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［摘要］目的對百蕊草中親水性化學成分進行研究。方法采用硅膠柱色譜、SephadexLH－20凝膠柱色譜等分離手段，對百蕊草水提取物經AB－8大孔樹脂吸附，50％乙醇洗脫的親水性組分（TT50）進行分離純化，應用核磁共振波譜分析、結合文獻報道鑒定化合物結構。結果從TT50中分離純化得到6個化合物，分別鑒定為：山奈酚（1），紫云英苷（2），山奈酚－3，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（3），山奈酚－3－O－L－吡喃鼠李糖基（1→2）－β－D－吡喃葡萄糖苷（4），山奈酚－3－O－L－吡喃鼠李糖基（1→2）－［6－O－乙酰基］－β－D－吡喃葡萄糖苷（5），蕓香苷（6）。結論TT50中主要成分為以山奈酚為母核的黃酮苷類化合物，化合物4、5為首次從百蕊草中分離得到。

［關鍵詞］百蕊草；化學成分；黃酮苷

百蕊草（ThesiumchinensisTurcz）為檀香科百蕊草屬多年生寄生草本，別名細須草、一棵松、青龍草等，常附著在其他植物的根上生長，在我國分布較廣，主要產地為安徽、浙江和湖北等省。百蕊草性寒，味辛、澀，歸肺、腎二經，有清熱解毒、補腎固精之功效，具有良好的抗炎、解熱、鎮痛、抗菌等作用［1］。本課題組研究發現，百蕊草水提取物對腎病綜合征大鼠和IgA腎病大鼠均有良好的治療效果，其水提取物經AB－8大孔樹脂吸附，50％乙醇洗脫（TT50）的親水性組分顯示出良好的腎臟保護作用，提示TT50組分是其有效成分的富集部位［2，3］。本研究在前期藥理實驗結果的基礎上，采用硅膠柱色譜、SephadexLH－20凝膠柱色譜等方法對百蕊草的親水性組分TT50進行化學成分分離純化，通過理化性質及波譜測定鑒定其化學結構。從中分離得到6個黃酮及黃酮苷類化合物，分別為：山奈酚（1），紫云英苷（2），山奈酚－3，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（3），山奈酚－3－O－L－吡喃鼠李糖基（1→2）－β－D－吡喃葡萄糖苷（4），山奈酚－3－O－L－吡喃鼠李糖基（1→2）－［6－O－乙酰基］－β－D－吡喃葡萄糖苷（5），蕓香苷（6），其中，化合物4、5為首次從百蕊草中分離得到。

1儀器與材料

BrukerDRX－500核磁共振儀（德國布魯克儀器有限公司）；Mat－212磁式質譜儀（EI－MS），LC－10AT色譜泵，SPD－10A紫外檢測儀（日本島津公司），N2000色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究所）；旋轉蒸發儀（上海申生科技有限公司）；80－1離心沉淀器（上海手術器械廠）；AB104－N電子分析天平（梅特勒－托利多）；SHB－ⅢS循環水式多用真空泵（上海大顏儀器設備有限公司）。AB－8大孔吸附樹脂（天津歐瑞生物科技有限公司）；SephadexLH－20凝膠（AmershampharmaciaBiotech公司）；色譜用硅膠、層析用硅膠G－254板（煙臺江友硅膠開發有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（德國默克股份兩合公司）；其他試劑均為分析純。百蕊草樣品購自河南駐馬店，于2015年9月采集自河南泌陽縣金滿農場，由第二軍醫大學藥學院生藥學教研室孫蓮娜副教授鑒定為檀香科百蕊草屬百蕊草（ThesiumchinensisTurcz）的干燥全草。

2提取分離

百蕊草全草5．0kg，切成2cm左右小段，洗凈，加水煎煮2次，每次2h。合并煎液，加水至30L，攪拌，冷卻后靜置過夜。上清液經4．0kgAB－8大孔樹脂柱吸附2次，純化水洗滌至洗出液無色后，樹脂柱依次用20％、50％乙醇梯度洗脫。減壓回收洗脫液中的乙醇后分別得到百蕊草大極性組分位（TT20）干浸膏105g，中等極性組分（TT50）36g。取TT50組分30g，經硅膠分散，上硅膠柱色譜，二氯甲烷／甲醇梯度洗脫，薄層色譜（TLC）檢測，分別得到8個組分。各組分經反復膠柱色譜分離，以氯仿－甲醇（1∶1，V／V）為流動相，SephadexLH－20凝膠柱色譜純化，TLC和HPLC純度分析，得到化合物1（35mg）、2（210mg）、3（40mg）、4（2．32g）、5（135mg）、6（30mg）。

3結構鑒定

各化合物核磁共振波譜測定（H1－NMR、C13－NMR、HH－COSY、HMBC）委托第二軍醫大學藥學院分析測試中心進行。

4討論

百蕊草的主要化學成分為黃酮及黃酮苷類化合物［7－9］，其乙酸乙酯提取部位為其抗炎、止痛作用的有效部位，主要有效成分是山奈酚和紫云英苷［1］。本研究的對象TT50組分對腎臟損害具有較好的保護作用，從中分離得到的6個單體化合物，除了蕓香苷，其余均為山奈酚或以山奈酚為母核的黃酮苷類化合物，且含量較高，提示山奈酚及其苷類化合物是百蕊草抗炎、抗氧化等藥理活性的主要活性物質。國內對百蕊草最早的化學成分研究報道，從中分離得到了全草中含量較高的黃酮苷百蕊草素Ⅰ，其結構中葡萄糖以C－4″位羥基和鼠李糖的C－1羥基縮合而連接［10］。本實驗分離得到的化合物4在百蕊草中含量最高，HH－COSY譜圖顯示，其結構中鼠李糖C－1H與葡萄糖C－1″H相關，異核多鍵相關譜（HMBC）顯示，C－1H與葡萄糖C－2″存在明顯相關，其他波譜數據與文獻報道一致，因此可以確證化合物4分子結構中，葡萄糖和鼠李糖以1→2的方式連接。基于此前文獻中未有明確數據支持葡萄糖和鼠李糖的連接方式［10］，且此后均未有百蕊草素Ⅰ的波譜數據文獻報道，因此，筆者初步推定，化合物4與百蕊草素Ⅰ應為同一化合物，而百蕊草素Ⅰ的結構應該加以修正為山奈酚－3－O－L－吡喃鼠李糖基（1→2）－β－D－吡喃葡萄糖苷。

作者：宣偉東；范正平；胡水根；徐德東 單位：解放軍411醫院藥學科