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《湘潭大學自然科學學報》2014年第二期

1實驗方法

1．1標準品溶液的制備取恒重的蘆丁對照品10mg于100mL容量瓶中，加70％乙醇溶解并定容，搖勻，即成標準品溶液．

1．2樣品溶液的制備準確稱取半枝蓮干粉1．000g，加到100mL蒸餾瓶中，加70％乙醇45mL，加適量活性炭，回流，冷至室溫，轉入50mL量瓶中，加70％乙醇定容，搖勻，即得樣品溶液．

1．3最大吸收波長的選擇取3支10mL容量瓶，1號為空白對照，2、3號中分別加入1mL樣品液和標準品溶液：依次加0．3mL5％NaNO2，溶解，靜置；分別加0．3mL10％Al（NO3）3，搖勻，靜置；再分別加4mL4％NaOH，用70％乙醇定容至10mL，搖勻，靜置后，在400～600nm進行波長掃描．

1．4標準曲線的繪制精密吸取蘆丁標準品溶液0．00、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00mL于6個容量瓶中：分別加入0．3mL5％NaNO2，溶解，靜置；然后分別加0．3mL10％Al（NO3）3，搖勻，靜置；再分別加4mL4％NaOH，用70％乙醇定容，搖勻，靜置15min后，最大吸收波長處測定其吸光度．以標準品的質量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線．

1．5總黃酮的半仿生法提取提取工藝如下：原料→烘干→粉碎→脫脂（石油醚）→減壓抽濾→稱量→超聲波輔助半仿生法提取→減壓抽濾→脫色（活性炭）→定容→顯色→測定黃酮類化合物的提取率．根據仿生學原理，模仿人體胃、小腸其pH值分別為2．0、7．5．準確稱取1．0000g半枝蓮樣品，加適量石油醚脫脂，過濾．乙醇－水作為浸取劑．第一次提取：模擬人體胃pH值，用1mol／LHCl將浸取劑調pH為2．0，在一定提取時間、溫度、料液質量比、乙醇濃度、超聲功率下進行總黃酮的提取，過濾，保留慮液、濾渣．第二次提取：模擬人體小腸pH值，用磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖溶液將浸取劑調pH為7．5，在第一次提取條件下用濾渣進行第二次總黃酮提取，過濾，保留慮液．合并2次提取液，加適量活性炭脫色，過濾，濃縮，定容．

1．6總黃酮提取率的計算式中：C為提取液中黃酮類化合物的濃度（mg／mL）；m為樣品質量（g）；V為提取液定容體積（mL）；n為稀釋倍數．

2結果與分析

2．1最大吸收波長

按1．3．3所述制備試樣方式進行試樣分光光度吸收波長掃描，測其吸光度，結果如圖1所示：由圖1可知，蘆丁標準品溶液和半枝蓮樣品溶液在510nm處均具有最大吸收峰值，且光譜形狀極為相似，形成的絡合物在常溫下穩定性較好，滿足分光光度測定的基本要求．因此，實驗選定510nm作為測定波長．

2．2標準曲線

按1．3．4所述制備蘆丁標準品溶液進行分光光度吸收波長掃描，測其吸光度，結果如圖2所示．對圖2蘆丁標準吸光度曲線進行線性回歸，得線性回歸方程y＝11．133x＋0．0066，R2＝0．9993．結果表明蘆丁標準品在0．01～0．05mg／mL時，質量濃度與吸光度呈良好的線性關系．

2．3提取半枝蓮總黃酮的影響因素

采用超聲輔助半仿生法提取半枝蓮總黃酮，其影響因素有超聲功率、提取時間、料液質量比、提取溫度和乙醇濃度等，下面通過實驗確定這些影響因素的最佳參數．

2．3．1超聲功率的影響稱取半枝蓮藥品1．0000g，分別采用不同的超聲功率50W、60W、70W、80W和90W，在提取時間25min、料液質量比1∶20、溫度60℃、乙醇體積分數70％條件下進行2次提取，合并2次提取液，定容后測其吸光度，計算黃酮類化合物提取率，結果如圖3．由圖3可知，在50～60W超聲功率條件下，總黃酮提取率隨功率增大而增大，60W時提取率最大，之后總黃酮提取率下降，且下降趨勢較大，故最佳超聲功率為60W．

2．3．2提取時間的影響稱取半枝蓮藥品1．0000g，采用不同的超聲提取時間20min、25min、30min、35min和40min，在超聲功率為60W、料液質量比為1∶20、提取溫度為60℃、乙醇體積分數為70％條件下進行2次提取，合并2次提取液，定容后測其吸光度，計算黃酮類化合物提取率，結果如圖4所示．由圖4可知，提取時間由20min延長到25min時提取率增加且幅度較大，當提取率到30min時提取率達到最大，再延長時間，提取率下降但趨勢緩慢．這可能是時間越長，超聲波對細胞膜破碎作用進一步加大，粘液等雜質相應增加，使溶液粘度增大，影響了有效成分的溶出，故最佳提取時間為30min．

2．3．3料液質量比的影響稱取半枝蓮藥品1．0000g，料液質量比（樣品與溶劑質量比）分別為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30和1∶35，在超聲功率為60W、提取時間為30min、提取溫度為60℃、乙醇體積分數為70％條件下進行2次提取，合并2次提取液，定容后測其吸光度，計算黃酮類化合物提取率，結果如圖5所示．由圖5可知，隨著料液質量比增大，總黃酮提取率也不斷增大，當料液質量比達到1∶30時，提取率達到最高．提取過程實質就是原料中的成分溶解并擴散到溶劑主體的過程，料液質量比大，有利于溶解、擴散，但溶劑量太大，過濾和溶解回收消耗動力過大，造成浪費，故選擇料液質量比選擇1∶30為最佳．

2．3．4提取溫度的影響稱取半枝蓮藥品1．0000g，提取溫度分別為40℃、50℃、60℃、70℃和80℃，在超聲功率為60W、提取時間為30min、料液質量比為1∶30、乙醇體積分數為70％的條件下進行2次提取，合并2次提取液，定容后測其吸光度，計算黃酮類化合物提取率，結果如圖6．由圖6可知，總黃酮提取率在40～60℃隨溫度升高而增大，這可能是由于溫度升高加快黃酮類化合物的溶解擴散速度，增加其在溶劑中的溶解量．繼續升溫總黃酮提取率有所降低，這可能是由于溫度過高，乙醇揮發嚴重而影響提取率．溫度為60℃時，黃酮類化合物提取率最高，故最佳提取溫度為60℃．

2．3．5乙醇濃度的影響稱取半枝蓮藥品1．0000g，乙醇體積分數分別為40％、50％、60％、70％和80％，在超聲功率60W、提取時間30min、料液質量比1∶30、提取溫度60℃的條件下進行2次提取，合并2次提取液，定容后測其吸光度，計算黃酮類化合物提取率，結果如圖7．由圖7可知，40％～50％乙醇濃度時總黃酮提取率逐漸增大，但趨勢平緩，當濃度達到60％時總黃酮提取率最大，隨著乙醇濃度繼續增大，總黃酮提取率反而下降．這可能是總黃酮（包括黃酮甙和甙元）黃酮甙在水和乙醇中易溶解，但甙元水溶性較差，而60％乙醇對黃酮甙和甙元都有較好的溶解性．乙醇濃度高而總黃酮提取率下降，這可能是乙醇濃度越高揮發性越大，不能較好進行提取，考慮經濟效益，故選擇60％乙醇濃度為最佳提取濃度．

3結論

采用超聲波輔助半仿生法對半枝蓮總黃酮的提取實驗條件參數進行了研究，最佳提取實驗參數為：超聲功率60W、提取時間為30min、料液質量比為1∶30、提取溫度為60℃、乙醇濃度為60％，在此條件下半枝蓮總黃酮提取率達2．14％．

作者：陳桂劉躍進肖翠單位：懷化學院化學與化學工程系湘潭大學化工學院