本站小編為你精心準備了尿液中卡那霉素的直接測定參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《分析科學學報》2016年第二期

摘要：

基于卡那霉素對CdTe量子點熒光的增強效應，建立一種直接測定尿液中卡那霉素含量的同步熒光光譜法。研究發現采用同步熒光光譜法，能夠有效避免尿液中復雜基質的熒光干擾。在優化實驗條件下，卡那霉素濃度在0．2～20．0μg／mL范圍內與體系相對同步熒光強度呈良好的線性關系，相關系數為0．9996，檢出限為0．005μg／mL。該方法用于尿液樣品中卡那霉素含量的直接測定，回收率為96．3％～104．4％。

關鍵詞：

卡那霉素；CdTe量子點；同步熒光光譜法；直接測定

卡那霉素是一種氨基糖苷類抗生素，對革蘭陰性菌及耐藥性金黃色葡萄菌具有良好的抗菌活性，臨床上主要用于治療敏感菌所致的肺部感染、尿路感染、膽道感染及腹腔感染等。但過量使用卡那霉素，易對人體健康造成嚴重危害，因此必須嚴格監控其使用［1］。目前卡那霉素的測定方法主要有紫外分光光度法、液相色譜法、酶聯免疫吸附法等［2－4］。其中，紫外分光光度法操作簡便但靈敏度較低，液相色譜法靈敏度較高但前處理程序復雜且儀器昂貴，酶聯免疫吸附法簡便易行但存在交叉反應等，因此建立一種簡便、直接和靈敏的卡那霉素含量測定方法，對于指導合理安全用藥具有重要的臨床意義。與傳統有機染料相比，量子點具有激發光譜寬、發射光譜窄而對稱、尺寸可調和光化學性質穩定等優點。近年來以量子點為熒光探針建立的熒光光譜法，已廣泛用于離子、生物大分子和生化藥物等分析檢測中［5－7］。因尿液中復雜基質的熒光干擾，常規熒光光譜法難以實現尿液中卡那霉素含量的直接測定。而同步熒光光譜法不僅能夠有效避免復雜基質的熒光干擾，也具有簡化譜圖、提高選擇性和減少光散射干擾等特點，已經得到廣泛應用［8，9］。本文采用同步熒光光譜法，通過選擇合適的波長差，有效避免尿液中復雜基質的熒光干擾?；诳敲顾貙dTe量子點熒光的增強效應，建立一種同步熒光光譜法直接測定尿樣中卡那霉素含量的新方法。該方法操作簡便、穩定性好及靈敏度高，直接用于尿液樣品中卡那霉素含量的快速測定，結果滿意。

1實驗部分

1．1儀器與試劑F－4500熒光分光光度計（日本，日立公司）；U－3310紫外－可見分光光度計（日本，日立公司）；pHS－3C型pH計（上海精密科學儀器有限公司）；90－3恒溫雙向磁力攪拌器（上海振榮科學儀器有限公司）；3－30K高速臺式冷凍離心機（德國西格瑪有限公司）。1．0mg／mL卡那霉素標準溶液：準確稱取50mg卡那霉素（KANA，中國藥品生物制品檢定所），蒸餾水溶解后轉移至50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，用時稀釋至所需濃度；0．1mol／L磷酸鹽緩沖液、Tris－HCl緩沖液和硼酸－硼砂緩沖液；碲粉、硼氫化鈉、氯化鎘、巰基乙酸和氫氧化鈉。以上所有試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

1．2CdTe量子點的制備參考文獻方法［10］制備巰基乙酸修飾的CdTe量子點。準確稱取160mg硼氫化鈉和86mg碲粉置于反應瓶中，加入5mL蒸餾水溶解，冰水浴中還原反應8h，得到紫色碲氫化鈉水溶液。在250mL三口燒瓶中加入286mg氯化鎘，用100mL蒸餾水溶解，磁力攪拌下加入220μL巰基乙酸，用1mol／L氫氧化鈉溶液調節溶液pH值至11．0，通氮除氧30min后，劇烈攪拌下加入新制備的碲氫化鈉水溶液，100℃水浴回流2h，得到1．0mmol／L巰基乙酸修飾的CdTe量子點溶液（以HTe－濃度計算）。

1．3卡那霉素的測定在5mL比色管中，依次加入0．5mL35μmol／LCdTe量子點溶液、0．5mL500mmol／LTris－HCl緩沖液（pH＝7．5）及一定量的1．0mg／mL卡那霉素標準溶液，然后用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。室溫下放置10min后，在波長差△λ＝230nm、激發和發射狹縫寬度均為5nm條件下，進行同步熒光光譜掃描，分別測定加入卡那霉素標準溶液前后體系的同步熒光強度F0和F，計算體系相對同步熒光強度△F＝F－F0。

2結果與討論

2．1熒光光譜特性分析人體尿液中含有多種有機物質，其中一些物質具有很強的熒光，圖1為尿液和CdTe量子點的熒光光譜。從圖1可知，采用常規熒光光譜法時，尿液中復雜基質的熒光光譜與CdTe量子點的熒光光譜重疊嚴重，從而對CdTe量子點的熒光強度有很大干擾，難以實現CdTe量子點對尿液中卡那霉素含量的直接測定。采用同步熒光光譜法，可避免尿液中復雜基質的熒光干擾，而波長差直接影響其選擇性和靈敏度。在不同波長差△λ條件下，分別測定尿液、CdTe量子點及卡那霉素－CdTe量子點－尿液體系的同步熒光光譜。結果發現，當波長差△λ＝230nm時，CdTe量子點同步熒光峰位于334nm處，而尿液中復雜基質同步熒光峰位于228nm處，此時二者重疊較少，從而避免尿液中復雜基質對CdTe量子點同步熒光強度的干擾；同時當卡那霉素加入CdTe量子點－尿液體系后，體系同步熒光峰位不變，但卡那霉素對CdTe量子點同步熒光的增強效應最大（見圖2）。因此實驗選擇波長差△λ＝230nm測定體系的同步熒光強度。

2．2pH值的選擇考察Tris－HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液和硼酸－硼砂緩沖液對體系相對同步熒光強度△F的影響，結果發現在Tris－HCl緩沖液中，△F最大且相對穩定。同時，考察Tris－HCl緩沖液pH值對體系相對同步熒光強度△F的影響，結果發現隨著Tris－HCl緩沖液pH值的增加，△F先增大后減小；當pH值為7．5時，△F達到最大值。因此實驗選擇加入pH值7．5的Tris－HCl緩沖液。

2．3CdTe量子點濃度的選擇考察CdTe量子點濃度對體系相對同步熒光強度△F的影響，結果如圖3所示。由圖3可知，隨著CdTe量子點濃度的增加，△F逐漸增大；當CdTe量子點濃度為3．5μmol／L時，△F達到最大值；繼續增大其濃度，△F反而逐漸降低。考慮到靈敏度和信噪比，實驗選擇CdTe量子點濃度為3．5μmol／L。2．4反應時間及穩定性的選擇考察反應時間對體系相對同步熒光強度△F的影響。結果表明，CdTe量子點與卡那霉素反應10min后，△F達到穩定，且在30min內保持不變。因此實驗選擇10min后測定體系的相對同步熒光強度。2．5方法的線性范圍及檢出限在優化實驗條件下，CdTe量子點溶液中加入Tris－HCl緩沖液及一系列濃度的卡那霉素標準溶液，按實驗方法測定CdTe量子點的同步熒光光譜，并以卡那霉素濃度對體系相對同步熒光強度△F繪制工作曲線，結果如圖4所示。由圖4可知，卡那霉素濃度在0．2～20．0μg／mL范圍內與△F呈良好的線性關系，回歸方程為：△F＝0．69148＋3．15729c，相關系數為0．9996。根據IUPAC的規定，以3S0／S計算出此方法的檢出限為0．005μg／mL。2．6實際樣品的測定取肌肉注射200mg卡那霉素健康受試者1h（1＃）和4h（2＃）的尿液樣品，8000r／min離心10min，取上清液置于50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度。按實驗方法測定尿液樣品的同步熒光強度，同時進行加標回收實驗，結果如表1所示。由表1可知，加標回收率在96．3％～104．4％之間，相對標準偏差（RSD）為1．6％～2．4％，表明該方法可用于尿液樣品中卡那霉素含量的直接測定。

3結論

采用同步熒光光譜法，通過選擇合適的波長差△λ＝230nm，從而避免尿液中復雜基質的熒光干擾。基于卡那霉素顯著增強CdTe量子點的熒光強度，建立一種直接測定尿液中卡那霉素含量的同步熒光光譜法。在優化實驗條件下，卡那霉素濃度在0．2～20．0μg／mL范圍內與體系相對同步熒光強度呈良好線性關系，相關系數和檢出限分別為0．9996和0．005μg／mL。該方法只需對尿液樣品進行簡單處理，即可實現尿液樣品中卡那霉素含量的定量測定，有望成為卡那霉素含量的常規測定方法。

作者：毛永強 胡美娜 李娜 張丹 單位：遼寧工程技術大學理學院 遼寧工程技術大學安全科學與工程學院 礦山熱動力災害與防治教育部重點實驗室