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《中國生物工程雜志雜志》2014年第七期

1制造

1．1總體要求

重組DNA技術產(chǎn)品安全有效的保障，不僅需要對目標產(chǎn)品的原液和成品進行質量控制，而且還需要對起始原材料和工藝過程進行充分控制。即應對包括細胞株的來源、鑒別和檢測、發(fā)酵或細胞培養(yǎng)、生產(chǎn)中使用的其它原材料、驗證純化工藝去除不需要物質的能力(特別是可能存在的病毒污染物、來自連續(xù)培養(yǎng)哺乳動物細胞的殘余DNA、宿主細胞蛋白等)、生產(chǎn)工藝中的過程控制、因生產(chǎn)工藝的變化對產(chǎn)品質量安全和有效性的潛在影響，以及原液和成品全面的質量分析均給予必須和足夠的重視。

1．2起始原材料的控制

重組DNA技術產(chǎn)品須采用經(jīng)過驗證的細胞庫系統(tǒng)進行生產(chǎn)，首先應將宿主與載體結合制備主細胞庫，再由主細胞庫制備工作細胞庫。并需建立相關文件，詳細描述培養(yǎng)、提取、純化的步驟以及對細胞庫批次的定義。如生產(chǎn)中使用人或動物來源的材料，則應符合病毒安全的有關要求。

1．1．1表達載體和宿主細胞應提供宿主細胞和表達載體起源、來源、遺傳背景和歷史的描述，包括克隆基因的來源和特性、該基因的構建和鑒別情況，以及表達載體遺傳特性和結構等詳細信息。同時應提供表達載體來源和各部分功能的說明，如:復制起始位點，啟動子，抗性標記，限制性內(nèi)切酶圖譜等。詳細描述表達載體擴增、對宿主細胞的轉化方法，以及生產(chǎn)用細胞克隆的篩選判定標準。提供表達載體在宿主細胞中的位置和物理狀態(tài)、如是否整合到染色體上，以及拷貝數(shù)和遺傳穩(wěn)定性資料。明確插入克隆基因、表達載體控制區(qū)及其兩側的核苷酸序列，與表達有關或與產(chǎn)

品質量相關的核苷酸序列均應詳細敘述。同時也應詳細描述在生產(chǎn)過程中控制、提高克隆基因在宿主細胞中表達水平的各種措施。1．1．2細胞庫系統(tǒng)重組DNA技術產(chǎn)品的生產(chǎn)中，其細胞庫系統(tǒng)通常包括主細胞庫和生產(chǎn)工作細胞庫。主細胞庫(maincellbank，MCB)由含目的基因表達載體轉化的原始細胞經(jīng)傳代擴增制成的均一懸液，并以等體積分裝于單獨容器中用于儲存(如，在液氮中)。在某些情況下，可能需要分別建立表達載體和宿主細胞的主細胞庫。工作細胞庫(workingcellbank，WCB)是從主細胞庫經(jīng)有限傳代而來的細胞材料的均一懸液，并以等體積分裝于單獨容器中用于儲存(如，在液氮中)。以上兩種細胞庫，所有的儲藏容器應在相同條件下妥善保管，一旦取出使用，不得再返回庫內(nèi)儲藏。細胞庫類型、容量、在預期使用頻率下細胞庫的壽命、保存使用的容器和封閉系統(tǒng)、包括凍存劑、培養(yǎng)基、冷凍保存步驟和存儲條件等細胞庫制備的方法均應詳細記錄在案，并提供在已優(yōu)化儲存條件下，庫存細胞穩(wěn)定性的證據(jù)。

1．1．3細胞庫的控制應對主細胞庫包括重組蛋白表達和/或表達載體在內(nèi)的相應表型和基因型標記進行鑒定。對特定主庫細胞基質的檢測，可根據(jù)細胞的生物學特性和培養(yǎng)的歷史背景進行相應調(diào)整，并且該鑒定的范圍和程度，可能會影響到后期生產(chǎn)階段細胞基質所需常規(guī)檢查的類型和級別。應采用分子生物學或其他適合的技術對表達載體基因拷貝數(shù)、基因插入或缺失、整合位點數(shù)量等情況進行分析。核酸酸序列應與表達載體一致，并與所預期表達的蛋白序列吻合。由于支原體、病毒等外源因子污染動物來源的細胞基質后，可以進行擴增，同時逆轉錄病毒等內(nèi)源因子也會引發(fā)安全問題，因此對細胞基質內(nèi)、外源病毒因子的檢測十分重要。應制定和建立細胞庫微生物有機體檢測的策略和方法，并考慮采用適當?shù)臋z測技術以確認某些特定病毒是否存在。通常受到內(nèi)、外源因子污染的細胞基質是不適合用于生產(chǎn)的。但也存在例外，例如CHO和其他攜帶內(nèi)源逆轉錄病毒的嚙齒類細胞株，已廣泛用于重組DNA技術產(chǎn)品的生產(chǎn)。在這種情況下，應納入風險降低與控制的策略，如在工藝中采用物理、化學或酶解等手段對其進行去除或滅活。應提供建立工作細胞庫的規(guī)程，每批WCB均應按規(guī)定進行一次全面的鑒別和純度測定，并制定包括分析方法、判定標準的在內(nèi)的WCB質量標準，新建WCB也應符合該質量標準的要求。

1．1．4細胞基質遺傳穩(wěn)定性應評估培養(yǎng)階段細胞基質的穩(wěn)定性，檢測項目包括但不僅限于如:形態(tài)學特征，生長特征，生化標記，免疫標記，目的產(chǎn)物的表達量，或其他相關的基因型和核型標記。插入的核苷酸序列應至少在每一個主細胞庫培養(yǎng)期末進行一次確認。長期發(fā)酵的多次收獲物會導致一些質量屬性的飄移，例如糖基化等。出現(xiàn)的“新”的變體可能會影響產(chǎn)品的質量、安全和有效性。這類飄移的管理應該在工藝驗證研究中妥善地處理，明確宿主細胞在長時間培養(yǎng)后，表達產(chǎn)物分子的完整性，并且明確細胞基質的表型和基因型的特征，并綜合上述特征提出生產(chǎn)用細胞最高限定代次。

1．3生產(chǎn)過程控制

生物技術藥物的生產(chǎn)工藝基礎是采用活體表達系統(tǒng)進行目標產(chǎn)品的制備，主要包括細菌、酵母和哺乳動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術等。建議應采用適當?shù)姆绞健z測頻率，證實細胞培養(yǎng)過程中無細菌、酵母和霉菌污染。由于某些生產(chǎn)細胞株可能或含有內(nèi)源性逆轉錄病毒，因此應建立相應的工藝和可靠的分析技術，證明在培養(yǎng)過程中有效的將所有病毒清除或滅活。對目標產(chǎn)品質量屬性、生產(chǎn)工藝的深入理解和全面的設計，是建立可重復的、可控的工藝，保證穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合原液和成品質量標準的策略的一部分。因此，生產(chǎn)工藝可接受標準的限度，應根據(jù)從研發(fā)早期到規(guī)模化生產(chǎn)的整個工藝生命周期范疇中所獲得信息進行調(diào)整。在原液和成品的生產(chǎn)中，需在關鍵決策步驟(criticaldecisionmakingsteps)實施工藝過程控制，其他工藝環(huán)節(jié)的支持數(shù)據(jù)可確保工藝的一致性。對那些影響原液質量的工藝參數(shù)應制定可接受標準進行控制。適當?shù)墓に囘^程控制能夠減少對原液和/或成品常規(guī)檢測的需求。

1．3．1細胞培養(yǎng)在生產(chǎn)過程中使用的每種材料(如:溶劑，試劑，酶)都應進行鑒定。應提供對這些原材料來源、質量和控制的資料。應適當提供證明這些原材料(包括生物來源的原料，如:培養(yǎng)基組成物，單克隆抗體，酶)符合既定用途質量標準(包括外來試劑的清除和控制)及物料供應商變更情況的資料。(1)有限傳代水平的生產(chǎn)應限定生產(chǎn)過程中的傳代或群體倍增的最高傳代次數(shù)(將從細胞凍融到生產(chǎn)結束的最大允許天數(shù)定義為細胞壽命的限度是可接受的)。應提供生產(chǎn)過程中培養(yǎng)、增殖和表達量一致性的數(shù)據(jù)。確立終止培養(yǎng)、廢棄培養(yǎng)物以及摒棄收獲物的標準。應提供經(jīng)過長時間的培養(yǎng)后宿主細胞的表型、基因型特性以及所表達基因的分子完整性、一致性信息。證明上述特征的試驗所涉及的傳代范圍應超過規(guī)定的細胞最高限定代次。還應建立生產(chǎn)末期宿主細胞/載體的一致性監(jiān)測手段，如質粒拷貝數(shù)及其在宿主細胞內(nèi)的狀態(tài)等。(2)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)除上述要求外，細胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)應根據(jù)系統(tǒng)穩(wěn)定性和培養(yǎng)期間產(chǎn)品一致性的信息，明確連續(xù)培養(yǎng)的最長周期，并進行培養(yǎng)周期全過程的監(jiān)測，監(jiān)測類型及頻率取決于產(chǎn)品和生產(chǎn)系統(tǒng)特點。應提供生產(chǎn)中產(chǎn)品變異體或其它培養(yǎng)參數(shù)未超過標準限度的數(shù)據(jù)。建立適合于收獲階段的微生物污染常規(guī)檢測，明確收獲物后續(xù)加工中對“批次”的定義。根據(jù)宿主載體系統(tǒng)的穩(wěn)定性和產(chǎn)品特性等確定對細胞、產(chǎn)品進行再評估的時間間隔。常規(guī)生產(chǎn)過程中，無論采用上述哪種培養(yǎng)方法，還均應符合現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質制備及檢定規(guī)程”的有關規(guī)定。

1．3．2純化(提取回收和純化extraction，recovery＆purificaiton)從發(fā)酵液或細胞培養(yǎng)液中提取、純化蛋白主要依賴于各種蛋白分離技術。細胞培養(yǎng)或者酵母等真核發(fā)酵的優(yōu)點是其蛋白產(chǎn)物大多都會分泌到培養(yǎng)液中，因此只要去除細胞或酵母就可以初步獲得較高純度的目的蛋白;而對于大腸桿菌等原核生產(chǎn)系統(tǒng)，常需要裂解細菌才能獲得目的蛋白。分離純化中，來自宿主細胞破碎后的微量蛋白酶會破壞蛋白的穩(wěn)定性，且很難被去除，因此快速純化目的蛋白十分重要。在采用各種分離純化方法及任何新技術中，須保證分離純化手段的穩(wěn)定，如確保層析柱的柱效等性能一致。并對純化工藝中可能殘存的有害物質進行嚴格檢測，這些組分包括但不僅限于固定相或者流動相中的化學試劑、各類親和層析柱的脫落抗體或配基、以及可能對目標產(chǎn)品關鍵質量屬性造成影響的各種物質。同時生物技術來源產(chǎn)品含有一些特定雜質，包括病毒、支原體等外源因子、核酸、宿主蛋白、內(nèi)毒素以及源自培養(yǎng)液的各種其它殘余物質，因此需特殊的工藝將其去除或降低至可接受的水平。殘留細胞DNA(rcDNA):生產(chǎn)工藝的優(yōu)化應考慮到對殘留宿主DN斷的大小、殘留量和生物活性的影響。采用適宜的方式將rcDNA總量降至可接受的水平，并就降低rcDN段的大小、或者滅活其生物活性的方式進行說明。通常產(chǎn)品中rcDNA水平應處于小于10ng/劑量至10pg/劑量的范疇。病毒清除:對于人和動物源的細胞基質，病毒去除或滅活工藝均應充分顯示能去除/滅活任何污染病毒、確保原液的安全性。該工藝應在小規(guī)模研究中驗證，并仔細選擇所用指示病毒，以評估所選擇生產(chǎn)工藝整體去除/滅活病毒的能力，并確定病毒載量下降程度明顯達到安全性邊界。

1．4生產(chǎn)工藝變更

在重組dna產(chǎn)品的生命周期中(lifecycle)，通常因工藝改進、規(guī)模擴大、場地變換、穩(wěn)定性改進、或遵循法規(guī)要求的變化而進行相應的變更。當生產(chǎn)工藝發(fā)生重大變更的時候，應對變更前后生產(chǎn)工藝對重組DNA產(chǎn)品質量、安全性和有效性的影響進行比較和評估。這些可比性研究雖不意味著變更前后質量屬性必須完全相同，但須證明它們的高度相似，并且現(xiàn)有知識能充分預測并確保任何質量屬性方面的差異對安全性和有效性無負面影響。并應解釋重大變更的原因，評估變更對質量、安全和有效性的潛在影響。

2質量控制

生物技術產(chǎn)品的質量控制與產(chǎn)品大小、結構特征、質量屬性復雜程度和生產(chǎn)工藝相關。其質量控制體系主要包括:原輔料檢驗和放行、生產(chǎn)和過程控制及文件、無菌工藝、常規(guī)放行檢定等。應通過終產(chǎn)品檢測、過程控制和工藝驗證結合的方法，確保各類雜質已去除或降低至可接受水平。生物技術產(chǎn)品質量控制的基本原則同樣包括使用參照物質、用經(jīng)驗證的方法來評估已知和/或潛在產(chǎn)品、工藝相關物質。其和傳統(tǒng)藥物質控最主要差異是用于產(chǎn)品鑒別，一致性，純度和雜質檢測的分析方法不同。

2．1表征分析在研發(fā)階段以物理、化學和生物學方法對重組DNA產(chǎn)品的理化特性、生物學活性、免疫學特性、純度和雜質等進行嚴格的表征分析鑒定是至關重要的，并有助于質量標準的確立。對產(chǎn)品各種屬性進行充分鑒定分析的初衷，是為了確保產(chǎn)品安全有效。因此需采用廣泛的分析技術來展示目標分子不同的理化性質(分子大小、電荷、等電點、氨基酸組成、疏水性等)。對糖基化等各種翻譯后修飾也應充分鑒定，并納入適當?shù)臋z測以確認產(chǎn)品具有預期的構象、聚集和/或降解狀態(tài)及其高級結構。并應在適合的時候或條件下，將各類新型分析技術應用于表征分析。

2．1．1理化特性(1)一級結構一級結構，即包括二硫鍵連接方式的氨基酸序列。應盡可能使用綜合的方法測定目標產(chǎn)品的氨基酸序列，然后與其基因序列推斷的理論氨基酸序列進行比較。應注意可能存在的N末端甲硫氨酸(如:大腸桿菌來源的產(chǎn)品)，信號或者前導序列和另外可能的N、C末端修飾(如:乙酰化，酰胺化或者由于外肽酶導致的部分降解)，以及各種因N端和C端氨基酸序列變化導致的末端異質性(如:C端加工、N端焦谷氨酸、脫酰胺化，氧化，異構化，碎片化，二硫鍵錯配，N-連接和O-連接的寡糖，糖基化，聚集)。同時還應確定游離巰基和二硫鍵，并就二硫鍵的完整性和正確性進行分析。(2)糖基化修飾應對糖基化修飾進行全面的分析和確定，如糖基化修飾與清除和生物學活性相關，則應確定糖的含量(中性糖，氨基糖和唾液酸)。另外，應盡可能對糖鏈的結構、糖型(觸角、多糖本身的信息及特定位點的多糖分析)以及多肽鏈的糖基化位點進行深入分析。應特別注意的是，糖型結構可能與不良反應相關(如非人類的糖型結構或其殘基)，必要時應進一步就電荷異質性進行檢測分析。(3)高級結構應通過適合的物理化學方法表征高級結構并且通過生物學功能來確認。除生物學活性對高級結構的確證以外，體外或體內(nèi)證實其治療功能(functionalactivityofthetherapeutic)的活性分析方法，也可作為高級結構確證的補充。聚乙二醇修飾蛋白的分析不僅限于修飾的平均率，還應包括修飾位點及占據(jù)位點的分析。

2．1．2生物學活性生物學活性是指產(chǎn)品能實現(xiàn)確定的生物學效應的特定能力或潛力。生物學活性應通過體外、體內(nèi)、生物化學(包括:免疫化學試驗)的方法和/或適合的物理化學分析方法評估。效價測定(如:以單位、或國際單位表示)是與產(chǎn)品生物學特性相關屬性為基礎的生物學活性定量分析，而含量(以質量/重量表示)是物理化學方法測定的產(chǎn)品含量。對于效價的評價和賦值，在臨床情況下，采用反映產(chǎn)品生物學活性的生物測定是較好的方式，但在批放行中未必是可行或者必須的。例如:一些蛋白功能方面的生物學測定或者作用機制評價方法(并不是預期的臨床效果)也可作為效價分析和賦值的基礎。

2．1．3免疫化學特性需全面說明產(chǎn)品的相關免疫學特性。并應使用純化的抗原和抗原確定的區(qū)域進行結合實驗測定。如可能的話，應確定親合力和免疫反應性(包括與其它類似結構蛋白的交叉反應性)。對目標分子中，與相應表位作用的部分應盡可能的表征確證，如應包括這些結構的生物化學鑒別(如;蛋白質，低聚糖，糖蛋白，糖脂)和相關適合的特征研究(氨基酸序列，糖型)。由于糖基化和聚乙二醇化可能對產(chǎn)品的藥理學性質產(chǎn)生影響，并可能影響其免疫原性，因此應進行適當?shù)谋碚餮芯俊?/p>

2．1．4純度、雜質和污染物生物技術產(chǎn)品異質性的幾個來源(如:C-端加工，N-端焦谷氨酸化，脫酰氨化，氧化，異構化，片段化，二硫鍵錯配，N-連接和O-連接的寡糖，糖基化，聚集)通常造成其組成中存在幾種分子或變異體，導致了其純度/雜質情況的復雜性，因此需要通過綜合的方法來評估，對于產(chǎn)品相關物質和雜質應建立個體的和/或總體的可接受標準。雜質可能與生產(chǎn)工藝或與產(chǎn)品本身相關。如可能，這些雜質應盡可能地被分析鑒定，并采用適宜的方法評價其對生物學活性的影響。同時應恰當?shù)罔b別、評估潛在的工藝相關雜質(如:宿主細胞蛋白，宿主細胞DNA，細胞培養(yǎng)殘留物，下游工藝的殘留物)，并對其定性和/或定量分析。污染物，包括所有引入且并非生產(chǎn)過程所需的物質(如:各種微生物，內(nèi)毒素)。應嚴格避免引入污染物/或對其進行相應控制。還應考慮采用其他檢測方法，對可能的包括肽聚糖等在內(nèi)的“非內(nèi)毒素促炎性污染物”進行控制。(1)工藝相關的雜質和污染物工藝相關的雜質來源于生產(chǎn)工藝本身，主要包括細胞基質來源、細胞培養(yǎng)來源和下游工藝來源這三類。過程相關的雜質，并且可以分為三個主要類別:細胞物質衍生，細胞培養(yǎng)衍生和下游衍生。另一方面，例如外源病毒等污染物，因意外引入至生產(chǎn)工藝，并且是對生產(chǎn)工藝無用的材料。(2)產(chǎn)品相關物質和包括降解產(chǎn)物的雜質為了確定各種類型的修飾，可能需要付出相當大的努力對目標產(chǎn)品的各種分子變異體進行分離、鑒別和分析。當這些變異體的活性與目標產(chǎn)品一致時(comparable，一致性?)，這些變異體應被包括在產(chǎn)品的純度中。但應適當考慮在生產(chǎn)和/或儲存期間產(chǎn)品降解產(chǎn)物是否顯著增加。3．1．5含量應采用適宜的物理化學和/或免疫化學方法進行含量測定。以適宜的參考品為對照，蛋白含量(以質量/重量表示)可通過合適的方法進行測定(如:HPLC)。蛋白含量也能通過一個絕對定量的方法測定，例如:采用280nm處的消光系數(shù)，并以紫外分光光度法測定。建議采用第二種絕對定量的含量測定方法進行溯源和驗證，如果偏差太大，應考慮采用其他方法重新測定。

2．2常規(guī)放行質量控制在原液和成品的日常放行檢定中，并不需要進行所有的表征分析檢測。其中一些檢測可能僅需在最初和/或定期進行，以建立或驗證產(chǎn)品在生產(chǎn)過程的有效性或可接受性，如對生產(chǎn)初期的批次進行全面深入的表征分析，以確認在鑒別、純度和效價等方面的一致性。而另一些檢測要求在常規(guī)質量控制中進行。應對某一特定質量屬性是否放入常規(guī)放行標準予以說明。應對一定數(shù)量的連續(xù)批次進行分析，以確定分析參數(shù)的一致性。任何批間的差異均應得到關注。應根據(jù)這些研究中得到的數(shù)據(jù)，綜合臨床和非臨床研究，以及穩(wěn)定性評價中收集的數(shù)據(jù)作為建立產(chǎn)品質量標準的基礎。質量標準是一系列包括各種分析方法、及含有具體數(shù)值限度、范圍可接受標準的綜合描述。其目的是為了使原液、成品或原料在其生產(chǎn)的各階段符合其預期用途所建立的一系列標準。“符合質量標準”意味著當按照列出的分析程序檢測原液和成品時，其質量符合可接受標準。質量標準的可接受范圍應依據(jù)研發(fā)過程收集的數(shù)據(jù)，包括從非臨床、臨床和穩(wěn)定性研究得到的數(shù)據(jù)。可接受標準的范圍確定應該考慮到所使用的分析方法的靈敏度。

2．1．1鑒別鑒別實驗應高度特異，并應基于分子結構和/或其他專有屬性的獨特之處進行分析(如:肽圖，抗獨特型免疫或其他適宜的方法)。根據(jù)不同產(chǎn)品，其鑒別試驗可能需要不止一種檢測(物理化學的、生物和/或免疫化學)，這些檢測應具備充分的特異性，以區(qū)分在同一生產(chǎn)設施下生產(chǎn)的其它產(chǎn)品。

2．1．2純度和雜質需采用類似正交組合的方法來評估重組DNA產(chǎn)品純度/雜質的復雜的情況，并為產(chǎn)品相關的變異體建立單獨和/或總體的可接受標準。此外如適用，這些控制可進一步的確保產(chǎn)品的一致性。質量控制計劃中包括的對工藝相關雜質的質量控制(如:蛋白A、宿主細胞蛋白、DNA、其他潛在的培養(yǎng)或純化殘留物)是原液質量標準的典型組成部分。在一些情況下，如經(jīng)充分證明，工藝相關雜質的質量控制可在恰當工藝步驟中的中間產(chǎn)品進行。如經(jīng)充分驗證，生產(chǎn)工藝對工藝相關雜質的去除已達到高水平時，則這些工藝相關雜質的測定并非必須列入常規(guī)放行標準。

2．1．3效價效價測定是以產(chǎn)品生物學特性相關屬性為基礎的生物學活性定量分析，并且只要有可能，效價測定應反映或模擬其作用機制。比活性(每毫克產(chǎn)品具有的生物學活性單位)對證明產(chǎn)品的一致性具有重要的價值。只要有可能，原液和最終制劑的每個批次的效價應該使用適宜的國家或國際參比品，這個參比品的單位生物活性(比活性)通常已經(jīng)過校準，例如國際單位(IU)。如果沒有這樣的參比品，經(jīng)批準的內(nèi)控參比品也可以用于方法的標準化(saystandardization)。

2．1．4含量采用適宜方法和參考品作為對照，測定原液和成品的含量3．1．5常規(guī)檢測應該根據(jù)相關產(chǎn)品的個論視情況而定。檢測可以包括外觀(例如，形狀、顏色)、溶解度、pH值、摩爾滲透壓、裝量、無菌、細菌內(nèi)毒素、穩(wěn)定劑和水分、可見和亞－可見微粒。

2．3包裝及密閉容器系統(tǒng)原液和成品密閉容器系統(tǒng)的描述應包括容器組成成份的說明。如果蛋白質和制劑輔料和/或容器包裝系統(tǒng)發(fā)生物理化學作用，可能導致潛在的免疫原性復合物形成。應評估但不僅限于容器吸附、產(chǎn)品和包裝材料之間的浸出、容器完整性、產(chǎn)品免于污染及保持無菌的適用性，并描述預期用途。

3標簽、儲存和運輸

除按中國藥典對藥品標簽規(guī)定的內(nèi)容外，標簽還應標示下列內(nèi)容:(1)每毫升的國際單位數(shù)(如必要);(2)每瓶容器的單抗含量或蛋白含量;(3)每瓶容器中液體樣品的體積;(4)凍干粉中;(5)所加復溶液體的名稱及體積;(6)復溶后的使用期限，確保該期限內(nèi)各項檢測均應符合規(guī)定的標準;(7)使用之前進行適量稀釋(如果需要)。運輸條件應能確保產(chǎn)品保持在適合的環(huán)境條件下。

4討論及展望

歐美藥典、ICH、WHO關于生物技術藥物的技術指南和法規(guī)，其文件框架的科學性和邏輯性，有效確保文件整體的邏輯關系，各組成篇幅定位明確，詳略得當，逐步深入，有的放矢，并遙相呼應，并充分體現(xiàn)藥品的質量源于設計，而非靠檢測即可保證(ICHQ8［17］)的內(nèi)涵，這一國際公認的藥品質量控制理念已逐漸被研發(fā)主體、藥品監(jiān)管機構接受。以歐洲藥典為例(見圖1)其層次可分5個層面，并且逐級邏輯遞進。第1層面為“介紹、注意事項2個部分”對藥典構成、使用范圍、注意事項進行描述，可讓首次接觸藥典的人員對EP總體框架和技術構成有比較全面的了解。明確藥典和需要開展工作之間關系，即明確作什么樣的事。第2個層面包括“分析方法、材料與容器、試劑3個部分”，通過對分析方法學、檢驗涉及的材料與容器、試劑的要求進行說明，即開展工作相關實驗條件的硬件準備。第3個層面包括“通則、總論、劑型3個部分”，對質量控制中均需要考慮的代表性通用問題以指導原則方式(通則)進行了描述，再對各類品種總體要求(總論)不同劑型的要求進行分述———即對各類品種質量控制中需要遵從總體原則進行了系統(tǒng)說明，即需開展工作相關實驗條件的軟件準備。因此總論歐洲藥典框架中發(fā)揮著承上啟下的重要作用，也是上述內(nèi)容與藥品各論建立的基礎和技術依托。第4個層面是在總體需考慮各類問題已明確闡述基礎上，再對“疫苗、免疫血清、放射藥、縫合用制品、天然藥物、同種/順勢療法產(chǎn)品”這些有效成分尚不明確、多組分、需要特殊考慮控制產(chǎn)品的質量控制以標準各論形式收錄。第5個層面是各類結構得到確證藥品的標準各論，并以藥品名稱首字母排序的方式收錄。重組DNA技術產(chǎn)品絕大多數(shù)為化學結構可以確證的蛋白類生物治療藥物，在各論體例中開篇即以化學式和氨基酸一級結構表述，因此以重組DNA技術制備生物治療產(chǎn)品的標準各論則均收錄于本部分。因各種產(chǎn)品生產(chǎn)單位不同、劑型、配方、規(guī)格、給藥途徑等差異，各論部分僅對原液質量要求進行規(guī)定，同時因生產(chǎn)工藝和過程控制不同，在原液質控中沒有統(tǒng)一規(guī)定對殘留宿主細胞蛋白、DNA的可接受標準，其相應的科學性支持來自其他質量控制指南［18］。綜上所述，歐洲藥典首先在提出確保藥品質量安全需要考慮通用性問題的大框架(無菌制劑、細胞基質、有機溶劑殘留、統(tǒng)計分析原則等)基礎上;再以總論形式對各類產(chǎn)品的定義、特性進行描述，并針對其生產(chǎn)、過程控制需要注意的問題提出進一步的要求;最終通過產(chǎn)品各論的具體檢測項目設置、方法選擇和技術標準的確定，在終產(chǎn)品的質量控制細節(jié)上予以體現(xiàn)。同時各論中所描述的檢測方法和技術、所涉及器材又在分析方法、材料與容器、試劑等部分予以詳述。整體充分體現(xiàn)了藥品的理想質控狀態(tài)需要從基于QbD的藥物研發(fā)、質量風險管理、藥物質量體系三方面共同著手(ICHQ8，9，10［17，19-20］)。總體來說EP的通則、總論、產(chǎn)品各論之間各自定位準確、詳略適中、邏輯逐進、首尾呼應。在通讀相關各部分的基礎上，可以比較系統(tǒng)了解和把握相關產(chǎn)品由研發(fā)至終產(chǎn)品全過程的質量控制點。EP在現(xiàn)有收錄品種的基礎上，對尚未收錄各論的產(chǎn)品如“人用單克隆抗體”設有品種總論，而USP不僅收錄單抗類產(chǎn)品，同時對尚未獲準上市的產(chǎn)品、即仍處在研究階段的基因治療產(chǎn)品也提出了總體技術要求(GeneralChapter1046)［21］。上述前瞻性的總體質量要求雖然是作為參考信息，但這些章節(jié)與藥典的其他部分共同在產(chǎn)品的過程控制、終產(chǎn)品檢測環(huán)節(jié)對此類產(chǎn)品的質量控制提出了基本要求，并進行了指導。此類前瞻性的工作對相關產(chǎn)品的研發(fā)，產(chǎn)業(yè)化進程、以及安全、有效性的保障具有十分積極的意義。因此在相應軟件、硬件篇幅的總體支撐基礎下，歐美藥典關于重組DNA技術產(chǎn)品的質量文件框架可以見圖2，即生物技術藥物總體在重組DNA產(chǎn)品總論框架基礎上，根據(jù)品種共性進行分類，特別是由于單克隆抗體類生物治療藥物，因其可被平臺化的技術制備和分析，并且質量屬性和分析方法通用性程度較高，因此在EP、USP中均設有抗體產(chǎn)品總論，而包括病毒載體類基因治療藥物，也有可能參照類似邏輯框架，待時機成熟時納入品種各論。縱觀國外藥典等法規(guī)和技術指南，因其專業(yè)性較強，無法在一個文件中進行大而全的寬泛性描述，所以包括歐洲藥典在內(nèi)的法規(guī)框架，多以靈活的模塊形式體現(xiàn)。該模塊化形式不僅在相應篇幅為其他更加細節(jié)和專業(yè)的法規(guī)指南設有過渡自然的對接窗口、方便呼應支持，而且該設置在不影響文件總體框架、功能的前提下，便于未來根據(jù)技術和理念的進步，對相應組成篇幅進行及時更新。相信在未來在汲取并確保科學性內(nèi)涵與靈活框架精髓的基礎上，制定符合我國國情、滿足監(jiān)管需求的專業(yè)技術指南和法規(guī)，一定可積極推動我國生物技術藥物質量水平的持續(xù)提高。

作者：高凱任躍明王蘭郭中平王軍志單位：中國食品藥品檢定研究院國家藥典委員會