少或消除，從而達到耐藥性逆轉的作用。鄒丹等［20］發(fā)現鷹嘴豆芽素A本身無抑菌活性，但鷹嘴豆芽素A和環(huán)丙沙星聯合作用后，能使MRSA41577對環(huán)丙沙星的敏感性顯著提高，其作用機制是通過降低MRSA41577菌體內norA基因的表達量，進而減少norA蛋白的表達量，來抑制MRSA41577對環(huán)丙沙星等藥物的排出而恢復其對藥物的敏感性。Hatano等［21］的研究結果顯示茶葉中的表沒食子兒茶酸酯(EGCG)具有抑制MRSA對抗生素耐受的作用。

1.2植物中藥抗銅綠假單胞菌耐藥趙弘毅［22］研究發(fā)現，五倍子對銅綠假單胞菌耐藥質粒的轉移具有消除作用。苗強等［23］研究了白頭翁提取液對銅綠假單胞菌R質粒的消除作用，結果顯示經過白頭翁處理的細菌，R質粒消除率明顯高于由十二烷基磺酸鈉處理的對照組，表明中藥具有很好的耐藥質粒消除作用。該研究比較了中藥在體內體外的消除效果，發(fā)現中藥在體內對于R質粒的消除作用明顯要比體外強。藍鍇等［24］用發(fā)現，魚腥草、夏枯草、黃芩在體外對多重耐藥銅綠假單胞菌有抑制作用，MIC分別為0.0556，0.0483，0.0158g•L－1。方穎等［25］研究，1/16MIC的雙黃連注射液單獨或與1/4MIC加替沙星聯合作用后可減少生物膜內細菌的數量，兩藥合用具有明顯的協同作用。林小靜等［26］研究14種中藥水提物對銅綠假單胞菌的野生菌株和耐藥菌株的體外抑菌作用，研究結果顯示，以黃芩為代表的中藥水提物對銅綠假單胞菌具有顯著的抑菌作用，特別是對耐藥菌株抑菌作用顯著。

1.3植物中藥抗大腸埃希菌耐藥李延鴻等［27］用黃芩、鹽酸小檗堿等中藥對比了中藥單方與復方對大腸埃希菌質粒的消除作用，發(fā)現中藥的加入會消除耐藥R質粒，而且使用復方中藥的效果明顯比使用單方的好。林樹乾等［28］研究發(fā)現五味子水煎液、五味子醇提物對耐環(huán)丙沙星大腸埃希氏菌株有一定的耐藥消除作用。有研究者發(fā)現使用三黃湯、黃連解毒湯和五味消毒飲3種方劑研究表明對大腸埃希菌的耐藥性具有逆轉作用［29-30］。其機制是通過抑制超廣譜β-內酰胺酶(extendedspectrumbeta-lactamases，ESBLs)的活性和減少產量達到逆轉大腸埃希菌耐藥性。雷云［31］研究了清開靈和雙黃連對于耐藥大腸埃希菌的β-內酰胺酶活性的抑制作用。結果顯示，當兩種中藥加入后，細菌的質粒圖譜丟失了一條質粒帶，此外，寧官保等［32］在研究中藥對20種雞源大腸埃希菌耐藥性時也發(fā)現有相同發(fā)現，黃連和雙黃連能使大腸埃希菌質粒圖譜的2條質粒帶丟失。質粒圖譜中質粒帶的丟失說明這些中藥能使細菌的酶活性降低，是其不易產生滅活酶或鈍化酶，進而達到抗耐藥性的效果。劉俊等［33］研究發(fā)現鐮刀菌酸為頭花蓼內生真菌Gibberellaintermedia抗耐藥菌主要活性成分，它對多重耐藥大腸埃希菌、奇異變形桿菌和金黃色葡萄球菌具有逆轉耐藥性作用。

1.4植物中藥抗鮑曼不動桿菌耐藥趙娜等［34］采用k-B法對耐藥性鮑曼不動桿菌做了體外研究，發(fā)現黃連和黃芩對耐藥性鮑曼不動桿菌仍具有很強的抗菌作用，這就說明黃連和黃芩可以解除鮑曼不動桿菌的耐藥。主動外排機制是鮑曼不動桿菌對四環(huán)素和氯霉素耐藥的一種重要機制，翁幸鐾等［35］發(fā)現在2萬g•L－1的濃度下，黃芩和連翹等10種單味中藥對氯霉素和四環(huán)素沒有外排抑制作用。這說明中藥可以抑制鮑曼不動桿菌主動外排，從而達到抗耐藥性作用。覃艷春等［36］黃連和木蝴蝶、馬蹄金水提液和醇提液對多重耐藥性鮑曼不動桿菌有明顯的抗菌作用。劉曉慶［37］發(fā)現多重耐藥菌(multi-drugresistance，MDR)質粒上廣泛攜帶氨基糖苷類修飾酶基因、和甲基化酶基因、可能是多重耐藥的主要機制之一，用五倍子的乙醇提取物對多重耐藥菌抑菌效果明顯甚至可逆轉其多重耐藥性。此外，研究者們通過研究中藥復方制劑在鮑曼不動桿菌的耐藥性研究也有顯著發(fā)現。蔡燕等［38］研究表明復方魚腥草能抑制多種耐藥菌株的生長，這說明復方魚腥草可作為抗鮑曼不動桿菌感染的潛在藥物。戚淑娟等［39］運用通腑泄肺方進行體外抑菌情況研究，結果顯示，通腑泄肺方含藥血清的中高劑量組有體外抑菌作用，能增強原本耐藥的抗菌藥物的敏感性，從而達到抗耐藥菌的作用。張怡敏［40］通過研究常見十種中藥和中藥復方制劑，發(fā)現中藥和中藥復方制劑對多重耐藥鮑曼不動桿菌具有抗菌作用，這說明中藥和中藥復方制劑可以減弱或者逆轉鮑曼不動桿菌的多重耐藥性。

2植物中藥抗細菌耐藥性的機制植物中藥抗菌作用機制的研究

主要是仿照西醫(yī)藥理學思路，提取分離出中藥中的有效成分，以有效成分為基礎來研究其抗菌的作用機制。其主要的抗菌機制有:

2.1影響細菌生物膜通透性，起到直接殺滅細菌的作用張慧蕓等［41］發(fā)現丁香提取物主要通過破壞細菌的細胞膜起到殺菌作用，陳章寶［42］發(fā)現掌葉竭子草中香草酸能抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成，并能部分破壞己形成的生物被膜，增強對金黃色葡萄球菌的抗菌能力。孫峋等［43］研究發(fā)現迷迭香酸可改變細菌細胞膜的通透性，導致還原糖和蛋白質的滲漏而影響細胞代謝，通過抑制DNA聚合酶的活性而影響DNA復制，從而發(fā)揮抑菌作用。謝林利［44］等人采用倍比稀釋法研究黃芩苷、黃芩素對銅綠假單胞菌生長的影響，發(fā)現黃芩苷和黃芩素對細菌膜的形成有明顯的抑制作用，從而抑制細菌的黏附性和生長。

2.2抑制蛋白質和核酸的合成，干擾細菌的代謝過程劉永松等［45］運用了多種生化檢測方法來跟蹤和檢測細菌對糖和蛋白質代謝，發(fā)現百蕊草素能夠顯著抑制金黃色葡萄球菌對葡萄糖和蛋白質的代謝，這就提示百蕊草素是通過改變細菌的代謝機制，破壞或抑制了其對周圍物質選擇性通透性，干擾或破壞金黃色葡萄球菌內氧化還原狀態(tài)，從而影響其新陳代謝來達到抗菌作用。江震獻等［46］通過研究蝎子草醇提浸膏對菌體生長曲線、菌體可溶性蛋白的表達和菌體核酸合成等方面來探討其抗菌機制，研究發(fā)現，蝎子草抗菌機制可能通過抑制菌體可溶性蛋白的表達和菌體核酸的合成等方面來實現抑制金黃色葡萄球菌的生長。此外，劉曉軍等［47］發(fā)現構樹葉提取物主要通過抑制金黃色葡萄球菌蛋白質合成來發(fā)揮其抑菌效果。錢麗紅等［48］發(fā)現茶多酚可以阻礙細菌蛋白質的正常表達，使其影響細菌內部的結構組成以及酶的催化活性，最終導致細菌正常生理功能喪失，起到抗菌的作用。

2.3抑制細菌代謝過程所需酶的活性總黃酮具有抗菌作用［49］，曾春暉等［50］發(fā)現廣西總黃酮可能通過降低細菌表面疏水性、增加細菌通透性使細菌細胞壁形態(tài)發(fā)生缺失或異常，并通過抑制細菌脫氫酶活性，削弱甚至終止細菌的新陳代謝來發(fā)揮抗菌作用。云寶儀等［51］對黃芩素的抑菌活性機制做了初步研究，結果顯示，黃芩素能抑制三羧酸循環(huán)中的琥珀酸脫氫酶和蘋果酸脫氫酶的活性，其抑制率分別可達到56.2%和57.4%。此外，黃芩素還能抑制DNA拓撲異構酶I和DNA拓撲異構酶Ⅱ的活性，當黃芩素的濃度為0.2mmol•L－1時，DNA拓撲異構酶I和DNA拓撲異構酶Ⅱ的活性可被完全被抑制。當兩種酶的合成受到抑制時，會導致核酸的合成受阻，最終達到抑菌的作用。植物中藥對多種耐藥菌有抗菌或者增敏作用，其作用機制除了以上對常規(guī)菌的作用機制外，還包括:①中藥抑制細菌的主動外排系統(tǒng)來產生抗耐藥性的作用，②中藥能通過消除耐藥質粒來達到抗耐藥性的效果［52］。此外，研究發(fā)現，細菌對中藥、尤其是中藥復合制劑不易產生耐藥性，這可能因為中藥復合制劑配伍時能在多靶點多水平多途徑發(fā)揮抗菌或增敏的作用。在中醫(yī)理論指導下進行辨證論治，隨證加減，這個過程可能對耐藥菌有增敏或逆轉作用，恢復對藥物的敏感性。

3影響植物中藥抗菌活性的因素

中藥因所含的活性成分受生長地域、不同季節(jié)、植物不同部位、不同提取方法的影響，因此，不同的提取方式、藥物部位和配伍方式都會對中藥抗菌活性造成的影響。

3.1不同藥物配伍原則的影響根據中醫(yī)五行原則，藥效相似的中藥能起協同作用增加其抑菌效果。如麻黃和桂枝。從王文花等［53］對5種中草藥體外抗白色念珠菌的實驗研究，可以看出黃連、黃柏和黃芩單藥提取液對白色念珠菌有較強的抑菌效果。在配伍藥物中，黃連配伍其他藥物的藥物組均顯示出了一定的抑菌效果。其中以黃連+知母、黃連+黃柏這兩個藥物組抑菌效果最強。此外，李芳等［54］發(fā)現艾葉+黃芩、艾葉+蒲公英配伍比單味藥使用的抑菌效果好，其中艾葉黃芩配伍制劑對乙型溶血性鏈球菌抑菌效果最好，MIC達到0.01563g•L－1。朱文娟等［55］先測定白花蛇舌草、金錢草、丹參和甘草各抑菌中藥材的抑菌性，再將這幾種中藥材進行配伍，結果發(fā)現4種抑菌中藥材配伍后，對細菌、霉菌和酵母菌抑菌作用有明顯的協同效應。白花蛇舌草、金錢草、丹參和甘草配伍后，對細菌和霉菌抑菌的總體效果相當于幾種藥材中抑菌性最強藥材的抑菌效果，而對酵母菌的總體抑菌作用，達到抑菌性最強藥材抑菌效果的2倍。楊紅文等［56］通過研究蒲公英、黃芩等8種常見中草藥的4種配伍的體外抑菌性能及聯合抑菌關系，發(fā)現各配伍對選定病原菌均有較強抑菌效果，以(黃柏+蒲公英+黃芪+烏梅)配伍抑菌效果最好，對大腸埃希菌、副傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌MIC分別達6.25%，3.13%，6.25%和3.13%。反之，藥效相反的中藥則會損壞其原有的藥效甚至產生毒性，如甘草和藜蘆配伍會產生劇烈的毒性作用，人參和萊菔子配伍會使人參的藥效減弱。

3.2不同的提取方式的影響中藥由于本身的特殊性，用不同的提取方式和不同的有機溶劑提取出的提取物顯示出的抗菌活性也各不相同，丁艷嬌等［57］做的體外抑菌試驗表明，用乙醇熱提和冷提的箭根薯熱提取物抗耐藥菌活性明顯高于冷提。此外，也有文獻報道用不同方法提取中藥有效成分的抑菌效果比較發(fā)現，醇提法最優(yōu)，其次為超聲波提取法，水提法最差［58］。采用醇提法提取的中藥提取物普遍比水提法提取的抑菌效果好，這可能是醇提法和超聲法能使中藥有效成分更好溶出。采用不同的有機溶劑提取的中藥抑菌效果也會不同，謝俊杰等［59］用乙酸乙酯、正丁醇、水提法提取粗糠柴，發(fā)現乙酸乙酯層、正丁醇層和水層對銅綠假單胞菌及其耐藥菌有較好的抑菌活性，尤以乙酸乙酯層活性最好，而粗糠柴的石油醚層沒有活性。劉計權等［60］綿馬貫眾粗提物用不同有機溶劑萃取出的萃取物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等供試菌活性不同，其中以三氯甲烷萃取部位和乙酸乙酯萃取部位的抑菌活性較大，水萃取部位的抑菌活性最小。而葉莉等［61］研究發(fā)現大薊正丁醇提取物對革蘭陰性菌有抑菌作用，但大薊水提取物、乙酸乙酯提取物卻無抑菌作用。此外，同種中藥的不同部位提取出的有效成分對抗菌也有影響。Rattanachuikunsopon等［62］人將芫荽的根莖葉揮發(fā)油分別提取出來做抗菌對比，結果發(fā)現，根莖葉揮發(fā)油對大腸埃希菌和變型鏈球菌均有抗菌活性，但根提取物活性最好，莖葉的次之。楊宏博等［63］發(fā)現黃連同一提取部分對不同菌有不同抑制作用，且抑制順序均為金黃色葡萄球菌＞志賀氏痢疾桿菌＞大腸埃希菌。

4植物中藥抗細菌耐藥性的展望

隨著抗生素的廣泛使用甚至濫用，人類健康越來越面臨著耐藥菌的威脅。一方面，常用抗生素對病原菌作用不斷減弱，另一方面，開發(fā)新的有抗菌活性的化學合成藥物難度大、周期長。因此，研究者們把更多的注意力轉向了我國已有幾千年歷史的瑰寶--中藥。我國中藥品種繁多，植物中藥資源尤其豐富，利用植物中藥及其有效成分來控制細菌感染及抗細菌耐藥性的應用前景廣闊。從植物中藥研究和開發(fā)抗菌、尤其是抗耐藥菌藥物時，對中藥的配伍和中藥復方制劑的研究是一個重點。這是因為中藥中的一些有效成分可以相互協同，能更好地增效殺菌。此外，細菌產生耐藥性機制多樣。多種中藥的配伍和中藥復方制劑中每種藥物的有效成分和抗菌機制不一樣，可以多靶點多水平多層次起作用，共同抑制耐藥細菌的存活和生長。其次，植物中藥的提取工藝也非常關鍵，采用不同的提取方法對有效成分不一樣，對抑菌活性各有不同。因此，筆者只有改進提取工藝，把植物中藥中的有效成分充分提取出來，更好地利用中藥資源，到達抗菌、尤其是抗耐藥菌的作用。此外，植物中藥在抗菌領域的廣泛應用，前提是需要加強植物中藥的基礎研究，加強植物中藥及其有效成分抗菌作用機制研究，尤其是加強對中藥方劑中各成分配伍使用后增效減毒的作用機制研究，為其深入廣泛應用提供理論基礎。應用現代技術從中藥中分離有效成分、科學組方，研制新劑型，創(chuàng)制新工藝，開發(fā)出優(yōu)質、高效、安全、穩(wěn)定的防治細菌性及抗耐藥性的中藥方劑。相信在不久的將來，中藥抗菌、尤其抗耐藥菌的研究將更深入、更成熟。

作者：黃梅1；2；譚余慶1；羅俊2；沈建英1 單位：1.中國中醫(yī)科學院中藥研究所，2.貴州醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院