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【摘要】目的建立益腎養(yǎng)元合劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別益腎養(yǎng)元合劑中的何首烏、金櫻子、狗脊；采用高效液相色譜法測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中二苯乙烯苷的含量。結(jié)果在薄層色譜中檢出了何首烏、金櫻子、狗脊；二苯乙烯苷進(jìn)樣量在25.82～826μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝1.0000），平均回收率為102.0%，RSD為0.83%（n＝6）。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為益腎養(yǎng)元合劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
【關(guān)鍵詞】益腎養(yǎng)元合劑何首烏金櫻子狗脊薄層色譜法二苯乙烯苷高效液相色譜法
益腎養(yǎng)元合劑收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第二十冊(cè),具有補(bǔ)益肝腎、健脾益氣、澀精止遺的功效，用于肝腎不足、脾氣虛弱、面色萎黃、倦怠納差、腰膝酸痛、遺精夢(mèng)泄等［1］。
方中何首烏為主藥，原藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅收載了化學(xué)鑒別、狗脊藥材的薄層鑒別和2，3，5，4′?菜聶腔?二苯乙烯??2??O?撥陋?D?財(cái)咸煙擒眨ㄒ韻錄虺啤岸?苯乙烯苷”）的含量測(cè)定方法。本文為進(jìn)一步提高該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了方中何首烏、金櫻子的薄層鑒別，并對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中的狗脊薄層鑒別和二苯乙烯苷含量測(cè)定方法進(jìn)行了改進(jìn)，報(bào)道如下。
1儀器與試藥
益腎養(yǎng)元合劑（批號(hào)：C08001A、C08002A、C08003A、F03001B）均為廣州潘高壽藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品；何首烏對(duì)照藥材（批號(hào)：120934??200507）、金櫻子對(duì)照藥材（批號(hào)：1047??9701）、狗脊對(duì)照藥材（批號(hào)：121071??200502）及二苯乙烯苷（批號(hào)：0844??200003）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所；硅膠G預(yù)制板由青島海洋化工公司生產(chǎn)；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。
Agilent1200高效液相色譜儀，色譜柱（AgilentEclipseXDB??C184.6mm×150mm,5μm），梅特勒十萬分之一天平。
2薄層鑒別
2．1何首烏的鑒別
取本品20mL（批號(hào)：C08001A、C08002A、C08003A），加乙酸乙酯20mL，振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對(duì)照藥材0.25g，加乙酸乙酯50mL，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。再取不含何首烏的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。吸取上述3種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯?慘宜嵋陰オ布姿幔ㄌ寤?比5∶5∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。再噴以磷鉬酸濃硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾，見圖1。
1～3.供試品溶液；4.對(duì)照藥材溶液；5.陰性對(duì)照溶液
圖1何首烏的TLC圖（A.紫外光燈365nm下;B.日光下）（略）
Figure1TLCofRadixPolygoniMultiflori(A.underultravioletlightat365nm;B.underthesunlight)
2.2金櫻子的鑒別
取金櫻子對(duì)照藥材7g，加水50mL，煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20mL，另取不含金櫻子的陰性樣品20mL，按“2.1”項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法分別制備對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液。吸取“2.1”項(xiàng)下的供試品溶液及上述2種溶液各6～10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯?布狀吉菜?（體積比9∶0.8∶0.6）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色主斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾，見圖2A。
2.3狗脊的鑒別
取狗脊對(duì)照藥材3g，加水50mL，煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20mL，另取不含狗脊的陰性樣品20mL，按“2.1”項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法分別制備對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液。吸取“2.1”項(xiàng)下的供試品溶液及上述2種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷?脖?酮?布姿幔ㄌ寤?比4∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%氫氧化鈉乙醇溶液，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾，見圖2B。
1～3.供試品溶液；4.對(duì)照藥材溶液；5.陰性對(duì)照溶液
圖2金櫻子(A)和狗脊（B）的TLC圖（略）
Figure2TLCofFructusRosaeLaevigatae（A）andRhizomaCiboth(B)
3含量測(cè)定
3.1色譜條件
色譜柱：AgilentEclipseXDB??C18（4.6mm×150mm,5μm），流動(dòng)相：甲醇??4%(體積分?jǐn)?shù))醋酸溶液（體積比20∶80）；流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)以二苯乙烯苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。
3.2溶液的制備
3.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，即得。
3.2.2供試品溶液的制備精密量取本品2mL，置50mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。
3.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取不含何首烏的陰性樣品，按“3.2.2”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。
3.3專屬性試驗(yàn)
分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照對(duì)二苯乙烯苷的測(cè)定無干擾，說明方法專屬性強(qiáng)。見圖3。
A.對(duì)照品；B.樣品；C.陰性
圖3HPLC圖（略）
Figure3HPLCchromatograms
3.4線性關(guān)系的考察
精密稱取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成質(zhì)量濃度為1.291、2.581、5.163、10.325、20.650、41.300μg/mL的溶液，分別吸取20μL，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行回歸，得回歸方程A=83.0053ρ+2.6012，表明二苯乙烯苷進(jìn)樣量在25.82～826μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝1.0000）。
3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取同一批供試品溶液各20μL，按上述色譜條件，每隔1h測(cè)1次峰面積，結(jié)果其RSD值為1.20%，表明二苯乙烯苷在7h內(nèi)穩(wěn)定。
3.6重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批樣品（批號(hào)：F03001B）共6份，分別按上述方法測(cè)定二苯乙烯苷的含量，結(jié)果其RSD值為0.25%,表明方法重現(xiàn)性良好。
3.7回收率試驗(yàn)
分別精密吸取已知含量的本品1批（批號(hào)：F03001B，含量為0.2153mg/mL）1mL6份，分別精密加入二苯乙烯苷對(duì)照品溶液（0.2118mg/mL）1mL，按“3.2.2”項(xiàng)方法制得供試品溶液，測(cè)定二苯乙烯苷含量，計(jì)算平均回收率為102.0%，RSD為0.83%。結(jié)果見表1。
3.8樣品的測(cè)定
取3批樣品（批號(hào)：C08001A、C08002A、C08003A），分別按“3.2.2”項(xiàng)方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樣品中二苯乙烯苷的含量分別為：0.1821、0.1968、0.1547mg/mL。
4討論
4.1本文采用的方法盡可能與藥典中相應(yīng)的藥材薄層鑒別方法一致，并依據(jù)產(chǎn)品的實(shí)際情況進(jìn)行了展開條件的優(yōu)化。何首烏采用藥典中的苯?慘掖頰箍?系統(tǒng)時(shí)，背景影響大，特征熒光斑點(diǎn)易被掩蓋；經(jīng)摸索發(fā)現(xiàn)，采用本文的方法，熒光斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。根據(jù)文獻(xiàn)［2，3］中的狗脊藥材的鑒別方法操作，發(fā)現(xiàn)特征斑點(diǎn)熒光較弱，易受干擾，經(jīng)摸索發(fā)現(xiàn)，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%NaOH乙醇溶液進(jìn)行顯色，其特征點(diǎn)熒光強(qiáng)度加強(qiáng)，利于觀察，較原方法提高了特征斑點(diǎn)檢出的靈敏度。新晨
表1回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）
br1Recoveryresults
4.2薄層色譜法鑒別時(shí),分別用自制板及預(yù)制板同時(shí)展開、不同的溫度或濕度環(huán)境下展開，層析結(jié)果表明：自制板與預(yù)制板的層析結(jié)果差別無顯著性，不同的溫度和濕度的環(huán)境下展開均可檢出何首烏、金櫻子、狗脊等藥材特征斑點(diǎn)。本方法采用同一供試品溶液進(jìn)行了4種藥材的薄層鑒別（補(bǔ)骨脂的鑒別條件與藥典一致，本文不再報(bào)道），操作非常簡(jiǎn)便。
4.3由于二苯乙烯苷化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，需避光操作，原標(biāo)準(zhǔn)采用萃取和蒸干的操作［3］，操作步驟多，操作過程中二苯乙烯苷易損失，本文采用直接稀釋法進(jìn)行樣品處理，操作簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。曾使用流動(dòng)相甲醇?菜?（體積比25∶75）［4］，但有一小峰與主峰分離較差，采用本文所述的流動(dòng)相，分離度符合藥典要求。
4.4曾考察了Dikmakromasil、ApolloC18和AgilentEclipseXDB??C183種色譜柱對(duì)同一批號(hào)樣品（批號(hào)：F03001B）的影響,結(jié)果3種色譜柱的測(cè)定結(jié)果基本一致，表明本法的耐用性好。
【參考文獻(xiàn)】
［1］WS3－B－3971－98.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn):衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第二十冊(cè)［S］.1998:290.
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