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1材料
1.1藥物及試劑還原痹痛寧膠囊,北京還原常生物科技有限公司產(chǎn)品,批號070105;萬通筋骨片,通化萬通藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品,批號070422F;阿司匹林片,桂林南藥股份有限公司產(chǎn)品,批號070201;醋酸地塞米松片,浙江仙琚制藥股份有限公司產(chǎn)品,批號070304;角叉菜膠,遼寧省藥物研究所提供,批號050703。
1.2動物NIH系小鼠,合格證號:2007A004,體重18~22g;SD系大鼠,合格證號:2007A003,體重量180~220g,均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。
2方法與結(jié)果
2.1.1對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響健康昆明種小鼠60只,體重20~24g,雌雄各半,隨機(jī)分為空白組,阿司匹林組,萬通筋骨片組,還原痹痛寧膠囊低、中、高劑量組,10只/組。以0.2ml/10g劑量灌胃給藥,1次/d,空白組給予等容積蒸餾水,連續(xù)3d。末次給藥后30min,將二甲苯50μl涂于小鼠右耳前后兩面,左耳不涂做對照,2h后將小鼠頸椎脫臼處死,沿耳廓基線剪下兩耳,用8mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片,稱重、記錄,以左、右耳片重量之差作為腫脹度(見表1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,還原痹痛寧膠囊低、中、高劑量均可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P<0.01或P<0.05)。
2.1.2對大鼠角叉菜膠所致足腫脹的影響健康SD大鼠60只,體重180~220g,雌雄各半,隨機(jī)分為空白組,阿司匹林組,萬通筋片組,還原痹痛寧膠囊低、中、高劑組。實(shí)驗(yàn)前每鼠右后足踝關(guān)節(jié)處用記號筆作一清晰橫線,排水法測鼠足正常體積(致炎前足跖體積)。以0.2ml/10g劑量灌胃給藥,連續(xù)3d,末次給藥后30min,每鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1ml/只,隨后,每隔1h均按上法測一次足跖容積,連續(xù)3次,計(jì)算足腫脹率(見表2),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,還原痹痛寧膠囊高劑量可降低大鼠角叉菜膠1h足腫脹率(P<0.01);還原痹痛寧膠囊中、高劑量均可降低大鼠角叉菜膠2,3h足腫脹率(P<0.05或P<0.01);還原痹痛寧膠囊低劑量對大鼠角叉菜膠足腫脹率無明顯影響(P>0.05)。
足腫脹率(%)=致炎后足跖體積-致炎前足跖體積致炎前足跖體積×100%
表1還原痹痛寧膠囊對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(略)
與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;n=10
表2還原痹痛寧膠囊對大鼠角叉菜膠足腫脹的影響(略)
與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;n=10
2.1.3對大鼠棉球肉芽腫的影響SD雄性大鼠60只,體重180~220g,隨機(jī)分為空白組,萬通筋骨片組,地塞米松組,還原痹痛寧膠囊低、中、高劑量組。實(shí)驗(yàn)時(shí),10%水合氯醛麻醉,剪除大鼠胸毛,碘酒消毒,切開胸部皮膚,從切口向兩前肢腋下分別塞入25mg無菌棉球各一個(棉球經(jīng)高壓滅菌,并以青霉素和鏈霉素混合液浸泡后植入),縫合皮膚。術(shù)后1h以0.2ml/10g劑量灌胃給藥,1次/d,對照組給予等容積蒸餾水,連續(xù)7d,于第8天頸椎脫臼處死大鼠,剝離棉球肉芽組織,于90℃烘箱中干燥1h,于電子天平精密稱重(1/1000g),將稱得的肉芽組織重量減去棉球原重即得肉芽腫重量(見表3)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,還原痹痛寧膠囊中、高劑量組均可顯著減輕棉球肉芽腫模型大鼠肉芽腫重量(P<0.01或P<0.05)。
表3還原痹痛寧膠囊對大鼠棉球肉芽腫的影響(略)
與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;n=10
2.2對炎性組織中PGE2含量的影響[4,5]角叉菜膠模型大鼠于末次測量之后,頸椎脫臼處死,于大鼠踝關(guān)節(jié)上0.5cm處剪下炎性腫脹足,稱重,置5ml生理鹽水中浸泡1h,1500×g離心10min浸泡液,取上清液0,5ml,加0,5mol/LKOH一甲醇溶液2ml,在50℃下異構(gòu)化20min,用甲醇稀釋至20ml,用紫外分光光度計(jì)在278nm處測吸光度(A),以每克炎癥組織相當(dāng)?shù)奈舛戎当硎綪GE2的含量,并按下述公式計(jì)算PGE2含量(見表4)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,還原痹痛寧膠囊中、高劑量均可降低炎性組織中PGE2的含量(P<0.01);還原痹痛寧膠囊低劑量對炎性組織中PGE2的含量無明顯影響(P>0.05)。
PGE2含量(μg·g-1)=(E278×13.13×Vt×D)/W
(注:Vt=PGE2浸泡液的總體積;D=稀釋倍數(shù);W=右下肢重量(g);E278=278nm處的吸光值)
表4還原痹痛寧膠囊對大鼠炎性組織中PGE2含量的影響(略)
與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;n=10
3討論
還原痹痛寧膠囊運(yùn)用平衡陰陽、補(bǔ)益肝腎等法扶正,加強(qiáng)單元神經(jīng)細(xì)胞組織營養(yǎng),提高人體的免疫能力;運(yùn)用祛風(fēng)、清熱、逐濕、活血等法祛邪,殺死和阻斷類風(fēng)濕因子再生,達(dá)到標(biāo)本兼治,專門針對各類風(fēng)濕疾病,治療效果獨(dú)特。其對二甲苯致小鼠耳廓腫脹性炎癥有明顯的抑制作用、對角叉菜膠致大鼠足腫脹有一定的抑制作用且能明顯減少炎癥模型中炎性組織PGE2的含量,抗炎作用與其抑制炎癥介質(zhì)PGE的產(chǎn)生有關(guān)。PGE是膜磷脂在環(huán)氧酶系作用下形成的酸性脂類,是主要的炎癥介質(zhì)之一,具有擴(kuò)血管、致熱和致痛等作用。PGE是強(qiáng)烈的血管擴(kuò)張劑,其本身不能引起血管通透性升高,也不具趨化作用,但能明顯加強(qiáng)組胺和緩激肽的效應(yīng)而引起血管通透性升高,也能加強(qiáng)其它趨化因子的作用,使白細(xì)胞向炎區(qū)集中。前列腺素特別是PGE2在急性炎癥后期出現(xiàn)并起主要作用。所以在炎癥組織中PGE2含量越多,表明炎癥越嚴(yán)重。在本實(shí)驗(yàn)中,還原痹痛寧膠囊組的PGE2含量明顯低于對照組,其原因?yàn)槠渚哂辛己玫目寡鬃饔谩?寡籽芯拷Y(jié)果表明,,還原痹痛寧膠囊對急性、亞急性和慢性增生性炎癥均有顯著的抑制作用,其作用機(jī)理主要與其抑制炎性組織中PGE2的含量有關(guān)。