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摘要:本研究用平板法從熱帶牧草青貯飼料中篩選出兩株阿魏酸酯酶活性較強的乳酸菌W16及H22，經過生理生化及16SrDNA序列同源性分析，這兩株乳酸菌分別被鑒定為戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)及發酵乳桿菌(Lactobacillusfer-mentum)。

關鍵詞:阿魏酸酯酶;乳酸菌;青貯飼料

纖維素酶常被作為青貯添加劑，以期降解植物細胞壁成分，為乳酸菌提供更多的可溶性糖發酵產酸，提高青貯品質，這點對可溶性糖含量低、纖維含量高的飼草來說至關重要。在植物細胞壁組織中，阿魏酸等酚酸類木質素分子以酯鍵方式與半纖維素分子間形成致密網狀交聯結構，在提高了植物組織木質化程度的同時，從空間上可以阻遏微生物所分泌的纖維素酶、木聚糖酶等對纖維素和半纖維素的有效酶解，阿魏酸酯酶可打開細胞壁中的酯鍵，有利于飼草細胞壁中纖維素和半纖維素的進一步酶解。大量研究證實，阿魏酸酯酶可以協同纖維素酶、木聚糖酶促進植物纖維組分的降解。主要應用在生物質轉化領域;近年來，國外有研究將阿魏酸酯酶應用于青貯飼料添加，發現其對纖維消化率有顯著促進作用［1］。

1材料與方法

1.1菌株篩選試驗從熱帶牧草青貯飼料分離出乳酸菌56株。參考Donagy的方法［2］，滅菌不含葡萄糖成分的MRS瓊脂，配制阿魏酸乙酯10%溶液，待MRS培養基溫度降低至60℃左右時，按照1%的量加入阿魏酸乙酯溶液(阿魏酸乙酯終濃度1g/L)，混勻，此為篩選培養基，將乳酸菌接種到篩選平板上，30℃厭氧培養48h，觀察平板上是否出現透明圈。

1.2菌株鑒定根據乳酸菌生理生化特性、API50碳源發酵結果以及16SrDNA序列分析對篩選菌株進行鑒定。

2結果與分析

2.1阿魏酸酯酶乳酸菌的篩選經過48h培養，56株乳酸菌中有7株在篩選平板上產生明顯的透明圈(見表1)，其中兩株編號為W16及H22的菌株產生的透明圈最大，直徑達到8mm以上，表明這兩株乳酸菌的阿魏酸酯酶活性最強。這兩株乳酸菌都是革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶陰性。W16為球菌而H22為桿菌。如表2所示，兩株菌都能在3.0%(W/V)的NaCl濃度下正常生長，甚至能夠耐受6.5%(W/V)的NaCl濃度。W16可以耐受5℃低溫，H22耐受50℃的高溫。兩株菌可以耐受的pH范圍為3.5～9.0，W16在pH3.0的酸性環境中依然可以良好生長。將兩株乳酸菌測得的16SrDNA序列遞交到GenBank，使用程序Blast來找尋與其有最大同源性的序列，并與檢測得到的標準菌株序列信息通過CLUSTALW軟件比對。采用鄰接法構建進化樹，在分子進化樹上，菌株W16和Pediococcuspentosaceus最接近，菌株H22和Lactoba-cillusfermentum序列相似性最高，結合生理生化試 驗結果分析，W16被鑒定為Pediococcuspentosaceus，H22被鑒定為Lactobacillusfermentum。

3結論

本試驗篩選到兩株具有較強阿魏酸酯酶活性的乳酸菌菌株W16及H22，經生理生化及16S序列分析，W16被鑒定為Pediococcuspentosaceus，H22被鑒定為Lactobacillusfermentum。兩株菌在青貯菌劑開發中具有潛在應用價值。

作者：李東霞 鄭玉龍 張穎超 林炎麗 楊富裕 單位：中國農業大學動物科技學院