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【摘要】目的建立聯苯雙酯固體脂質納米粒（DDBSLN）體外釋放的評價方法。方法考察DDBSLN在不同介質中的平衡溶解度，并篩選出pH7.4磷酸鹽緩沖液+40%(體積分數）乙醇作為合適的釋藥介質，采用動態透析釋藥法考察DDBSLN和藥物溶液的體外釋藥情況。結果DDBSLN在最初的0.5h內出現了突釋現象，此后DDBSLN的釋放符合一級動力學方程。結論與藥物溶液相比，DDBSLN具有明顯的緩釋效果。

【關鍵詞】聯苯雙酯固體脂質納米粒體外釋藥動態透析釋藥法

聯苯雙酯(DDB)系合成五味子丙素的中間體，是20世紀80年代我國自行研制成功的抗肝炎藥。由于其降轉氨酶作用顯著，同時還能促進肝臟再生，具有保肝、護肝的功能，該藥在我國及其他多個亞洲國家廣泛應用于乙肝及丙肝的治療［1］。本文采用乳化蒸發-低溫固化法［2］制備了聯苯雙酯固體脂質納米粒（DDBSLN），然后用動態透析法考察其體外釋藥情況，為體內研究提供了依據。

1儀器及試劑

1.1儀器戴安P680分析型高效液相色譜儀(美國)；HJ3恒溫磁力攪拌器（江蘇金壇醫療器械廠）；UV2800紫外可見分光光度計（尤尼柯儀器有限公司）；AG245型電子天平（德國MettlerToledo公司）。

1.2試劑聯苯雙酯（浙江萬邦藥業有限公司，批號：070301）；聯苯雙酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0192950150）；DDBSLN（自制）；甲醇（色譜純）；透析袋(截留分子量：8000～14000)；其他試劑均為分析純。

2實驗方法

2.1DDBSLN的制備［3］

稱取DDB5mg、單硬脂酸甘油酯50mg、卵磷脂80mg溶于適量的無水乙醇中，于（75±2）℃水浴下形成有機相；另取泊洛沙姆188150mg溶于相同溫度的水中，構成水相；在攪拌（1000r/min）下將有機相用針頭注入水相中，整個過程保持溫度在脂質材料熔點以上。攪拌2h，濃縮體積至原來的1/2。將所得的半透明體系快速分散于0～2℃水相中，繼

續攪拌1h，即得固體脂質納米粒混懸液。

2.2分析方法的建立

2.2.1色譜條件DDB的色譜條件參見文獻［3］。

2.2.2標準曲線的繪制精密稱取DDB對照品10mg，置50mL的容量瓶中，用2mL乙腈溶解，再加釋藥介質［pH7.4磷酸鹽緩沖液(pH7.4PBS)+40%乙醇］定容至刻度，作為儲備液。分別吸取上述儲備液0.125、0.25、0.5、0.15、4、7、10mL置100mL的容量瓶中，釋藥介質定容至刻度，使其質量濃度為0.25、0.5、1、3、8、14、20μg·mL-1。以峰面積(A)對質量濃度(ρ)進行線性回歸，得回歸方程

A=0.7088ρ+0.0535，r=0.9999。

2.3體外透析釋藥法［4］

2.3.1釋藥介質的篩選采用飽和溶液法測定了DDB在幾種不同介質中的平衡溶解度。將過量的DDB原料藥分別加至裝有pH7.4PBS+40%乙醇、40%PEG400水溶液+0.5%吐溫80溶液、0.45%十二烷基硫酸鈉溶液（SDS）、生理鹽水、蒸餾水的10mL具塞試管中，使均達到過飽和狀態，然后放入恒溫37℃水浴中，振搖，定時取樣經0.45μm微孔濾膜濾過后，取續濾液以紫外可見分光光度法測定吸光度，至連續3次測得的吸光度基本恒定時停止取樣。將各自的吸光度代入各自標準曲線，計算濃度，即為DDB在各種不同介質中的平衡溶解度。結果見表1。

表1聯苯雙酯在不同介質中的平衡溶解度（略）

br1Solubilityofbifendateindifferentmedia

由表1可知，DDB在pH7.4PBS+40%乙醇中的溶解度最大，并能滿足體外釋藥的要求，所以選擇pH7.4PBS+乙醇的體系作為釋藥介質。

2.3.2DDB在不同比例的PBS/乙醇體系中溶解度的考察將過量的DDB原料藥分別加至裝有pH7.4PBS+5%乙醇、pH7.4PBS+10%乙醇、pH7.4PBS+20%乙醇、pH7.4PBS+40%乙醇的10mL具塞試管中，均達到過飽和狀態。但是當乙醇含量過高時，會導致體外釋藥和體內釋藥的不吻合。將它們放入恒溫37℃水浴中，振搖，定時取樣經0.45μm微孔濾膜濾過后，取續濾液以紫外可見分光光度法測定吸光度，至連續3次測得的吸光度基本恒定時停止取樣。將各自的吸光度代入各自標準曲線，計算濃度，即為DDB在各種不同介質中的平衡溶解度。結果見表2。

表2聯苯雙酯在不同比例的PBS+乙醇體系中的溶解度（略）

br2SolubilityofbifendateinmediacompromisedofPBSandCH3CH2OHatdifferentratio

由表2可知，DDB在pH7.4PBS+40%乙醇中的溶解度最大，藥物的溶出更好，所以選擇pH7.4PBS+40%乙醇的體系作為釋藥介質。

2.3.3DDB在釋放介質中的穩定性考察采用高效液相色譜法測定納米粒的釋藥情況，考察DDB在釋放介質中的穩定性。用釋藥介質（pH7.4PBS+40%乙醇）配制含DDB(20μg/mL)的樣品液，測定其在0～48h間的峰面積變化，其RSD為1.37%(n=3)，表明DDB在該釋藥介質中的穩定性滿足要求。

2.3.4納米粒的釋放曲線將一定體積的DDBSLN混懸液(藥物量約為1mg)，置于分子截留量為8000～14000的透析袋中，用透析夾夾緊，放入250mL的釋藥介質(pH7.4PBS+40%乙醇溶液)中，以100r·min-1的速度攪拌，于（37±0.5）℃動態透析，平行操作3份。分別于釋放開始后的10、30min以及1、2、4、6、8、10、12、24h精密吸取2.0mL的釋放液，同時補加緩沖液。將所取樣液經0.45μm的微孔濾膜過濾后,采用HPLC測定釋放介質中聯苯雙酯的濃度，計算累計釋放量。結果見圖1。新晨

圖1聯苯雙酯溶液及固體脂質納米粒的體外釋放曲線（略）

Figure1Averagecurveofaccumulatedreleaseofbifendatefrombifendatesolidlipidnanoparticlesandbifendatesolutioninmedia

2.3.5釋藥機理的研究目前解釋緩控釋制劑的釋藥動力學方程主要是在Ficks擴散定律［5］的基礎上，進行了相關的假設后，給出的近似解釋。通過實驗先求出各時間點的累積釋放量，采用5種常見的釋藥模型對DDBSLN的體外釋放進行擬和。觀察相關系數，選擇最佳擬合方程。結果見表3。

由表3可知，擬合結果較好的是一級釋藥、Weibull方程、Higuchi方程。其中以一級釋藥方程擬合最佳，釋放初期有藥物突釋現象的產生，隨后藥物呈現持續而緩慢的釋放。

表3聯苯雙酯固體脂質納米粒體外釋藥的擬合結果（略）

br3Regressingresultsfordissolutionofbifendatesolidlipidnanoparticles

3討論

由圖可知DDBSLN在釋放介質中完全釋放約需24h；而在DDB溶液中，大部分藥物在約8h時都已擴散出來，說明透析袋對DDB的擴散阻礙作用較小，滿足透析法釋藥的條件。由所測得的釋藥曲線可以觀察到初期的藥物突釋現象，隨后SLN中的藥物呈持續緩慢釋放,體外釋藥符合一級動力學方程。由釋放結果可知，在最初的0.5h，釋放了藥物總量的5.86%，小于藥典規定的40%的上限。這部分釋放的藥物，主要來自于沒有包裹到脂質材料中的游離藥物和吸附于脂質納米粒表面的藥物。新晨

制劑體外釋藥動力學的研究，常用的方法有透析袋法、超速離心法、超濾、生物膜擴散技術等，其中透析袋擴散技術是較常用的方法。但有文獻報道［6］，由于納米粒在透析袋中未被釋藥介質充分稀釋，沒有滿足漏槽條件，得到的結果往往于釋藥速度無關，僅與藥物在納米粒與透析液的分配行為有關。在本實驗中，由于DDBSLN載藥量較低，250mL的釋藥介質即可使DDBSLN膠體溶液滿足漏槽條件。

本文采用經典的動態透析技術測定DDBSLN的體外釋藥情況,進行了有關方法學考察，包括釋藥介質的篩選、藥物在介質中的穩定性考察、藥物溶液在透析袋內的透析情況及藥物含量的測定等，均滿足有關實驗要求。由本文結果可知，與DDB藥物溶液相比，DDBSLN混懸液具有一定的緩釋效果。

【參考文獻】

［1］王彩福，張育軒，于惠欽，等．聯苯雙酯治療病毒性肝炎382例臨床療效觀察［J］．天津醫藥，1982，10(2)：93-96.

［2］陳大兵，呂萬良，楊天智,等．紫杉醇長循環固態脂質納米粒的制備和體內外的研究［J］．藥學學報，2002，37(1)：54-58.

［3］張洪，詹新安，成蓓，等.聯苯雙酯固體脂質納米粒的制備［J］.廣東藥學院學報，2008，24（1）：37-40.

［4］符旭東，高永良，平其能．石杉堿甲緩釋微球的體外釋放度及其體內外相關性研究［J］．醫藥導報，2005，24(11)：994-996.

［5］盧元東,王登明．膜控釋藥的機理及影響因素［J］．國外醫藥：合成藥、生化藥、制劑分冊,1992，13(5)：296-299.

［6］WASHINGTONC.Evaluationofnonsinkdialysismethodsforthemeasurementofdrugreleasefromcolloids:effectofdrugpartition［J］．IntJPharm,1989，56：71-74.