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《兒科藥學雜志》2015年第七期

1材料和方法

1．1觀察指標分別在末次給藥后24h，對大鼠行腹腔注射戊巴比妥麻醉，剖胸于左心室取血，用全自動生化分析儀檢測血清中cTnⅠ和心肌酶CK、CK-MB的含量，雙抗夾心酶聯免疫法測定血清MMP-2含量。取心肌組織約0．2g用冰生理鹽水漂洗，除去血液，用濾紙吸去多余水分，稱重，加冰生理鹽水制成10%的心肌組織勻漿，離心取上清液，用全自動生化分析儀測定Ca2+的濃度。開胸取心臟，以4%多聚甲醛固定，常規石蠟包埋，制作石蠟切片并做HE染色，以備顯微鏡檢查。

1．2統計學方法應用SPSS17．0軟件，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2結果

2．1心力衰竭模型的建立模型建立過程中，心力衰竭模型大鼠(心力衰竭組、米力農組)均出現納差、倦怠、體質量不增，后期出現脫發、氣促、腹脹;解剖時發現有明顯腹腔積水和胸腔積水，肝臟增大、肝葉融合、肝臟顏色和質地明顯異常，心臟增大;心力衰竭組死亡2只，米力農組死亡1只，心力衰竭模型成活率85%(17/20)。對照組和心力衰竭組分別在末次腹腔注射后24h進行清醒狀態下行無創性血流動力學監測，觀察心率(HR)、射血前期(PEP)、左室舒張時間(LVET)、每分心輸出量(CO)等變化，兩組比較差異均有統計學意義(P均＜0．05)。心力衰竭組大鼠心功能下降，見表1。石蠟切片示:對照組心肌纖維排列整齊，無細胞水腫，細胞間隙正常;心力衰竭組心肌細胞水腫或空泡樣變，部分肌原纖維溶解，心肌纖維斷裂，心肌細胞間隙明顯增寬;米力農組心肌細胞輕度腫脹，心肌纖維基本完整，肌原纖維平行排列，少部分肌原纖維斷裂。見圖1。說明心力衰竭模型造模成功，且米力農對心力衰竭有治療作用。

2．2心肌酶學檢測結果結果見表2。心力衰竭組血清CK、CK-MB水平均升高，與對照組比較差異均有統計學意義(t分別為10．517、21．263，P均＜0．01)，提示心力衰竭組存在明顯心肌細胞損傷;米力農組與心力衰竭組比較血清CPK、CK-MB水平均降低(t分別為4．215、7．216，P均＜0．05)，提示米力農組心肌細胞損傷明顯減輕。

2．3心肌Ca2+、血清MMP-2、cTnI檢測結果結果見表3。心力衰竭組Ca2+、MMP-2、cTnⅠ水平升高，與對照組比較差異均有統計學意義(t分別為7．244、11．462、7．921，P均＜0．01);米力農組與心力衰竭組比較Ca2+、MMP-2、cTnⅠ水平均降低(t分別為3．336、5．216、3．721，P均＜0．05)。

3討論

阿霉素與心肌組織的親和力明顯高于其他組織，具有嚴重的心臟毒性，對心臟的慢性毒性作用主要是慢性充血性心力衰竭。國內外許多學者利用阿霉素建立鼠、兔的心力衰竭實驗動物模型，腹腔注射小劑量阿霉素可成功建立慢性心力衰竭大鼠模型［4］。本研究通過比較心力衰竭組和對照組的血流動力學、心肌病理切片、心肌酶等的變化，發現心力衰竭組血流動力學異常、心功能下降、心肌細胞顯微結構受損明顯、血清心肌酶大量外漏，因此心力衰竭造模成功。心力衰竭時存在心肌損傷、心肌結構和功能變化、心肌細胞內外鈣穩定失衡。本研究中米力農組血清CPK、CK-MB水平較心力衰竭組低，提示米力農組心肌細胞膜損傷較心力衰竭組減輕，米力農具有心肌細胞保護作用。馮永萌等［5］研究顯示，在充血性心力衰竭治療中，米力農劑量為50μg/kg時療效最佳;本研究亦選用50μg/kg的劑量，而在動物實驗中米力農的量效關系可作進一步研究。米力農保護心肌的機制與鈣調節有關。

心力衰竭組心肌勻漿中Ca2+含量顯著升高，分析其機制如下:心力衰竭時心肌肌漿網鈣泵活性降低，肌漿網鈣釋放通道(RyR2)在心臟興奮-收縮偶聯過程中起關鍵作用，肌漿網中的Ca2+通過RyR2釋放到胞漿啟動心肌收縮［6］。心力衰竭時RyR2功能的關鍵調節因子表達減少及與RyR2親和力降低，引起肌漿網舒張期Ca2+滲漏及Ca2+負荷減少，導致收縮期肌漿網Ca2+釋放減少，心室肌收縮功能障礙。當胞漿Ca2+濃度急速上升，高出正常8～10倍，給細胞造成嚴重損傷，使心肌大面積壞死、心功能不全［7］。本研究中心力衰竭組較對照組和米力農組的Ca2+濃度升高，心肌酶大量外漏，心肌細胞膜受損明顯。米力農組心肌均漿中Ca2+濃度較心力衰竭組降低，分析其機制如下:米力農系磷酸二酯酶(PDE)抑制劑，可促使cAMP水解減慢，使更多鈣通道開放，Ca2+進入細胞增多，產生正性變力效應［8］。

近年來基質金屬蛋白酶(MMPs)在心血管系統疾病領域的研究中備受矚目，越來越多的研究顯示MMPs可作為一種新的心臟分子標志物和治療靶點。MMP-2屬于基質金屬蛋白酶家族中的一種基質水解酶，MMP-2是一類Ca2+依賴性蛋白水解酶，其作用底物為基底膜和變性的間質膠原，破壞心肌的力學性質和心室的結構，影響心臟的功能，尤其可降解心肌細胞外基質(ECM)為心力衰竭的發展提供必要條件［9］。MMP-2被激活后主要可能通過以下三種途徑影響心肌功能:(1)水解細胞外基質的彈性蛋白和膠原纖維，破壞細胞基本結構骨架;(2)裂解肌球蛋白輕鏈-1(MLC-1)和肌鈣蛋白導致心肌收縮功能失常;(3)通過刺激糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)的活化，干擾β1-整聯蛋白調節的存活信號，誘導細胞發生凋亡。有學者研究結果顯示，收縮性心力衰竭患者基質金屬蛋白酶的活性隨著心力衰竭的加重而升高［10］。cTnⅠ是肌鈣蛋白亞基之一，與原肌球蛋白一起通過協調鈣離子對肌動蛋白ATP酶的活性來調節肌動蛋白和肌球蛋白間的相互作用，參與心肌收縮。cTnⅠ升高提示心肌細胞壞死，是心肌供氧失衡導致心肌損傷的結果［11］。本研究中，心力衰竭組MMP-2、cTnⅠ水平顯著高于對照組和米力農組，血清MMP-2、cTnⅠ水平與心肌Ca2+水平呈正相關，提示米力農能降低Ca2+濃度，降低MMP-2、cTnⅠ表達，從而保護心肌。綜上所述，心力衰竭時心肌Ca2+與血清MMP-2、cTnI含量升高且呈正相關，米力農能下調心力衰竭時心肌Ca2+與血清MMP-2、cTnⅠ含量，通過鈣調節機制保護心肌，減輕心肌損害。MMP-2、cTnⅠ可作為評估心力衰竭進展及預后的心臟分子標志物。

作者：邱紅 朱紅楓 張若松 單位：寧波市婦女兒童醫院 瀘州醫學院附屬醫院