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作用的多環(huán)節(jié)性這一特點(diǎn)與多系統(tǒng)性既有聯(lián)系又有區(qū)別。從中藥作用多系統(tǒng)性可知中藥藥效的多維性，如果治療只要求具體單一特異病理改變時(shí)，中藥亦可通過(guò)多種不同環(huán)節(jié)起效。中藥作用具有多環(huán)節(jié)特點(diǎn)的原因?yàn)椋阂皇怯捎诓煌幬锘騿误w的作用靶點(diǎn)廣譜性，二是因?yàn)榍笆鱿到y(tǒng)的復(fù)雜相互作用。然而受西方科研文化的影響，多以還原理論強(qiáng)調(diào)單環(huán)節(jié)效應(yīng)的觀察來(lái)評(píng)價(jià)藥效強(qiáng)弱，這也給中藥的研發(fā)帶來(lái)困擾。

1作用溫和緩慢

中藥作用強(qiáng)度總體上是溫和緩慢的，中藥多矢量作用合力的微量累計(jì)是中藥治病的優(yōu)勢(shì)，也是其副作用較輕較少的原因。由于一首復(fù)方中各有效物質(zhì)的濃度相對(duì)于單一的化學(xué)藥物來(lái)說(shuō)較低，進(jìn)入人體后就更低了。而中藥這種多種微量單體對(duì)眾多環(huán)節(jié)的微調(diào)，使機(jī)體歸復(fù)于平衡是中藥治病的重要基礎(chǔ)。但新藥藥效標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)對(duì)此是否定的，至少是不完整的。由于中藥的這些特點(diǎn)，我們唯一可做的就是盡可能采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，得出令人信服的科研結(jié)果，進(jìn)而有權(quán)重新制定或完善新藥評(píng)價(jià)體系。

2現(xiàn)代生物技術(shù)與中藥作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)

隨著生命科學(xué)的發(fā)展，尤其是分子生物學(xué)在各學(xué)科的滲入，中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究深入到了分子、基因、蛋白質(zhì)組水平。現(xiàn)代藥理研究表明，中藥作用原理與其生物活性成分調(diào)控基因表達(dá)有關(guān)[5]。研究發(fā)現(xiàn)：對(duì)即刻早期基因（IEGs）的表達(dá)產(chǎn)物是細(xì)胞核內(nèi)的第三信使，在細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮重要的生理作用，共有c-fos、c-jun、c-myc、c-egr4個(gè)家族。c-jun基因表達(dá)基因轉(zhuǎn)錄生成mRNA，核糖體以mRNA為模板翻譯成c-jun蛋白，c-jun蛋白與同時(shí)表達(dá)的c-fos蛋白通過(guò)亮氨酸拉鏈區(qū)結(jié)合構(gòu)成異構(gòu)二聚體AP-1。AP-1通過(guò)與靶基因promoter區(qū)TGAC/GTCA序列結(jié)合，刺激靶基因表達(dá)[6]。任永欣等在國(guó)內(nèi)首次復(fù)制了硝酸甘油型試驗(yàn)性偏頭痛動(dòng)物模型，并用免疫組化方法觀察IEGs，c-fos，c-jun的表達(dá)，結(jié)果顯示：硝酸甘油型試驗(yàn)性偏頭痛大鼠腦干、下丘腦c-fos、c-jun基因表達(dá)明顯增強(qiáng)，復(fù)方中藥頭風(fēng)飲能顯著抑制偏頭痛大鼠腦干、下丘腦c-fos、c-jun基因的增強(qiáng)表達(dá)，與對(duì)照組比較差異有顯著性[7]。還有對(duì)神經(jīng)肽相關(guān)基因表達(dá)的影響，對(duì)凋亡相關(guān)基因的影響等等。人類基因組計(jì)劃（HGP）為某一疾病多基因表達(dá)調(diào)控的研究帶來(lái)了機(jī)會(huì)，通過(guò)HGP篩選和分離出每種疾病相關(guān)的致病基因，再以其作為藥物作用靶標(biāo)研究中藥作用的分子機(jī)制，這可能是未來(lái)中藥藥理研究發(fā)展的趨勢(shì)之一。另外，基因芯片技術(shù)以其檢測(cè)迅速、分辨率高、檢出基因多而成為研究的先進(jìn)方法之一。生物芯片主要包括基因芯片和多肽芯片。生物芯片技術(shù)是指將大量（每平方厘米點(diǎn)陣密度高于400）探針?lè)肿樱―NA、RNA、多肽等）固定于支持物（膜、玻片、硅片等）上后與標(biāo)記的樣品分子雜交，通過(guò)檢測(cè)每個(gè)探針?lè)肿拥碾s交信號(hào)強(qiáng)度，對(duì)樣品分子進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析，其原理是利用生物大分子具有特異性互相識(shí)別能力，具快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化的優(yōu)點(diǎn)。利用基因芯片及mRNA差異顯示技術(shù)從分子水平探討中藥對(duì)疾病多基因治療作用機(jī)理，應(yīng)成為今后研究的主要方向之一。

3蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在新醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用

所謂蛋白質(zhì)組是指一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)組織基因組作表達(dá)的全部蛋白質(zhì)，它具有整體性、動(dòng)態(tài)性、系統(tǒng)性的特點(diǎn)。一方面，強(qiáng)調(diào)蛋白質(zhì)組是對(duì)應(yīng)于一個(gè)基因組的全部蛋白質(zhì)所構(gòu)成的整體；另一方面，明確提出蛋白質(zhì)組還是一個(gè)在時(shí)間和空間上都動(dòng)態(tài)變化的整體。蛋白質(zhì)組的研究流程大體上分為分離、鑒定、分析3個(gè)步驟[8]。即先從組織或細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，進(jìn)行雙向電泳實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離，含多種蛋白質(zhì)的樣品展開(kāi)成為有近千個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的繁星圖；然后進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品的顯色，對(duì)不同疾病、不同證候的蛋白質(zhì)與對(duì)照樣品進(jìn)行比較，尋找具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和豐度差異的蛋白點(diǎn)；切下待分析的蛋白點(diǎn)，使用胰蛋白酶消化；接著對(duì)消化后得到的多肽片斷進(jìn)行生物質(zhì)譜分析測(cè)定，得到肽指紋圖譜；最后，通過(guò)在數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定及功能分析，利用生物信息學(xué)的方法進(jìn)行比較研究。蛋白質(zhì)組學(xué)是從整體的角度，分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化著的蛋白質(zhì)組成成分、表達(dá)水平和修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間相互作用和聯(lián)系，揭示蛋白質(zhì)功能與細(xì)胞生命活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)。其不僅研究蛋白質(zhì)的構(gòu)象，更重要的是進(jìn)一步闡明不同蛋白質(zhì)、不同構(gòu)象功能的表現(xiàn)。它不是單純對(duì)蛋白質(zhì)的個(gè)體進(jìn)行研究，而是對(duì)人體的整個(gè)蛋白質(zhì)，即在蛋白質(zhì)組的基礎(chǔ)上進(jìn)行研究。蛋白質(zhì)是機(jī)體生物功能最終的執(zhí)行分子，單個(gè)蛋白質(zhì)的研究方式亦無(wú)法滿足后基因時(shí)代的要求。這是因?yàn)椋荷F(xiàn)象的發(fā)生往往是多因素的，必然涉及多個(gè)蛋白質(zhì)；多個(gè)蛋白質(zhì)的參與是交織成網(wǎng)絡(luò)或平行發(fā)生，或呈級(jí)聯(lián)因果；執(zhí)行生理功能時(shí)的蛋白質(zhì)表現(xiàn)是多樣的、動(dòng)態(tài)的。因此要對(duì)生命的復(fù)雜活動(dòng)有全面和深入的認(rèn)識(shí)，必然要在整體、動(dòng)態(tài)、網(wǎng)絡(luò)的水平上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行研究。

4蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)與中醫(yī)藥發(fā)展

中醫(yī)藥研究一直在謀求現(xiàn)代化發(fā)展，謀求為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有所闡釋而走向世界。但在此之前對(duì)單個(gè)分子的研究，很難反映中醫(yī)學(xué)的“整體觀念”和中藥作用“整體調(diào)節(jié)”的最基本特征。蛋白質(zhì)組學(xué)研究時(shí)代的到來(lái)，為中醫(yī)藥現(xiàn)代化發(fā)展帶來(lái)了新的契機(jī)。蛋白質(zhì)組學(xué)的“整體、動(dòng)態(tài)、網(wǎng)絡(luò)”的特點(diǎn)，與中醫(yī)理論“整體觀念”、“辨證施治”和中藥作用“整體調(diào)節(jié)”，“多層次、多靶點(diǎn)”調(diào)節(jié)等思想不謀而合。利用功能蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和策略，分析中醫(yī)證候及經(jīng)中藥處理過(guò)的組織、細(xì)胞或體液表達(dá)的蛋白質(zhì)組，并比較處理前后蛋白質(zhì)表達(dá)差異、蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)及相互作用的變化，系統(tǒng)地對(duì)證候本質(zhì)及中藥的多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)調(diào)整作用機(jī)理進(jìn)行研究，最終揭示證候的物質(zhì)基礎(chǔ)及中藥作用和配伍規(guī)律。目前中醫(yī)藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要集中在中藥藥理研究，單味中藥或復(fù)方的藥效和藥理研究是中藥作用研究的核心。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究治療前后的蛋白質(zhì)譜變化，在整體水平上評(píng)價(jià)中藥藥效，揭示中藥作用的靶點(diǎn)、作用環(huán)節(jié)和作用過(guò)程，力求闡明中藥多靶點(diǎn)、多層次作用的分子機(jī)理。文獻(xiàn)檢索結(jié)果顯示，目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要涉及少量中藥復(fù)方和少量中藥單體的研究。如苗蘭等研究血府逐瘀湯對(duì)氣滯血瘀證模型大鼠血清蛋白質(zhì)組表達(dá)的影響，經(jīng)雙向電泳分離血清總蛋白，并行圖像分析比較，發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯可影響7個(gè)蛋白點(diǎn)差異表達(dá)，分析可能與其作用機(jī)理相關(guān)[9]。申定珠等采用雙向凝膠電泳分離健胃愈瘍顆粒處理組和未處理組大鼠胃組織的總蛋白，結(jié)合圖像分析、質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)搜查，發(fā)現(xiàn)處理組有12個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)變化，且大多數(shù)蛋白質(zhì)與潰瘍復(fù)發(fā)的形成、生長(zhǎng)、凋亡及免疫相關(guān)[10]。運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的思路和方法研究中醫(yī)藥理論，雖然已取得了一定的進(jìn)展，但就實(shí)驗(yàn)研究方面來(lái)看，依然存在明顯的不足。具體表現(xiàn)在：（1）相當(dāng)部分研究?jī)H停留在蛋白質(zhì)成分分離和差異蛋白點(diǎn)顯示，未進(jìn)一步采用質(zhì)譜等鑒定分析，未對(duì)差異靶點(diǎn)之間進(jìn)行生物學(xué)分析，或未對(duì)差異靶點(diǎn)的確切意義進(jìn)行研究，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的應(yīng)用價(jià)值受到影響。（2）研究結(jié)果大多為平行發(fā)生或晚期事件，幾乎所有試驗(yàn)報(bào)道均未證實(shí)蛋白質(zhì)差異表達(dá)是必要的早期事件。（3）大多數(shù)研究缺乏必要的對(duì)照組。（4）對(duì)表達(dá)豐度較低的重要蛋白質(zhì)組的研究不足，對(duì)亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組的研究未見(jiàn)報(bào)道。針對(duì)上述問(wèn)題，我國(guó)藥學(xué)工作者應(yīng)關(guān)注生物醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展，了解更多的生物技術(shù)；利用各種生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行信息學(xué)分析，初步預(yù)測(cè)差異蛋白質(zhì)之間的相互聯(lián)系及可能參與的信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)；在研究中加設(shè)對(duì)照組，盡可能排除藥物或方法造成的干擾；對(duì)重要的差異蛋白質(zhì)作進(jìn)一步深入的研究，適時(shí)引入基因過(guò)表達(dá)或RNA干擾，或反義核酸技術(shù)，以明確差異蛋白質(zhì)在中藥調(diào)節(jié)中的必要作用；以蛋白質(zhì)組學(xué)篩選研究為基礎(chǔ)，利用系統(tǒng)生物學(xué)的思路和技術(shù)，對(duì)具有確切作用的重要靶蛋白進(jìn)行更深入的中藥相關(guān)研究；對(duì)于蛋白質(zhì)檢測(cè)，可根據(jù)需要靈活采用不同分辨率的染色技術(shù)；由于中藥作用多靶點(diǎn)、多層次的特點(diǎn)，在中醫(yī)藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，極可能篩選出某些未能確知生物學(xué)功能的差異蛋白質(zhì)，再根據(jù)研究結(jié)果提示，進(jìn)行生物學(xué)作用鑒定，有可能成為中醫(yī)藥學(xué)對(duì)生命科學(xué)研究的重要貢獻(xiàn)。所以中醫(yī)藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究不僅在于發(fā)現(xiàn)種種現(xiàn)象，更應(yīng)努力揭示現(xiàn)象的本質(zhì)，重視持續(xù)的深入研究，由點(diǎn)到面，由面及點(diǎn)，交叉整合蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)，推動(dòng)中醫(yī)藥研究的現(xiàn)代化。

5結(jié)論與展望

回首過(guò)去，中醫(yī)藥研究走過(guò)了坎坷而艱辛的歷程，但收效甚微；展望未來(lái)，21世紀(jì)的生命科學(xué)將由人類基因組計(jì)劃和后基因組時(shí)代、蛋白質(zhì)組計(jì)劃、生物信息學(xué)、生命科學(xué)數(shù)字化等部分組成[11]。面對(duì)這千載難逢的機(jī)遇，中醫(yī)藥研究要用先進(jìn)的方法論作指導(dǎo)，用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)完善自己，用前瞻性的眼光看待未來(lái)，把生物芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)等生物科學(xué)技術(shù)融入到中醫(yī)藥研究中將是揭示中醫(yī)藥科學(xué)規(guī)律的最佳切入點(diǎn)。

作者：施偲單位：武漢大學(xué)人民醫(yī)院