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【摘要】目的：建立腸寧靈膠囊含量測定方法。方法：采用hplc法測定。色譜柱：KromasilC18柱，流動相：甲醇—水(60：40)，檢測波長：245nm，柱溫：40℃，流速:0.81ml/min。結果：異補骨脂素進樣量在0.026～0.312μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系(r=0.9998)；平均加樣回收率為98.6529%，RSD為1.43%(n=6)。結論：該方法操作簡便易行，專署性強，準確可靠，可用于腸寧靈膠囊的質量控制。
【關鍵詞】高效液相色譜法；腸寧靈膠囊/化學合成；異補骨脂素/標準
腸寧靈膠囊是我校正在研究開發的一種新藥，它是由補骨脂(鹽)160g，白術(炒)160g，山藥(炒)120g，茯苓120g，五倍子80g，秦皮80g，肉豆蔻(煨)80g，木香(煨)40g，吳茱萸40g,炙甘草40g等10味藥組成的復方制劑，可用于治療慢性非特異性潰瘍性結腸炎,效果良好。采用高效液相色譜法對腸寧靈膠囊中的異補骨脂素進行含量測定，以控制其質量，使各批制劑之間的藥效穩定，現報道如下。
1材料
Waters600E雙泵頭柱塞往復泵，Waters2487雙波長紫外檢測器，Chromstation數據處理系統。異補骨脂素對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:0738-200108)；腸寧靈膠囊(自制，批號：20050312，20050314，20050318)；缺補骨脂的陰性樣品(自制)；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純。
2方法與結果
2.1色譜條件色譜柱：KromasilC18色譜柱(Φ4.6mm×250mm)；檢測波長：245nm；流動相：甲醇水(60：40)；柱溫：40℃；流速：0.8ml/min；理論板數按異補骨脂素峰計算應分別不低于2000。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的制備精密稱取異補骨脂素對照品適量，加甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
2.2.2供試品溶液的制備取腸寧靈膠囊內容物約0.35g，精密稱定,置50ml容量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得。
2.2.3測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.3線性關系考察分別精密吸取上述對照品溶液1、3、6、9、12μl，分別注入液相色譜儀，測定。以進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，回歸方程為Y=9114067X-6562.64，r=0.9998，結果表明異補骨脂素進樣量在0.026-0.312μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。
2.4精密度試驗取同一腸寧靈膠囊供試品溶液，重復進樣6次，測定異補骨脂素的含量，結果異補骨脂素平均含量為0.723μg/粒，RSD為1.795，表明異補骨脂素的精密度良好。
2.5穩定性考察分別取放置4、8、12、16、20、24h的同一對照品溶液與供試品溶液,測定異補骨脂素含量，以考察其穩定性，結果對照品溶液峰面積積分值RSD為1.21%，供試品浴液峰面積積分值RSD為2.47%，表明對照品溶液與供試品溶液至少在24h內穩定。
2.6重復性試驗取同一批腸寧靈膠囊樣品(批號為20050212)適量，6份，精密稱定，同法制備供試品溶液，依法測定異補骨脂素的含量，結果異補骨脂素平均含量為0.729mg/粒，RSD為1.22%，表明異補骨脂素的重復性良好。
2.7加樣回收率試驗精密稱取異補骨脂素對照品適量，加入到已測知異補骨脂素含量的腸寧靈膠囊(異補骨脂素含量為0.2143%，即0.729mg/粒)中，同法操作制備供試品溶液,測定異補骨脂素的含量，計算回收率。回收率=實測值-樣品中含量對照品加入量×100%，測定結果見表1。表1回收率實驗結果No取樣量注：χ=98.6529%RSD=1.43%2.8陰性對照試驗為進一步考察實驗設計及含量測定方法的可行性和專屬性，取缺補骨脂的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。精密吸取10μl注入液相色譜儀，按上述方法測定，結果表明補骨脂陰性對照品的色譜圖在異補骨脂素相應的保留時間附近無干擾峰，證明本法具有良好的專屬性。
2.9樣品測定結果按上述方法測定樣品3批，樣品含量見表2。表2腸寧靈膠囊中異補骨脂素的含量測定結果
3討論
3.1腸寧靈膠囊供試品溶液制備方法的選擇在預試驗中，分別采用了加熱回流和超聲波提取的方法以正交試驗的形式對腸寧靈膠囊中的異補骨脂素的含量進行測定，結果加熱回流和超聲波提取在含量上沒有明顯的區別，考慮到操作上的方便選擇超聲波提取的方式，根據正交試驗的結果確定了腸寧靈膠囊供試品溶液的制備方法為取腸寧靈膠囊內容物約0.35g，精密稱定,置50ml容量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度。
3.2條件的確定取異補骨脂素對照品在流動相溶液中進行紫外全波長掃描，可知最大吸收波長為245nm，因此選擇腸寧靈膠囊供試品溶液的測定波長為245nm。根據相關文獻報道［1-3］，先后
選擇了甲醇水，乙腈水，甲醇0.1%磷酸水溶液為流動相，測定結果表明以甲醇水(60：40)為該制劑的最佳流動相組成。經過方法學考察，證明該方法穩定，具有良好的專署性，可以作為腸寧靈膠囊質量控制方法之一。
【參考文獻】
［1］熊南山,程斌,劉啟,等.高效液相色譜法測定骨生膠囊中異補骨脂素含量［J］.中國醫院藥學雜志,2002,22(4):255-256.
［2］韓小陶,陳炎偉,廖建偉.反相高效液相色譜法測定補骨脂素和異補骨脂素的含量［J］.中國藥業,2003,12(7):31-32.
［3］王明越,張淑運,周佩卿,等.HPLC法測定益腎壯骨合劑補骨脂中的補骨脂素和益補骨脂素的含量［J］.中國實驗方劑學雜志,2002,8(1):12-13.新晨