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【摘要】整合子是近年來(lái)在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的一種可移動(dòng)性基因元件，通過(guò)位點(diǎn)特異性重組捕獲并表達(dá)外源性基因盒，是導(dǎo)致耐藥基因在細(xì)菌間水平播散的重要原因。本文就整合子的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)、分類；基因盒的結(jié)構(gòu)、來(lái)源；整合子對(duì)基因盒的捕獲、剪切與表達(dá)；整合子與細(xì)菌耐藥性的關(guān)系以及整合子的檢測(cè)等方面進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】整合子；基因盒；耐藥基因；耐藥性

ABSTRACTIntegronsaremobileDNAelementsthatwerefoundinbacteriarencently.Bycapturingexogenousgenecassettesthroughsitespecificrecombinationandensuringtheexpressionofgenescontainedingenecassettes,integronsplayedimportantrolesinthehorizontaldisseminationofdrugresistancegenesinbacteria.Thispaperrevieweddiscovery,structureandclassificationofintegrons,structureandoriginsofgenecassettes,thecapture,deletionandexpressionofgenecassettesbyintegrons,therelationshipbetweenintegronsanddrugresistance,andthedetectionofintegrons.

KEYWORDSIntegron;Genecassette;Drugresistancegene;Drugresistance

隨著抗生素的廣泛使用，細(xì)菌在抗生素的選擇壓力下耐藥菌株不斷產(chǎn)生，其中細(xì)菌通過(guò)基因的水平轉(zhuǎn)移，獲得外源性耐藥基因是加快臨床耐藥菌株產(chǎn)生的重要原因。與細(xì)菌耐藥基因水平轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的遺傳結(jié)構(gòu)有質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合型噬菌體以及近年來(lái)在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的一種天然的克隆表達(dá)系統(tǒng)［1］——整合子(integron)。整合子通過(guò)位點(diǎn)特異性重組捕獲外源基因盒(genecassettes)并使之表達(dá)，同時(shí)整合子可位于質(zhì)粒上，或自身作為轉(zhuǎn)座子的一個(gè)組成部分而參與轉(zhuǎn)移［2］，使耐藥基因發(fā)生播散。整合子因其在細(xì)菌耐藥基因水平轉(zhuǎn)移中的重要作用而受到研究者的關(guān)注。

1整合子的發(fā)現(xiàn)

19世紀(jì)80年代研究者在對(duì)耐藥質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子進(jìn)行系統(tǒng)研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)在R100(Tn21)、R46(IncN)、R388(IncW)、pLMO20、pSa等不同來(lái)源相互獨(dú)立的質(zhì)粒或轉(zhuǎn)座子上，不同耐藥基因兩側(cè)的序列具有相似的限制性酶切圖譜，推測(cè)其可能是一個(gè)移動(dòng)性基因元件［3～5］。1989年Stokes等［5］通過(guò)比對(duì)Tn21的aadA和R46的oxa2aadA兩側(cè)的序列并結(jié)合限制性酶切圖譜，初步確定了3′保守末端和5′保守末端的范圍。由于保守末端的外緣不具有反向末端重復(fù)序列、正向末端重復(fù)序列或靶位點(diǎn)重復(fù)序列等轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，認(rèn)為其是一種新的移動(dòng)性基因元件并建議將其命名為“DNA整合元件”(DNAintegrationelements)或簡(jiǎn)稱為“整合子”。

2整合子的結(jié)構(gòu)和分類

2.1整合子的結(jié)構(gòu)

整合子的結(jié)構(gòu)如圖1所示，由3個(gè)部分組成：5′保守末端(5′conservedsegment,5′CS)、3′保守末端(3′conservedsegment,3′CS)和兩者之間的可變區(qū)(variableregion)。5′CS是整合子的基本結(jié)構(gòu)，包括編碼整合酶(integrase,IntI)的基因(intI)、整合子重組位點(diǎn)attI和整合子可變區(qū)啟動(dòng)子(Pant)［6］。IntI屬于酪氨酸整合酶家族，催化基因盒在整合子重組位點(diǎn)attI和基因盒重組位點(diǎn)attC之間的整合和剪切。整合酶基因帶有自己的啟動(dòng)子Pint。attI位于整合酶基因的上游，是外源基因盒整合到整合子上的位點(diǎn)。啟動(dòng)子Pant指導(dǎo)下游可變區(qū)中自身不帶有啟動(dòng)子的基因盒中基因的表達(dá)。啟動(dòng)子Pant的方向與Pint的方向相反。可變區(qū)帶有不同數(shù)量和功能的基因盒，但可變區(qū)并不是整合子的基本結(jié)構(gòu)，有的整合子在5′CS和3′CS之間沒(méi)有基因盒插入［7］。3′CS因整合子的種類不同而異。

2.2整合子的分類

整合子常根據(jù)intI基因DNA序列的不同進(jìn)行分類，研究較多的主要有以下4類：

第一類整合子最常見(jiàn)，從臨床菌株中發(fā)現(xiàn)的整合子大多屬于此類。其整合酶IntI1含有337個(gè)氨基酸。5′CS有編碼IntI1的基因intI1、重組位點(diǎn)attI1和啟動(dòng)子Pant。其中Pant位于IntI1的編碼框內(nèi)，有的整合子還有啟動(dòng)子P2［1］。大多數(shù)第一類整合子的3′CS包括3個(gè)開(kāi)放讀碼框(ORF)：磺胺耐藥基因(sul1)，季銨鹽化合物及溴乙錠的耐受基因(qacE△1)及功能不明的ORF5［8］。可變區(qū)帶有不同數(shù)量的基因盒，大部分是編碼各種抗生素抗性的耐藥基因盒。

第二類整合子存在于Tn7或它的衍生物上，其整合酶基因intI2被一個(gè)終止密碼子中斷，是缺陷的整合酶基因，它的產(chǎn)物IntI2約有318個(gè)氨基酸，與IntI1有40%的同源性［9，10］。IntI2不能催化基因盒的整合與剪切。目前僅發(fā)現(xiàn)核苷轉(zhuǎn)移酶基因aadAla、甲氧芐啶耐藥基因dhfr及鏈絲霉素耐藥基因sat位于該類整合子上。現(xiàn)已在沙門菌、志賀菌和不動(dòng)桿菌中發(fā)現(xiàn)第二類整合子。

第三類整合子最初由Arakawa在耐碳青霉烯類抗生素的粘質(zhì)沙雷菌的質(zhì)粒上發(fā)現(xiàn)的，其整合酶IntI3有346個(gè)氨基酸，與IntI1有60.9%的同源性。目前僅在粘質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌等細(xì)菌中分離出第三類整合子，只發(fā)現(xiàn)碳青霉烯耐藥基因位于該整合子上［11，12］。

&

nbsp;以上三類整合子與細(xì)菌耐藥基因的播散密切相關(guān)，常被合稱為耐藥整合子(resistanceintegron，RI)。

第四類整合子是Mazel等［13］在霍亂弧菌基因組中首次發(fā)現(xiàn)，其整合酶IntI4有320個(gè)氨基酸，與前三類整合子的整合酶有45%～50%的同源性。此類整合子的可變區(qū)可帶有上百個(gè)基因盒，故又稱為超級(jí)整合子(superintegron，SI)。SI基因盒中的基因除了與細(xì)菌耐藥有關(guān)外，還與細(xì)菌的代謝和毒力有關(guān)［14］。除霍亂弧菌外,在梅氏弧菌、費(fèi)氏弧菌、擬態(tài)弧菌等細(xì)菌的染色體基因組中也發(fā)現(xiàn)了超級(jí)整合子。

此外，可根據(jù)整合子是否具有可移動(dòng)性將整合子分為移動(dòng)性整合子(mobileintegrons)和超級(jí)整合子［14］。移動(dòng)性整合子與移動(dòng)性基因元件結(jié)合在一起，可伴隨移動(dòng)性基因元件一起移動(dòng)，與細(xì)菌耐藥基因的播散密切相關(guān)。超級(jí)整合子位于染色體上并成為染色體的一部分而不能自由移動(dòng)。

3基因盒的結(jié)構(gòu)和來(lái)源

3.1基因盒的結(jié)構(gòu)

基因盒是一種可移動(dòng)性基因元件，可以環(huán)狀的形式獨(dú)立存在，也可整合入整合子中而成為整合子結(jié)構(gòu)的一部分［1］。基因盒的結(jié)構(gòu)如圖2，由單一基因(結(jié)構(gòu)基因)和一個(gè)整合位點(diǎn)attC組成。由于第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的attC長(zhǎng)度為59bp，所以attC又稱為59堿基元件(59baseelements，59be)。第四類整合子的attC位點(diǎn)稱為霍亂弧菌重復(fù)序列(Vibriocholerarepetitivesequences，VCRs)。attC位點(diǎn)的長(zhǎng)度為57～141bp，是一個(gè)不完全的反向重復(fù)序列，并含有可被整合酶識(shí)別的特異性整合位點(diǎn)。attC位點(diǎn)的兩端分別為一7堿基對(duì)的保守片段，分別稱為核心位點(diǎn)(coresite，CS)和反向核心位點(diǎn)(inversecoresite，ICS)。核心位點(diǎn)的共同序列為GTTRRRY(R：嘌吟，Y：嘧啶)，核心位點(diǎn)位于attC位點(diǎn)的右側(cè)，互補(bǔ)的反向核心位點(diǎn)序列為RYYYAAC，位于attC位點(diǎn)的左側(cè)。當(dāng)游離的環(huán)狀基

A：環(huán)狀基因盒；B：線性基因盒

圖2基因盒的結(jié)構(gòu)(重組位點(diǎn)用垂直箭頭標(biāo)出)

因盒在整合酶的催化下與整合子的attI發(fā)生位點(diǎn)特異性重組時(shí)，重組交換發(fā)生在attC核心位點(diǎn)GTT中的G和第一個(gè)T之間，核心位點(diǎn)GTT及G左側(cè)堿基突變對(duì)整合頻率影響較大［15］。

3.2基因盒的來(lái)源

基因盒的起源至今還不清楚。由于大多數(shù)基因盒中的結(jié)構(gòu)基因都沒(méi)有自己的啟動(dòng)子，同時(shí)attC的不完全反向重復(fù)序列可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，類似于不依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止結(jié)構(gòu)［16］，推測(cè)基因盒是由mRNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄而來(lái)。重組位點(diǎn)可能是原始轉(zhuǎn)錄的mRNA一部分，也可能是在mRNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后加的序列［17］。此種假說(shuō)還有待于從細(xì)菌中分離出適當(dāng)?shù)哪孓D(zhuǎn)錄酶來(lái)加以確證。

由于(1)SI中基因盒的重復(fù)序列VCRs具有種屬特異性，而RI中基因盒的attC位點(diǎn)高度可變；(2)RI中一些基因盒的序列與SI中基因盒序列完全一致；(3)SI中的基因盒可被IntI1識(shí)別［13］，研究者推測(cè)RI中基因盒可能來(lái)源于SI。

此外，Stokes等［18］設(shè)計(jì)針對(duì)59be保守序列的引物對(duì)自然環(huán)境中的樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在來(lái)自不同地點(diǎn)的樣品中擴(kuò)增出不同的基因盒，許多功能未知。提示自然環(huán)境中的微生物可能為整合子中基因盒的來(lái)源提供龐大的儲(chǔ)備庫(kù)。

4整合子對(duì)基因盒的捕獲、剪切與表達(dá)

4.1整合子對(duì)基因盒的捕獲與剪切

游離的的環(huán)狀基因盒在整合酶的催化下通過(guò)位點(diǎn)特異性重組整合于整合子上，成為整合子的一部分，同時(shí)位于整合子上的基因盒也可在整合酶的催化下形成環(huán)狀基因盒而從整合子中剪切下來(lái)［7，19，20］，如圖3。

重組位點(diǎn)用垂直箭頭標(biāo)出；來(lái)源于環(huán)狀基因盒1的核心位點(diǎn)用大寫

字母表示；來(lái)源于環(huán)狀基因盒2的核心位點(diǎn)用小寫字母表示

圖3整合子對(duì)基因盒的捕獲與剪切第一類整合子對(duì)基因盒的捕獲與剪切研究較多。整合酶IntI1中4個(gè)保守氨基酸分別是第146位和第280位的兩個(gè)精氨酸、第277位的組氨酸和第312位的酪氨酸，與整合酶的活性密切相關(guān)［21，22］。IntI1主要識(shí)別兩個(gè)位點(diǎn)：整合子上的attI1和基因盒上的attC。

attI1位點(diǎn)比較保守，其長(zhǎng)度至少40bp，全功能需70bp，在5′CS內(nèi)緣有一個(gè)核心位點(diǎn)GTTRRRY而無(wú)反向核心位點(diǎn)。重組位點(diǎn)也位于核心位點(diǎn)GTT中的G和第一個(gè)T之間［1，23］。Collis等［24］發(fā)現(xiàn)IntI1主要與雙鏈attI1結(jié)合，重組位點(diǎn)左側(cè)第24～37bp的14bp是IntI1的強(qiáng)結(jié)合位點(diǎn)，此區(qū)域在位點(diǎn)特異性重組中具有重要作用。一個(gè)不完全正向重復(fù)序列位于重組位點(diǎn)左側(cè)第41～55bp的區(qū)域，是IntI1的弱結(jié)合位點(diǎn)。Gravel等［25］發(fā)現(xiàn)attI1位點(diǎn)上有4個(gè)IntI1結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中3個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有GTTA保守序列。

attC位點(diǎn)序列和長(zhǎng)度多變，包含兩對(duì)不完全反向重復(fù)序列和中間的回文區(qū)，單鏈可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。attC含有4個(gè)IntI1結(jié)合結(jié)構(gòu)域，包括核心位點(diǎn)、反向核心位點(diǎn)和兩者之間的一對(duì)不完全反向重復(fù)序列。IntI1與attC單鏈(bottom鏈)結(jié)合能力強(qiáng)，提示IntI1介導(dǎo)的重組僅有一條鏈交換發(fā)生［14，26，27］。

整合酶介導(dǎo)的基因盒的整合主要發(fā)生在attC和attI之間，稱為特異性整合。同時(shí)整合酶也可介導(dǎo)attC和attI以外的第二位點(diǎn)的整合，稱為非特異性整合，雖然整合頻率較低，但因其周圍只有一個(gè)重組位點(diǎn)而不能被切除，其在細(xì)菌基因組、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子進(jìn)化中起重要作用［28］。整合酶介導(dǎo)的基因盒的剪切主要發(fā)生在兩個(gè)attC位點(diǎn)之間。

目前僅知道整合酶在整合子對(duì)基因盒的整合與剪切起重要作用，由于體外整合和剪切反應(yīng)體系尚未成功建立，是否有其它因子如輔助蛋白等參與還有待于進(jìn)一步研究。

4.2基因盒的表達(dá)

大多數(shù)基因盒沒(méi)有自己的啟動(dòng)子，基因盒總是以5′→3′的方向整合入整合子，使其可以在上游整合子可變區(qū)啟動(dòng)子Pant的作用下得以表達(dá)，有的整合子在Pant下游還有啟動(dòng)子P2［1］。目前研究的4種Pant和2種P2的結(jié)構(gòu)和相對(duì)啟動(dòng)強(qiáng)度見(jiàn)表1［8］。

影響基因盒表達(dá)的因素主要有：(1)基因盒上游Pant或P2的強(qiáng)弱；(2)基因盒距離啟動(dòng)子的遠(yuǎn)近，處于基因盒隊(duì)列下游的基因盒表達(dá)相對(duì)較弱，因其上游基因盒的attC具有類似于不依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止結(jié)構(gòu)［16］；(3)對(duì)于非特異性整合的基因盒是否表達(dá)要看其上游是否有適當(dāng)?shù)膯?dòng)子存在；(4)位于質(zhì)粒上的表1整合子啟動(dòng)子Pant和P2的結(jié)構(gòu)和相對(duì)啟動(dòng)強(qiáng)度

啟動(dòng)子35區(qū)10區(qū)間隔(堿基數(shù))強(qiáng)度PantTTGACATAAACT17強(qiáng)TGGACATAAGCT17弱TGGACATAAACT17混合1TTGACATAAGCT17混合2P2TTGTTATACAGT14無(wú)活性TTGTTATACAGT17未知

整合子中基因盒的表達(dá)水平還與質(zhì)粒的拷貝數(shù)有關(guān)；(5)少數(shù)基因盒如cmlA帶有自己的啟動(dòng)子和弱化信號(hào)［1］，其表達(dá)不受上游啟動(dòng)子和基因盒的影響。

此外，第一類整合子Pant位于Pint的下游，轉(zhuǎn)錄方向相對(duì)，兩者的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有一段互補(bǔ)序列，可能對(duì)基因盒和整合酶之間的表達(dá)起著調(diào)控作用。

5整合子與細(xì)菌耐藥性的關(guān)系

目前在第一類整合子中發(fā)現(xiàn)的基因盒已超過(guò)80種［14］，大部分是耐藥基因盒，編碼產(chǎn)物可賦予細(xì)菌對(duì)幾乎全部臨床常用藥物產(chǎn)生耐藥性。一個(gè)整合子可帶有多個(gè)耐藥基因盒，使細(xì)菌對(duì)多種藥物產(chǎn)生耐藥性。

整合子是一個(gè)可移動(dòng)性基因元件，一方面整合子可通過(guò)對(duì)基因盒的捕獲和剪切使基因盒發(fā)生移動(dòng)，另一方面整合子自身可位于轉(zhuǎn)座子、質(zhì)粒等可移動(dòng)基因元件上使整合子發(fā)生移動(dòng)，使耐藥基因發(fā)生播散。

國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn)報(bào)道整合子與細(xì)菌的耐藥性密切相關(guān)。Grape等［29］報(bào)道105株尿液標(biāo)本中分離的革蘭陰性細(xì)菌中59株(56.2%)整合子陽(yáng)性，整合子陽(yáng)性菌株平均對(duì)4.2種藥物耐藥，而整合子陰性菌株平均僅對(duì)1.9種藥物耐藥。Gombac等［30］檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)去11年來(lái)分離自意大利6所不同醫(yī)院的36株鮑曼不動(dòng)桿菌中第一類整合子陽(yáng)性的有16株(44.4%)，其中13株具有相同的基因盒排列順序，表明整個(gè)整合子結(jié)構(gòu)可發(fā)生水平轉(zhuǎn)移。Su等［31］對(duì)廣州市過(guò)去6年中分離的111株大腸桿菌臨床菌株進(jìn)行整合子檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)95株(85.7%)第一類整合子陽(yáng)性，4株(3.7%)第二類整合子陽(yáng)性，并在不同基因型的菌株中發(fā)現(xiàn)相同的基因盒dfrA17aadA5，表明基因盒可通過(guò)水平轉(zhuǎn)移在臨床菌株中播散。近年來(lái)在革蘭陽(yáng)性細(xì)菌也檢測(cè)到整合子［8］，Shi等［32］報(bào)道46株分離自臨床標(biāo)本的革蘭陽(yáng)性細(xì)菌中第一類整合子的陽(yáng)性率為100%，表明第一類整合子也廣泛分布于革蘭陽(yáng)性細(xì)菌中。在沒(méi)有抗生素壓力的自然環(huán)境中，整合子的檢出率很低，僅為3.6%，并且一半以上的整合子不攜帶耐藥基因盒［33］。提示整合子捕獲耐藥基因盒與抗生素的選擇壓力有關(guān)。

6整合子的檢測(cè)

目前整合子的檢測(cè)主要運(yùn)用分子生物學(xué)的方法。由于第

一、

二、三類整合子與細(xì)菌耐藥密切相關(guān)，臨床菌株中整合子的檢測(cè)主要針對(duì)此三類整合子。

5′CS的檢測(cè)設(shè)計(jì)針對(duì)整合酶基因保守序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增整合酶基因片斷來(lái)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行整合子的篩查。除了普通PCR外，也有用多重PCR［31，34，35］設(shè)計(jì)三對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增三種整合酶基因片斷，在篩查整合子的同時(shí)可對(duì)整合子進(jìn)行分類。還可設(shè)計(jì)針對(duì)三種整合酶基因共同保守序列的簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR，擴(kuò)增產(chǎn)物再用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶切后根據(jù)酶切圖譜進(jìn)行分類［36］。也可用熒光定量PCR進(jìn)行整合酶基因的快速檢測(cè)［37］。

3′CS的檢測(cè)由于大多數(shù)第一類整合子的3′CS有sul1基因，可用引物擴(kuò)增sul1基因來(lái)進(jìn)行第一類整合子的篩查。由于有的第一類整合子沒(méi)有3′CS，所以此種方法檢測(cè)的陽(yáng)性率要低于針對(duì)整合酶基因的PCR。

基因盒的檢測(cè)一般先用針對(duì)5′CS和3′CS的引物擴(kuò)增整合子的可變區(qū)，再進(jìn)行測(cè)序來(lái)確定基因盒的種類和排列順序。對(duì)于在大量臨床菌株中進(jìn)行整合子的分子流行病學(xué)調(diào)查時(shí)，可選擇有代表性的PCR產(chǎn)物片斷進(jìn)行測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果選擇適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶對(duì)相同大小的PCR產(chǎn)物片斷進(jìn)行酶切，具有相同酶切圖譜的片斷可初步認(rèn)為序列相同［38］。由于可變區(qū)片斷大小未知，有的可變區(qū)長(zhǎng)度大于PCR擴(kuò)增能力，因此易出現(xiàn)假陰性。也可直接擴(kuò)增相應(yīng)的基因盒或用針對(duì)相應(yīng)基因盒的探針與細(xì)菌基因組DNA酶切片斷進(jìn)行Southern雜交，來(lái)檢測(cè)相應(yīng)的基因盒。

另外可用特異性探針?lè)謩e與細(xì)菌基因組DNA酶切片斷和質(zhì)粒DNA進(jìn)行Southern雜交來(lái)進(jìn)行整合子的定位［39］。將整合子可變區(qū)或基因盒克隆至適當(dāng)?shù)妮d體上來(lái)對(duì)基因盒的功能進(jìn)行研究等。

7結(jié)語(yǔ)

早在1888年臨床分離的菌株中就已存在SI［13］，表明整合子是一個(gè)古老的結(jié)構(gòu)，是細(xì)菌進(jìn)化的產(chǎn)物。當(dāng)外界環(huán)境發(fā)生變化，不適應(yīng)細(xì)菌生存時(shí)，細(xì)菌通過(guò)整合酶催化的位點(diǎn)特異性重組，捕獲外源基因盒或使自身的基因盒發(fā)生剪切與重排，同時(shí)使下游基因盒得以表達(dá)來(lái)適應(yīng)外界環(huán)境的變化。整合子的發(fā)現(xiàn)一方面為細(xì)菌耐藥性的控制帶來(lái)困難，另一方面也為細(xì)菌耐藥機(jī)制的研究提供了新的思路。隨著研究的深入，許多方面值得進(jìn)一步探討：①整合子整合和剪切基因盒的確切機(jī)制有待于體外整合和剪切反應(yīng)體系的建立；②整合子中基因盒的起源；③整合酶表達(dá)和基因盒基因表達(dá)之間的關(guān)系；④整合子在細(xì)菌進(jìn)化中的作用；⑤快速簡(jiǎn)便的整合子檢測(cè)方法的建立等。

【參考文獻(xiàn)】

&n

bsp;［1］HallRM,CollisCM.Mobilegenecassettesandintegrons:captureandspreadofgenesbysitespecificrecombination［J］.MolMicrobiol,1995,15(4):593～600.

［2］CameronFH,GrootObbinkDJ,AckermanVP,etal.NucleotidesequenceoftheAAD(2")aminoglycosideadenylyltransferasedeterminantaadB.EvolutionaryrelationshipofthisregionwiththosesurroundingaadAinR5381anddhfrIIinR388［J］.NuclAcidsRes,1986,14(21):8625～8635.

［3］anizationoftwosulfonamideresistancegenesonplasmidsofGramnegativebacteria［J］.AntimicrobAgentsChemother,1987,31(2):306～311.

［4］SundstromL,VinayagamoorthyT,SkoldO.Noveltypeofplasmidborneresistancetotrimethoprim［J］.AntimicrobAgentsChemother,1987,31(1):60～66.

［5］StokesHW,HallRM.AnovelfamilyofpotentiallymobileDNAelementsencodingsitespecificgeneintegrationfunctions:integrons［J］.MolMicrobiol,1989,3(12):1669～1683.

［6］HallRM,StokesHW.Integrons:novelDNAelementswhichcapturegenesbysitespecificrecombination［J］.Genetica,1993,90(2～3):115～132.

［7］CollisCM,HallRM.SitespecificdeletionandrearrangementofintegroninsertgenescatalyzedbytheintegronDNAintegrase［J］.JBacteriol,1992,174(5):1574～1585.

［8］FluitAC,SchmitzFJ.Class1integrons,genecassettes,mobilityandepidemiology［J］.EurJClinMicrobiolInfectDis,1999,18(11):761～770.

［9］RecchiaGD,HallRM.Genecassettes:anewclassofmobileelement［J］.Microbiology,1995,141(12):3015～3027.

［10］HallRM,CollisCM.Mobilegenecassettesandintegronsinevolution［J］.AnnNYAcadSci,1999,870(1):68～80.

［11］ArakawaY,MurakamiM,SuzukiK,etal.AnovelintegronlikeelementcarryingthemetalloβlactamasegeneblaIMP［J］.AntimicrobAgentsChemother,1995,39(7):1612～1615.

［12］CorreiaM,BoavidaF,GrossoF,etal.Molecularcharacterizationofanewclass3integroninKlebsiellapneumoniae［J］.AntimicrobAgentsChemother,2003,47(9):2838～2843.

［13］MazelD,DychincoB,WebbVA,etal.AdistinctiveclassofintegronintheVibriochloeraegenome［J］.Science,1998,280(5363):605～608.

［14］MazelD.Integrons:agentsofbacterialevolution［J］.NatRevMicrobiol,2006,4(8):608～620.

［15］StokesHW,O′GormanDB,RecchiaGD,etal.Structureandfunctionof59baseelementrecombinationsitesassociatedwithmobilegenecassettes［J］.MolMicrobiol,1997,26(4):731～745.

［16］CollisCM,HallRM.Expressionofantibioticresistancegenesintheintegratedcassettesofintegrons［J］.AntimicrobAgentsChemother,1995,39(1):155～162.

［17］RecchiaGD,HallRM.Originsofthemobilegenecassettesfoundinintegrons［J］.TrendsMicrobiol,1997,5(10):389～394.

［18］StokesHW,HolmesAJ,NieldBS,etal.GenecassettePCR:sequenceindependentrecoveryofentiregenesfromenvironmentalDNA［J］.ApplEnvironMicrobiol

,2001,67(11):5240～5246.

［19］CollisCM,GrammaticopoulosG,BritonJ,etal.Sitespecificinsertionofgenecassettesintointegrons［J］.MolMicrobiol,1993,9(1):41～52.

［20］CollisCM,HallRM.Genecassettesfromtheinsertregionofintegronsareexcisedascovalentlyclosedcircles［J］.MolMicrobiol,1992,6(19):2875～2885.

［21］GravelA,MessierN,RoyPH.PointmutationsintheintegronintegraseIntI1thataffectrecombinationand/orsubstraterecognition［J］.JBacteriol,1998,180(20):5437～5442.

［22］MessierN,RoyPH.Integronintegrasespossessauniqueadditionaldomainnecessaryforactivity［J］.JBacteriol,2001,183(22):6699～6706.

［23］PartridgeSR,RecchiaGD,ScaramuzziC,etal.DefinitionoftheattI1siteofclass1integrons［J］.Microbiology,2000,146(11):2855～2864.

［24］CollisCM,KimMJ,StokesHW,etal.BindingofthepurifiedintegronDNAintegraseIntI1tointegronandcassetteassociatedrecombinationsites［J］.MolMicrobiol,1998,29(2):477～490.

［25］GravelA,FournierB,RoyPH.DNAcomplexesobtainedwiththeintegronintegraseIntI1attheattI1site［J］.NuclAcidsRes,1998,26(19):4347～4355.

［26］FranciaMV,ZabalaJC,delaCruzF,etal.TheIntI1integronintegrasepreferentiallybindssinglestrandedDNAoftheattCsite［J］.JBacteriol,1999,181(21):6844～6849.

［27］JohanssonC,KamaliMoghaddamM,SundstromL.IntegronintegrasebindstobulgedhairpinDNA［J］.NucleicAcidsRes,2004,32(13):4033～4043.(下轉(zhuǎn)第40頁(yè))(上接第頁(yè))［28］RecchiaGD,StokesHW,HallRM.CharacterizationofspecificandsecondaryrecombinationsitesrecognizedbytheintegronDNAintegrase［J］.NucleicAcidsRes,1994,22(11):2071～2078.

［29］GrapeM,FarraA,KronvallG,etal.IntegronsandgenecassettesinclinicalisolatesofcotrimoxazoleresistantGramnegativebacteria［J］.ClinMicrobiolInfect,2005,11(3):185～192.

［30］GombacF,RiccioML,RossoliniGM,etal.MolecularcharacterizationofintegronsinepidemiologicallyunrelatedclinicalisolatesofAcinetobacterbaumanniifromitalianhospitalsrevealsalimiteddiversityofgenecassettearrays［J］.AntimicrobAgentsChemother,2002,46(11):3665～3668.

［31］SuJ,ShiL,YangL,etal.AnalysisofintegronsinclinicalisolatesofEscherichiacoliinChinaduringthelastsixyears［J］.FEMSMicrobiolLett,2006,254(1):75～80.

［32］ShiL,ZhengMP,XiaoZH,etal.Unnoticedspreadofclass1integronsinGrampositiveclinicalstrainsisolatedinGuangzhou,China［J］.MicrobiolImmunol,2006,50(6):463～467.

［33］RosserSJ,YoungHK.Identificationandcharacterizationofclass1integronsinbacteriafromanaquaticenvironment［J］.JAntimicrobChemother,1999,44(1):11～18.

［34］DillonB,ThomasL,MohmandG,etal.MultiplexPCRforscreeningofintegronsinbacteriallysates［J］.JMicrobiolMethods,2005,62(2):221～232.

［35］馮潔，石磊，肖增璜，等.細(xì)菌耐藥整合子intI

分類的多重PCR方法的建立及應(yīng)用［J］.中國(guó)抗生素雜志，2005，30(10)：599～603.

［36］李心暉，石磊，楊維青，等.三類整合酶基因(intI)的簡(jiǎn)并引物PCR方法建立及應(yīng)用［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2005，25(2)：156～160.

［37］MaguireAJ,BrownDF,GrayJJ,etal.Rapidscreeningtechniqueforclass1integronsinEnterobacteriaceaeandnonfermentingGramnegativebacteriaanditsuseinmolecularepidemiology［J］.AntimicrobAgentsChemother,2001,45(4):1022～1029.

［38］石磊，陳洵，肖增璜，等.多重耐藥臨床菌株中整合子結(jié)構(gòu)的檢測(cè)與分析［J］.中國(guó)抗生素雜志，2007，32(1)：43～48.新晨