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《化學傳感器雜志》2016年第3期

摘要：

目的：建立電化學法對珍菊降壓片中蘆丁的含量測定方法。方法：將堿法恒電位法活化的玻碳電極置于氯金酸溶液中在-0.2V條件下恒電位沉積一層納米金，發(fā)現(xiàn)電極對蘆丁有良好的電化學響應(yīng)。結(jié)果：在最優(yōu)條件下對蘆丁標準溶液進行測定，當蘆丁濃度在0.02～12μmol/L與DPV峰電流呈良好的線性關(guān)系，檢測限為0.007μmol/L(S/N=3)。結(jié)論：該方法準確、可靠，可用于珍菊降壓片中蘆丁含量的測定。

關(guān)鍵詞：

珍菊降壓片；蘆丁；電化學法；含量測定

0引言

珍菊降壓片是常用的降壓藥，其為中西藥結(jié)合的一種制劑，成分有三味中藥和兩味西藥組成,包含有：野菊花膏粉、珍珠層粉、蘆丁、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪等成分，該藥用于臨床各種高血壓的治療，具有療效好，起效快，無副作用等特點，是目前高血壓防治的主要措施之一[1]。其質(zhì)量標準已收載于部頒中藥20冊，僅有珍珠層粉和蘆丁的定性鑒別，沒有任何含量測定項，不能準確、全面地控制產(chǎn)品質(zhì)量。珍菊降壓片中蘆丁的含量為20mg/片，主要作用是改變?nèi)梭w內(nèi)毛細血管的通透性和張力，其與另外四味藥共同作用達到降壓的作用，是不可缺少的一味主藥。對珍菊降壓片中主要成分蘆丁的含量進行測定，可更好地控制該藥物的產(chǎn)品質(zhì)量，完善其質(zhì)量標準。蘆丁含量測定大多采用高效液相色譜法[2-3]，而該文采用電化學法對制劑中蘆丁的含量進行測定，經(jīng)方法學考察，表明該方法簡捷快速，準確可靠，有很好的選擇性，可作為控制珍菊降壓片質(zhì)量的含量測定方法。

1儀器與試藥

JSM-7800F掃描電子顯微鏡（日本JEOL公司）；CHI660E電化學工作站(上海CHI公司)；三電極體系：工作電極為玻碳電極，參比電極為Hg/Hg2Cl2(飽和KCl)，并以鉑絲電極作為對電極。HAuCl4•4H2O（w=99.9%）購于AlfaAesar（美國）。蘆丁對照品，批號100080-200306，由中國藥品生物制品檢定所提供，無水乙醇為溶劑配制濃度為1×10-3mol/L的蘆丁儲備液，置于4℃冰箱保存。不同pH的B-R緩沖溶液用均為0.04mol/L的磷酸、硼酸、乙酸和0.2mol/L氫氧化鈉溶液混合配置而成。珍菊降壓片，亞寶藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)（產(chǎn)品批號：141229）。其他試劑均為分析純試劑，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1電化學測試方法

實驗中采用CV法測試和示差脈沖伏安法（DPV）測試均在常規(guī)電解池中進行。每次測試前溶液均通氮除氧10min，測試過程中在溶液上方通氮保護，所有實驗均在室溫條件下進行。CV法測量的參數(shù)設(shè)置：掃描電位區(qū)間0.2～0.8V，掃描速率0.1V/s。DPV法測量的參數(shù)設(shè)置：掃描電位區(qū)間0.2～0.7V，電位增量0.004V，振幅50mV，脈沖寬度50ms，脈沖幅度1s。工作電極表面重復方法：每次測試后取出電極，先在0.1mol/LNaOH溶液中以0.1V/s的速率在0～0.8V的范圍內(nèi)循環(huán)掃描3圈，然后在B-R緩沖溶液中以0.1V/s的速率在0～0.8V的范圍內(nèi)循環(huán)掃描至穩(wěn)定

2.2電極的制備與SEM表征

將玻碳電極（GCE）依次用0.3、0.1、0.05μm的Al2O3打磨光亮，然后分別用二次蒸餾水、丙酮、乙醇超聲清洗干凈后室溫下晾干。參照文獻[4]，以堿法恒電位法活化玻碳電極（activiateGCE，AGCE）：將電極置于1mol/LNaOH溶液中分別在1.2V、-0.5V恒電位條件下極化1min，然后采用循環(huán)伏安法在-0.5～0.8V以0.1V/s的掃速至電化學響應(yīng)曲線穩(wěn)定。再將活化的電極用二次蒸餾水沖洗，晾干，置于HAuCl4（1%）溶液中在-0.2V的條件下恒電位沉積60s得到納米金顆粒修飾的活化玻碳電極（記為：AuNPs/AGCE）。AuNPs/AGCE電極采用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察了表面形貌，結(jié)果如圖1所示。在活化后玻碳電極表面可以清晰地看到顆粒狀的納米金顆粒，大小均一，粒徑約為20nm，均勻地覆蓋在電極表面，說明納米金修飾的玻碳電極形成。高導電性的納米金顆粒能有效增加電極的比表面積，而且還能形成一個良好的電化學界面[5]。

2.3蘆丁在不同電極下的CV響應(yīng)

在pH2.68的B-R緩沖溶液中，研究1×10-5mol/L蘆丁在不同修飾電極下的CV響應(yīng)曲線，結(jié)果如圖2所示。在裸玻碳電極（a）表現(xiàn)出一對明顯的氧化還原峰，這是蘆丁在玻碳電極上發(fā)生氧化還原反應(yīng)形成。電極經(jīng)堿法恒電位法活化（b）使得峰電流增大，而當AuNPs/AGCE（c）形成以后，峰電流進一步增加，且氧化峰電流和還原峰電流絕對值之比為1.40，兩峰之間的電位差縮小變?yōu)?5mV，說明蘆丁在AuNPs/AGCE電極上的電化學行為表現(xiàn)為轉(zhuǎn)移電子數(shù)為2的準可逆的氧化還原反應(yīng)，可推測氧化還原峰電流是由蘆丁B環(huán)上的3’、4’位置的羥基反應(yīng)所產(chǎn)生，這與文獻報導的結(jié)果一致[4]。持續(xù)增大的電流響應(yīng)說明金納米顆粒和活化的玻碳電極共同作用能顯著催化蘆丁發(fā)生電化學反應(yīng)。

2.4掃速對蘆丁檢測的影響

從圖3可發(fā)現(xiàn)隨著掃描速率（0.02～0.1V/s）的增加，氧化峰、還原峰的峰電流不斷增加，且掃速呈良好的線性關(guān)系，線性方程分別為IμA=-(31.92±1.45)v(V/s)-(0.15±0.09)，r2=0.9918；IμA=(31.66±1.82)v(V/s)–(0.0306±0.11)，r2=0.9869說明蘆丁在電極表面受吸附控制。將在蘆丁標準液中進行過CV掃描后的電極取出，用二次蒸餾水沖洗表面之后直接置于空白B-R緩沖液中再次掃描，出現(xiàn)了氧化峰和還原峰，但峰電流變小，進一步說明電極對蘆丁存在吸附作用。

2.5pH對DPV測量的影響

用AuNPs/AGCE電極對l×10-5mol/L蘆丁在不同pH的B-R緩沖溶液中進行示差脈沖伏安法（DPV）測試。從圖4可以發(fā)現(xiàn)，在B-R緩沖溶液中，蘆丁氧化峰電化學響應(yīng)良好，隨著pH值的不斷增加，電化學信號漸弱，且峰電位負移，且峰電位與pH值的大小呈線性關(guān)系，Epa=-(0.0637±0.0019)pH+(0.6689±0.0102)，r2=0.9962。該方程的斜率與能斯特方程的等質(zhì)子電子傳遞理論值斜率59接近，則表明蘆丁在氧化反應(yīng)中是等質(zhì)子等電子參與的反應(yīng)，最終選擇峰電流最強的pH=2.86的B-R緩沖溶液作為支持電解質(zhì)。

2.6對蘆丁標準溶液進行測定

AuNPs/AGCE電極在最優(yōu)化的條件下，用DPV法對不同濃度的蘆丁標準溶液進行電化學檢測，結(jié)果如圖5所示。隨著蘆丁標準溶液的濃度不斷增大，DPV氧化峰峰電流響應(yīng)不斷增強，且濃度在0.02～12μmol/L時與峰電流值呈良好的線性關(guān)系，線性方程為IμA=-(0.5065±0.0197)cμmol/L-(2.0204±0.1270)(r2=0.9925)，檢測限為0.007μmol/L（S/N=3）。與高效液相色譜法相比，該法對蘆丁的含量測定具有線性范圍更寬，檢測限更低的優(yōu)點。

2.7電極的選擇性、穩(wěn)定性、重復性和精密度

在實驗體系中加入200μmol/LL-半胱氨酸、200μmol/L葡萄糖作為干擾物，考察其對蘆丁氧化峰電流響應(yīng)的影響。實驗結(jié)果表明：這些成分對峰電流的影響相對標準偏差不超過5％，珍菊降壓片中其他組分如鹽酸可樂定、氫氯噻嗪電極在此條件下無電化學響應(yīng)，AuNPs/AGCE對蘆丁有很好的選擇性，珍菊降壓片中其他組分無干擾。實驗分別制備6支AuNPs/AGCE電極在相同條件下對1×10-5mol/L蘆丁進行測定，測定結(jié)果RSD=3.94%，說明電極制備方法重復性良好。選取其中一支電極對同一濃度的蘆丁溶液進行測定，平行測定6次的結(jié)果RSD=2.95%，證明該電極應(yīng)用于對蘆丁測定具有良好的精密度。測試后將電極于4℃條件下保存在B-R空白溶液中，分別在7d和15d后再次測定，RSD均不超過5％，證明電極穩(wěn)定性較好。

2.8對珍菊降壓片中蘆丁的測定

取珍菊降壓片20片，精密稱定，將藥片研磨成細粉，精密稱取細粉適量（約相當于蘆丁5mg）置100mL的容量瓶中，加入20mL無水乙醇超聲30min后，抽濾后用無水乙醇將提取液于容量瓶中定容至100mL，成待測樣品溶液。取適量待測樣品稀釋，進行紫外測試，樣品特征吸收帶與蘆丁標準品溶液基本一致，證明待測樣品中的黃酮類化合物主要成分為蘆丁。取1mL續(xù)濾液于25mL的容量瓶中用B-R緩沖溶液定容至刻度。此時樣品溶液理論的蘆丁濃度為4.19μmol/L，將制備好的電極對樣品溶液進行平行測定，得到結(jié)果的平均值為4.14±0.05μmol/L，結(jié)果表明該降壓片中蘆丁測定含量與標明含量較吻合，測定結(jié)果與標示值較符合。證明AuNPs/AGCE可以用于對珍菊降壓片制備過程中蘆丁含量的檢測。

2.9加樣回收實驗

已測定含量的樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量，精密加入蘆丁對照溶液適量，按含量測定項下處理成一定濃度的溶液，照該法測定。測定結(jié)果見表1，結(jié)果表明：蘆丁9次測定回收率在95.2%～105.3%之間。

3結(jié)論

實驗基于AuNPs/AGCE電極構(gòu)建了一種簡單靈敏的測定蘆丁含量的電化學分析法。電極制備簡單，對蘆丁的檢測具有良好的穩(wěn)定性、精密度和選擇性，得到一個寬的線性范圍和低的檢測限，可用于對珍菊降壓片中蘆丁含量的測定。

參考文獻：

[1]吳躍進,黃湘.中西藥復方降壓藥珍菊降壓片的研究與應(yīng)用概況[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志,2005,11(3):238-241.

[2]姜慧禎,林娜.珍菊降壓片中蘆丁的含量測定[J].甘肅醫(yī)藥,2010,29(5):575-577.

[3]耿旦,馬雯芳,甄漢深,等.RP-HPLC測定桑椹中蘆丁的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(14):63-65.

[4]胡海洋,陳紅艷.電化學法對苦蕎茶中蘆丁含量的測定[J].食品科學,2015,36(8):115-119.

作者:謝靚 付艷 金晶 李群芳 單位:湖北民族學院化學與環(huán)境工程學院