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1結(jié)果與分析

1．118SrDNA擴(kuò)增結(jié)果本試驗(yàn)研究了各樣品DNA真核生物內(nèi)源18SrDN段的pcr擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn):所有食用油樣品的擴(kuò)增均為陽(yáng)性，空白對(duì)照為陰性(圖1)。表明已提取到檢測(cè)樣品DNA，可用于PCR檢測(cè)。

1．2雞、牛肝臟DNA的梯度PCR擴(kuò)增結(jié)果本試驗(yàn)通過(guò)梯度PCR研究了雞、牛源性DNA擴(kuò)增的最佳退火溫度，結(jié)果發(fā)現(xiàn):雞源成分的擴(kuò)增，53．5℃下條帶模糊、雜帶較多表明有一些非特異性擴(kuò)增，55．2℃、56．6℃、57．5℃退火溫度下條帶均集中且雜帶較少，都可以作為PCR擴(kuò)增的退火溫度(圖2);牛源性成分的擴(kuò)增，4個(gè)退火溫度下目的條帶的擴(kuò)增效果都不錯(cuò)(圖3)。故選擇較高的退火溫度(57℃)擴(kuò)增雞源性DNA，選擇較高的退火溫度(55℃)擴(kuò)增牛源性DNA，以使PCR擴(kuò)增的特異性更強(qiáng)。

1．318SrDN段的擴(kuò)增結(jié)果本試驗(yàn)采用上述建立的PCR方法對(duì)提取的6份食用油樣品的DNA進(jìn)行雞、牛源性成分檢測(cè)。由圖4、圖5可以看出陰性對(duì)照(7號(hào)條帶)未出現(xiàn)條帶，陽(yáng)性對(duì)照(8號(hào)條帶)出現(xiàn)條帶，表明PCR檢測(cè)是可行的。雞源成分PCR檢測(cè)結(jié)果表明，食用油5、6的雞源成分?jǐn)U增結(jié)果為陰性，食用油1～4的擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性，由此說(shuō)明食用油1～4含雞源成分，而食用油5、6不含雞源成分。牛源成分PCR檢測(cè)結(jié)果表明，食用油4、5擴(kuò)增結(jié)果為陰性，食用油1～3和食用油6擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性，由此說(shuō)明食用油1～3和食用油6均含有牛源性成分，而食用油4和5不含有牛源成分。

2結(jié)論

試驗(yàn)在成功提取到DNA的條件下，對(duì)待測(cè)的油樣首先進(jìn)行真核PCR真核生物內(nèi)源18SrDN段的PCR擴(kuò)增，以確定已經(jīng)提取到的DNA可以擴(kuò)增且沒(méi)有假陽(yáng)性。然后分別進(jìn)行雞、牛源性成分的檢測(cè)，由結(jié)果可以看出只有食用油5中同時(shí)不含有雞、牛源性成分，而食用油1、2、3同時(shí)含有雞、牛源性成分，食用油4含有雞源性成分，食用油6含有牛源性成分。表明PCR技術(shù)在食用油中動(dòng)物源性成分檢測(cè)中的應(yīng)用是可行的。

提取到DNA是用PCR方法檢測(cè)油脂中動(dòng)物源性成分的前提，而油脂中的DNA大部分已經(jīng)破壞難以提取，Papul等認(rèn)為精煉油中已沒(méi)有遺傳物質(zhì)存在，而僅在粗制油中有DNA殘留，但實(shí)驗(yàn)證明精煉油中遺傳物質(zhì)仍然存在。試驗(yàn)過(guò)程中由于個(gè)人操作等原因會(huì)導(dǎo)致提取效果不理想或者提取失敗，因此在已有的方法上進(jìn)行不斷地探索以提高動(dòng)物油脂DNA的提取率是值得再研究的課題。邵碧英等提出加入擔(dān)體共沉淀方法能保證從油脂中提取到DNA。而運(yùn)用不同的DNA提取技術(shù)如核酸吸附方法，也可以提供較高質(zhì)量的DNA。同時(shí)對(duì)PCR產(chǎn)物可以進(jìn)行酶切，二重PCR進(jìn)行驗(yàn)證以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

作者：黃治國(guó)趙斌馮治平鄧杰劉燕梅單位：四川理工學(xué)院釀酒生物技術(shù)及應(yīng)用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室