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《遼寧林業科技雜志》2015年第二期

1方法

1.1花粉的采集和活力測定雄花序剛剛展開后，收集新鮮花粉置于－20℃保存備用。花粉活力的測定參照胡適宜[5]的瓊脂法。花粉活力采用固體培養基離體培養法測定。用膠頭滴管吸取液態培養基，在載玻片上滴制成厚度約3mm的半球形培養基。待培養基凝固后，用棉簽粘取少量花粉均勻彈播于培養基上，20℃保溫、黑暗培養24h，統計花粉萌發率和花粉管長度，以花粉管長度達花粉粒直徑一半以上為萌發標準。

1.2授粉取樣參照Thompson[6]的方法并略作修改。收集去雄雌花，置于培養皿內，每個父本授粉3～5朵，培養皿內加2層濕濾紙，室溫培養24h后，置于4℃冰箱內保存備用。

1.3熒光顯微鏡觀察參照王浩的方法[7]并略作修改。樣品取出后用1mol•L-1氫氧化鈉浸泡軟化10min，用0.1％的水溶性苯胺藍溶液（0.1g苯胺藍，0.71gK3PO4，100mL蒸餾水）染色2h。選取基本等長的已授粉花柱用手術刀切下，用鑷子將其從緊靠子房端取下后放在載玻片上，滴1滴苯胺藍溶液，用蓋玻片壓片，立即置于Olympus熒光顯微鏡系統觀察。數碼攝像拍攝熒光顯微照片，輻射濾光片使用UG1。

1.4親和性判定親和性的判定采用Thompson[6]的方法。根據花粉在柱頭上的萌發情況和花粉管在花柱組織中的生長狀況判斷其親和程度。授粉24h后花粉管在花柱表面扭曲，生長停滯，深入不到柱頭里面的處理為不親和授粉，花粉管深入到柱頭里面并沿花柱道向下生長的處理為親和授粉。

1.5田間坐果調查在遼寧省經濟林研究所普灣新區松木島實驗基地和撫順章黨科研基地，根據不同品種的花期選擇不同材料進行雜交或自交，授粉處理選取樹冠不同部位的結果枝，在雌花開花前套袋隔離，授粉后統計每種組合的授粉花數，待種子成熟后計算坐果率。以坐果率值在15%以下判定為不親和，在15%～50%判定為親和性差，大于50%判定為親和。

2結果與分析

2.1平歐雜種榛新鮮花粉活力的測定離體培養24h后，花粉在培養基上已充分萌發，見圖1。不同品種花粉活力有差異，但差異不大。結果見表1。總的來說，平歐雜種榛雄花新鮮花粉具有較強的活力。供試的6個品種樣品的平均花粉活力為84%，其中遼榛9號花粉活力最高，薄殼紅最低。品種間花粉活力的差異可能與采樣時間和花期有關，但高萌發率說明采集新鮮花粉可以滿足花期授粉的要求。

2.2授粉后不同親和材料柱頭—花柱相互作用光顯微鏡觀察授粉后的柱頭，花粉呈黃色，花粉管呈綠色。從圖2可以看出，親和授粉有2種不同表現：一種表現為柱頭上大量花粉粒已萌發，作用位點花粉管順利通過乳突細胞，伸入柱頭和花柱（圖2：A）；另一種表現為花粉附著量少，有的花粉管能萌發并順利通過乳突細胞，伸入柱頭和花柱（圖2：B），親和力不佳；兩種表現的差異可能與花粉的數量和活力有關。而不親和的組合表現為柱頭上附著的花粉粒少，柱頭呈收縮狀態，乳突細胞中積滿了胼胝質，未見花粉管伸入柱頭（圖2：C）。

2.3品種間親和性的熒光檢測方法從表2可以看出，6個平歐雜種榛均表現為自交不親和，不同品種間也會表現出正交或反交不親和，如薄殼紅和遼榛7號；有的品種（品系）間甚至表現為正反交均不親和，如達維和遼榛9號的組合。在所選的試材中，遼榛7號表現為對其他所測品種（品系）表現為正反交親和，表現了較好的授粉性能。

2.4品種間親和性的田間檢測方法由表3可以看出，選用的田間親和性調查組合結果與熒光檢驗結果（表2）基本一致，證明了熒光檢測法在檢測品種間親和性方面具有可行性。這說明無論田間檢測和熒光檢測都可以為品種親和性判斷提供準確的方法。在田間檢測過程中發現雜交榛子間品種自交或雜交不親和，不一定絕對導致絕收絕產，熒光檢測過程中發現不親和組合中有少量花粉管深入柱頭并生長也說明了這一點。

3討論

平歐雜種榛新鮮花粉表現了很高的花粉活力，這對田間生產過程中自然授粉成功提供了必要條件。通過檢測發現，平歐雜種榛品種間新鮮花粉活力有一定差異，但差異不大。歐榛的自交不親和性屬于孢子體型，發生不親和的部位一般在柱頭的表面，這給研究花粉和柱頭表面的識別反應提供了便利。花粉落到柱頭之后需要經過粘附、水合、萌發和花粉管穿過柱頭、在花柱內生長、穿過珠孔等一系列過程，才能實現受精。本試驗在授粉后通過熒光顯微鏡觀察平歐雜種榛不同品種間親和性，發現授粉后，花粉粒在雌蕊柱頭上粘附并萌發。此后，平歐雜種榛花粉與柱頭的親和力的表現為不親和、親和。對于親和性的組合，萌發的花粉管深入柱頭并伸長生長至下部；對于不親和的組合，花粉管不能深入柱頭，在柱頭出現胼胝質沉積。試驗中，少量花粉管生長至花柱中下部，表現的親和力較弱，這可能是由于授粉時花粉的數量少或活力較低引起的，但根據田間表現來看，可以判斷為親和。可見，平歐雜種榛的自交不親和性也應屬于孢子體型。品種間親和性檢測經過田間試驗和熒光檢測發現，兩種方法可以互相佐證，說明兩種方法均能鑒定品種間親和性，但由于田間試驗需要樣品量大，時間長，操作繁瑣，每年可作組合少，在實際應用過程中沒有熒光檢測法優勢明顯。因此，用熒光法代替田間法為我們快速準確鑒定品種間的親和關系，提供了一條有效途徑。

作者：劉振盼單位：遼寧省經濟林研究所