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《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2016年第3期

摘要:

對白車軸草夏枯病菌的生物學(xué)特性及藥劑敏感性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:病菌菌絲生長適宜溫度為25～30℃，最適溫度28℃，菌核形成適宜溫度為15～30℃，最適溫度28℃;最適菌絲生長的培養(yǎng)基為PSA，最適菌核形成的培養(yǎng)基為PDA;最適菌絲生長的碳源為Richard培養(yǎng)基，最適菌核生長的碳源為可溶性淀粉;以L-精氨酸為氮源的培養(yǎng)基最適菌絲生長，L-α-丙氨酸為菌核形成最佳氮源;pH5.0～10.0適宜菌絲生長，pH6.0菌核產(chǎn)量最高;半光照利于菌絲生長，全光照利于菌核形成。藥劑敏感性研究表明，病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯(lián)、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L，可進(jìn)一步用于田間試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞:

白車軸草;夏枯病;立枯絲核菌AG1-IB;生物學(xué)特性;藥劑敏感性

白車軸草，又名白三葉草，為豆科車軸草屬多年生草本植物。白車軸草全草皆可入藥，具有祛痰止咳、鎮(zhèn)痙止痛等功效［1］。因其具有營養(yǎng)價值高、生長速度快、可多次刈割等優(yōu)點(diǎn)，是畜牧業(yè)的優(yōu)質(zhì)飼料［2］。又因其具有耐踐踏、耐貧瘠、葉花優(yōu)等優(yōu)點(diǎn)，一直是城市草坪綠化的首選植物。吉林省白山市已將該草作為市草，大面積鋪植于城市，成為該市草坪的主體草種［3］。筆者于2012—2014年，先后在吉林省通化市和吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)校園綠化帶、動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院牧草種質(zhì)資源圃及長春市居民區(qū)綠地的白車軸草上發(fā)現(xiàn)一種病害，該病害主要危害白車軸草的葉片和葉柄，初期為水漬狀小斑，濕度大時，病斑擴(kuò)展非常迅速，可致整個葉片和葉柄發(fā)生水爛，莖葉坍塌，產(chǎn)生大量蛛絲樣菌絲，并形成白色絮狀物，進(jìn)而形成灰褐色菌核，嚴(yán)重時導(dǎo)致車軸草大面積死亡，對車軸草的生產(chǎn)及觀賞價值均造成嚴(yán)重影響。經(jīng)研究確定該病害由夏枯病菌引起［4］。本試驗(yàn)著重就白車軸草夏枯病菌的生物學(xué)特性及其對殺菌劑敏感性進(jìn)行研究，以期為該病害的發(fā)生規(guī)律及防治過程中藥劑的選擇提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試病原菌供試白車軸草夏枯病菌BSYJ11，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理教研室分離鑒定并保存。

1.2病菌生物學(xué)特性研究

1.2.1培養(yǎng)基對病菌菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)、黃瓜煎汁、蘋果煎汁、番茄煎汁、梨煎汁、燕麥片(OA)、玉米粉、胡蘿卜煎汁、水瓊脂平板培養(yǎng)基上分別放置直徑為8mm的病原菌菌餅，4次重復(fù)，25℃恒溫培養(yǎng)，2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5］。菌核產(chǎn)量測定:病菌培養(yǎng)7d后，將菌核取出置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱40℃烘干至恒重，稱量。

1.2.2溫度對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響將直徑為8mm的菌餅放置于PDA培養(yǎng)基平板中(15mL/皿)，分別置于4，10，15，20，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，40℃下培養(yǎng)，4次重復(fù)。培養(yǎng)2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5］，7d后測定菌核產(chǎn)量。

1.2.3pH對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響用HCl(1mol/L)和NaOH(1mol/L)將PDA培養(yǎng)基的pH分別調(diào)節(jié)為4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，向上述不同pH平板(15mL/皿)中移入菌餅(直徑8mm)，25℃恒溫培養(yǎng)，4次重復(fù)，2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產(chǎn)量。

1.2.4碳源和氮源對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響(1)碳源:分別稱取等質(zhì)量碳素的二水合檸檬酸三鈉、α-乳糖、D-山梨醇、D-甘露醇、D(+)-麥芽糖等碳源替代查氏培養(yǎng)基［6］中的蔗糖，配置成培養(yǎng)基。移植菌餅(直徑8mm)到上述平板培養(yǎng)基中(15mL/皿)，25℃恒溫培養(yǎng)，4次重復(fù)。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產(chǎn)量。(2)氮源:分別稱取等質(zhì)量氮素的L-α-丙氨酸、L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺等氮源代替查氏培養(yǎng)基中的硝酸鈉，配置成培養(yǎng)基。移植菌餅(直徑8mm)到上述平板培養(yǎng)基中(15mL/皿)，25℃恒溫培養(yǎng)，4次重復(fù)。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產(chǎn)量。

1.2.5光照對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響將直徑為8mm的菌餅放置于PDA培養(yǎng)基平板(15mL/皿)中，分別在連續(xù)光照、12h光暗交替和完全黑暗條件下25℃恒溫培養(yǎng)，每個處理4次重復(fù)。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產(chǎn)量。上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS軟件鄧肯氏新復(fù)極差法(DMRT)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。1.3藥劑敏感性測定采用菌絲生長速率法［10-11］，對供試菌株BSYJ11進(jìn)行藥劑敏感性測定，供試藥劑見表1。將每種藥劑配制成質(zhì)量濃度分別為1×103，1×102，1×10，1，1×10－1，1×10－2mg/L的含藥平板。取直徑為8mm的菌餅，放置于含藥平板中央，菌絲面朝下，以不加藥劑作為空白對照，每個處理3次重復(fù)。25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2d后，采用十字交叉法測量供試病菌在含藥培養(yǎng)基上的菌落直徑，與對照比較計(jì)算各藥劑處理對病菌的生長抑制率。查機(jī)率值與死亡率(抑制率)換算表，用最小二乘法建立毒力回歸方程，計(jì)算出各藥劑對病原菌的有效中濃度(EC50)，比較病原菌對各種藥劑的敏感程度。抑制率=(對照組菌落直徑－處理組菌落直徑)/(對照組菌落直徑－菌餅原始直徑)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1病菌的生物學(xué)特性

2.1.1培養(yǎng)基對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，病菌在10種供試培養(yǎng)基上均能生長。在PSA上菌絲生長最快，在番茄汁培養(yǎng)基上生長最慢;在PDA上菌核產(chǎn)量最高，在水瓊脂上菌核產(chǎn)量最低(表2)。

2.1.2pH對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響菌絲在pH4～11均能生長，pH5～10適宜病菌菌絲生長;pH4～11均能形成菌核，pH6時菌核產(chǎn)量最高(圖2)。 

2.1.3溫度對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響菌絲生長適宜溫度為25～30℃，最適溫度28℃;菌核形成適宜溫度為15～30℃，最適溫度28℃，在10℃以下和31℃以上不產(chǎn)生菌核(圖3)。

2.1.4碳源和氮源對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響在供試的10種碳源中，病菌在Richard培養(yǎng)基上菌絲生長最好，其次為D-山梨醇;菌核在以可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基上產(chǎn)量最大，在以二水合檸檬酸三鈉為碳源的培養(yǎng)基上不產(chǎn)生菌核(表3)。病菌能夠利用供試的9種氮源，其中病菌菌絲在以L-精氨酸為氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長速度最快;菌核在以L-α-丙氨酸為氮源的培養(yǎng)基上產(chǎn)量最大，在以L-組氨酸、L-賴氨酸、L-胱氨酸為氮源的培養(yǎng)基上不產(chǎn)生菌核(表3)。

2.1.5光照對菌絲生長和菌核產(chǎn)量的影響不同光照處理結(jié)果顯示:半光照有利于病菌菌絲生長，全光照條件下菌核產(chǎn)量最大(表4)。

2.2病菌對藥劑的敏感性由表5可知，病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯(lián)、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，其EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L;病菌對代森錳鋅、菌核凈、丙環(huán)唑、腐霉利的敏感性次之，EC50＜5.0mg/L，5.0mg/L＜EC90＜10.0mg/L;病菌對多抗霉素、枯草芽孢桿菌、內(nèi)生芽孢桿菌、氟硅唑、嘧霉胺的敏感性略低，EC50＜5.0mg/L，5.0mg/L＜EC90＜100.0mg/L;對其他藥劑的敏感性較差。

3結(jié)論

白車軸草夏枯病(Summerblightofwhiteclo-ver)由R．solaniAG－1-IB引起［4］。該病與白車軸草菌核病的癥狀尤為相似。受害植株，開始病部呈水漬狀、淺褐色斑痕，然后向上蔓延，斑痕色澤由淺褐色變成灰白色，此時莖基部軟腐，長出白色絮狀物，或黑色菌核粒。受害輕者，植株呈星點(diǎn)發(fā)黃，重則大片萎蔫枯死［12］。該病害在國內(nèi)首次被發(fā)現(xiàn)，且對白車軸草的生產(chǎn)造成極大的威脅，需引起草業(yè)工作者及園林工作者的高度重視。掌握該病害的診斷特征，及時采取有效的防治措施，才能防止病害的擴(kuò)大蔓延，減少其對草業(yè)及景觀造成的重大損失。掌握該病菌的生物學(xué)特性和病害的發(fā)生規(guī)律，是進(jìn)行病害防治的必要前提。通過研究得知:病菌對營養(yǎng)、光照、酸堿度等的要求并不嚴(yán)格，因此病害在營養(yǎng)瘠薄的栽培條件下也可嚴(yán)重發(fā)生。室內(nèi)藥劑敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明:該病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯(lián)、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，其EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L;其次為代森錳鋅、菌核凈、丙環(huán)唑、腐霉利，5.0mg/L＜EC90＜10.0mg/L，內(nèi)生芽孢桿菌的10.0mg/L＜EC90＜30.0mg/L。通過藥劑敏感性試驗(yàn)結(jié)果，可以篩選到進(jìn)一步田間試驗(yàn)的藥劑，對病害的防治提供了備選藥劑，有利于病害的合理防控，為白車軸草健康生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

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作者：孫慧穎 楊麗娜 謝昀燁 萬丹鳳 白慶榮 單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院 吉林省樺甸市夾皮溝鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)站