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摘要：以福鼎大白茶的新梢莖段為外植體，建立一套完整的離體再生體系。結果表明，最適的腋芽誘導培養基為MS+1.5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；最適的不定芽增殖培養基為MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA；最佳的生根培養基為1/2MS+0.2mg/LNAA，生根率達70%，平均生根數4條，平均根長5.4cm，移栽成活率達71.4%。

關鍵詞：組織培養；腋芽誘導；增殖；生根；移栽茶樹

組織培養始于20世紀60年代，英國劍橋大學以茶樹幼嫩莖段為離體材料研究離體咖啡堿的合成[1]。我國茶樹組織培養研究起步較晚，但近年來也取得了顯著進展。袁地順等[2]用福云6號和福鼎大毫茶2個茶樹品種的根尖和莖尖為外植體誘導愈傷組織，發現兩者都能誘導出愈傷組織，其中嫩莖的誘導效果較好。陳玉玲等[3]分別用茶樹葉片、莖段為外植體進行愈傷組織誘導，發現莖段愈傷組織的誘導效果優于葉片，最佳的誘導愈傷組織培養基為MS+0.4mg/L6-BA+2mg/L2,4-D。江昌俊等[4]用茶樹成熟胚為外植體進行組織培養，先誘導其產生愈傷組織，再誘導愈傷組織分化出芽，最后誘導芽長根，試驗得出6-BA、2,4-D誘導產生的愈傷組織質量較好，最高出愈率可達97%。彭正云等[5]以大田茶樹的根作為組織培養的外植體，誘導其先產生愈傷組織，再分化出發狀根。李家華等[6]以云南地區大葉種茶樹帶腋芽新梢誘導腋芽萌發，結果發現誘導腋芽和愈傷組織的最佳培養基分別是：MS+0.5mg/L6-BA+4mg/L2,4-D和MS+10mg/L6-BA+0.5mg/LNAA。福鼎大白茶是我國目前推廣面積最大、綜合性狀優良的茶樹品種，也是最通用的茶樹遺傳資源[7]，但目前尚未見該品種完整再生體系的系統研究。試驗以福鼎大白茶幼嫩莖段為材料，主要研究了不同激素組合對腋芽的誘導等，找出適合腋芽誘導、增殖和生根的最佳培養基，以便獲得完整的再生植株，為珍稀茶樹種質資源的離體保存及茶葉科研提供基礎和高純度無菌材料。

一、材料與方法

1.材料與試劑以春、秋季生長帶飽滿腋芽的福鼎大白茶莖段為材料。主要試劑：95%無水乙醇、氯化汞等。儀器設備：電磁爐、自動高壓蒸汽滅菌鍋G154DS（致微廈門儀器有限責任公司）、純水器、超凈工作臺（蘇凈安泰）、接種器具消毒器（上海稼豐園藝用品有限公司）。2.試驗方法（1）材料預處理將所采集的用于腋芽誘導的材料剪去葉片和上、下端較嫩和較老的部分，留中間帶2～3個腋芽長度的莖段，將材料置于燒杯中，先用洗衣粉水浸泡3～5min，清洗掉表面塵土污垢（必要時用軟毛刷輕輕刷材料的表面），倒掉洗衣粉水，在燒杯上面蒙上紗布，自來水下沖滴1.0～1.5h，再用蒸餾水沖洗1遍，在燒杯外噴灑酒精，后置于超凈工作臺內（超凈工作臺事先進行紫外燈滅菌25min左右），備用。（2）腋芽誘導消毒處理后的材料切成0.5cm長帶1個腋芽的莖段，接種于含有不同濃度激素（6-BA、NAA）的培養基上，試驗采用L9（34）正交設計，每個處理接種10個外植體，重復3次，20d后調查并記錄萌芽率和生長狀況。萌芽率∕%=（萌芽外植體個數∕接種外植體總個數）×100（3）不定芽增殖以初代培養外植體萌發的小芽為材料，留1～2片葉子切下，進行繼代培養。主要探討不同激素6-BA（0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L）、NAA（0.1mg/L、0.5mg/L）的濃度組合對福鼎大白茶不定芽增殖的影響。（4）生根培養以增殖培養后高度大于2cm的茶苗為材料，在生根培養基上進行誘導生根，探索不同激素組合對生根的影響。試驗以1/2MS為基礎培養基，附加瓊脂6.5g/L、蔗糖30.0g/L、pH值5.6～5.8，并添加不同質量濃度的IBA（0.25mg/L、0.50mg/L、0.75mg/L、0.10mg/L）和NAA（0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L）來誘導生根。試驗設置9個處理，每處理重復3次，50d后調查生根率、平均發根數和平均根長。生根率∕%=（生根數∕接種數）×100（5）練苗移栽在生根培養基中培養一段時間后，將組培苗帶瓶子一起置于通風的室內練苗。練苗后將整株小苗從培養瓶中取出植入事先準備好的砂質黃土中。

二、結果與分析

1.不同激素組合對福鼎大白茶腋芽誘導的影響福鼎大白茶外植體接種后第二、第五、第七周的生長狀況如圖1。從圖1可見，外植體接種后第二周后腋芽開始萌發，接種后第五周腋芽展開2片真葉，接種后第七周腋芽展開3片真葉。2.不同激素組合對福鼎大白茶不定芽增殖的影響對不同的6-BA、NAA濃度配比對外植體不定芽增殖效果進行鄧肯多重比較，結果見表2。從表2中可見，不同的6-BA、NAA濃度配比對外植體不定芽的增殖有顯著性差異。Z3、Z5處理與其他各處理間增殖倍數達到極顯著性差異。Z3和Z5處理間也存在極顯著性差異，其中Z3處理的增殖倍數達到4.0，Z5處理的增殖倍數為1.9。其中，Z3處理外植體不定芽增殖培養4周后的生長狀況如圖2。總體來看，Z3和Z5處理的培養基較適合不定芽的增殖，且芽的生長狀況也較其他處理的好，也就是當培養基中6-BA質量濃度為1.0～1.5mg/L，NAA質量濃度為0.1mg/L時，較適合不定芽的增殖。3.不同激素組合對組培苗生根的影響將組織培養獲得的無根小苗接入生根培養基培養40d左右，在基部產生白色點狀突起，50d時肉眼可看到白色的根伸出。4.組培苗生根后的練苗移栽組培苗在生根培養基中培養一段時間后，待不定根長度＞3cm時，開始進行練苗。先將組培苗帶瓶子一起置于通風的室內練苗3～5d，之后，再將瓶蓋旋開練苗2d，最后將整株小苗從培養瓶中慢慢取出，用自來水輕輕地將附在根部的瓊脂培養基沖洗干凈，植入事先準備好的砂質黃土中，避免殘留的培養基引發雜菌的滋生，盡量避免傷到組培苗的根。移栽后將其放置在室內靠窗位置，以利于通風，同時應根據天氣情況適時澆水。

三、結論

植物組織培養中，細胞分裂素6-BA對不定芽分化、增殖有較顯著的作用。通常情況下，較高濃度的細胞分裂素與較低濃度的生長素配合使用，有利于芽的分化；相反，當二者的比值高時，則有利于愈傷組織的形成和根的分化[8]。本研究得出誘導芽的較適培養基為MS+1.5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA。在進行植物組織培養時，外植體已經選定，接下來的主要工作就是培養基以及植物生長調節劑的選擇。常用的培養基有MS、WPM、B5等[9]。茶樹屬于木本植物，對木本植物進行組織培養時，通常采用的是MS培養基或在其基礎上加以改良。如郭玉瓊等[10-11]、袁正仿等[12]以茶樹帶腋芽莖段為外植體進行茶樹離體培養時，先在MS培養基上誘導出腋芽，再在1/2MS培養基上誘導出根，最后獲得完整植株。試驗得出最佳的增殖培養基為MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA；生根培養基為1/2MS+0.2mg/LNAA，生根率可達77.78%，平均根數4條，平均根長為5.4cm。

參考文獻

[1]段運裳.茶樹組織培養研究進展[J].福建茶葉，2007（2）：7-9.

[2]袁地順，倪元棟，鄺平喜.茶細胞培養法生產茶氨酸的技術研究——茶愈傷組織的誘導體系建立[J].福建茶葉，2003（3）：27-28.

[3]陳玉玲，馬麗霞，紀紅冰，等.茶愈傷組織誘導的研究[J].河北師范大學學報（自然科學版），2007，31（3）：389-391.

[4]蔡海云，江昌俊，王朝霞，等.誘導茶樹成熟胚培育成幼苗的研究[J].生物學雜志，2007，24（2）：21-23.

[5]彭正云，劉德華，肖海軍，等.茶樹根愈傷組織及發狀根誘導的研究[J].湖南農業大學學報（自然科學版），2004，30（2）：138-141.

[6]李家華，周紅杰，李明珠，等.不同激素配方對大葉種茶樹新梢組織培養的效果[J].云南農業科技，2001（3）：27-28.

[7]姚永宏，周正科，侯渝嘉，等.福鼎大白茶愈傷組織的誘導條件優化[J].安徽農業科學，2009，37（24）：11423-11425.

[8]馬燕，韓瑞超，臧德奎，等.木本觀賞植物組織培養研究進展[J].安徽農業科學，2012，40（4）：1956-1958，2036.

[9]李浚明.植物組織培養教程[M].北京：中國農業出版社，1992：1.

[10]郭玉瓊，賴鐘雄，呂柳新，等.福建烏龍茶種質離體保存研究——成年莖段無菌系建立[J].福建農林大學學報（自然科學版），2008，37（6）：587-591.

[11]郭玉瓊，賴鐘雄，呂柳新，等.福建烏龍茶種質離體保存研究——無菌系繼代增殖與生根[J].中國農學通報，2008，24（10）：390-395.

[12]袁正仿，孔凡權，遠凌威，等.藪北茶樹的組織培養研究[J].信陽師范學院學報（自然科學版），2003，16（2）：215-217.

作者：吳婉婉1,2；孫威江1,3,4；陳志丹3,4,5 單位：1.福建農林大學園藝學院，2.陜西果業集團有限公司，3.福建農林大學安溪茶學院，4.福建省茶產業工程技術研究中心，5.福建省茶產業行業技術開發基地