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《現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)雜志》2014年第七期

1材料與方法

1.1試驗結果判定標準。

1.2最佳致死量的測定將5×109cfu/mL的O1、O2、O78菌懸液分別稀釋10倍、100倍。將12日齡雞分為3組，每組10只，以5×109、5×108和5×107cfu/mL3種劑量胸肌注射，0.5mL/只。觀察結果：5×109cfu/mL的菌懸液組12h死亡7只，24h又死亡3只；5×108cfu/mL的菌懸液組12h死亡4只，24h又死亡1只；5×107cfu/mL的菌懸液組24h死亡2只。因此確定最佳致死量為每只雞胸肌注射0.5mL菌液[6]。由于體外試驗得到初步的試驗結果，因此將驗證各藥物樣品體內試驗效果。

1.3動物體內臨床試驗篩選出抑菌試驗結果明顯的物質進行藥物安全試驗及體內臨床攻菌驗證。試驗動物采用韓偉雞場提供1日齡健康蛋公雞，自由采食至15日齡開始試驗。于胸肌注射由本實驗室保存的雞源大腸桿菌O1、O2、O78，500μL/羽，即5×108cfu/mL。灌喂藥品為黃芩、連翹、夏枯草、黃連、金銀花，每天1g/mL生藥原液0.5mL灌喂。感染試驗組統(tǒng)一飼養(yǎng)，空白對照組單獨飼養(yǎng)，但飼養(yǎng)條件一致。

2結果與分析

2.112種中藥對標準菌株的抑菌效果從初篩結果來看，不同的原料提取液表現(xiàn)很大的抑菌活性和抑菌譜，其中，黃連、夏枯草、黃芩、連翹、石榴皮具有較好的抑菌效果，為廣譜抑菌作用；綿馬貫眾、大黃、白術抑菌效果較差且抑菌譜窄；茯苓則無抑菌作用。所以，篩選得到黃芩、黃連、夏枯草、石榴皮、連翹材料作為進一步研究材料。

2.25種單味中藥對霉菌的抑菌效果根據(jù)初步試驗結果確定有5種中藥水提取物對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌有明顯抑菌效果。對青霉、黃曲霉、黑霉、毛霉的抑菌效果明顯的是黃芩和黃連，所以將其正交配伍后看其混合效果。

2.3臨床試驗結果從表4可以看到，感染對照組死亡率為95%，可以看出此次人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的模型接近期效果，攻毒后第2天有死亡雞只，可能是攻菌量過大，但經(jīng)過給藥治療后，發(fā)現(xiàn)黃芩、夏枯草、連翹和金銀花組攻毒保護率高于感染對照組5%～10%。

3討論

大腸桿菌一直是困擾畜禽業(yè)的一大難題，尤其是雞大腸桿菌病是大腸桿菌引起的一種常見病，可導致機體出現(xiàn)腹膜炎、滑膜炎、眼炎等多種疾病，對養(yǎng)禽業(yè)危害較大。大腸桿菌對豬的感染主要引起仔豬黃白痢、仔豬水腫，主要表現(xiàn)為腸炎、腸毒血癥。由于豬樣本過大，所以只做了雞的臨床攻菌試驗。

本研究利用傳統(tǒng)的、安全的植物源中草藥為原料，提取并濃縮后進行體內和體外的試驗研究，旨在開發(fā)出一系列新型抗生素替代物，以減少抗生素耐藥性及殘留對環(huán)境、生物造成的不良影響。本研究結果表明，所用的植物源物質具有一定的抗大腸桿菌及霉菌作用。從單味藥物水提取抑菌試驗可得：黃連、夏枯草、黃芩、連翹、石榴皮對雞源O1、O2、O78，豬源O139、O141及金黃色葡萄球菌具有較好的抑菌效果；且黃連和黃芩對青霉、黃曲霉、黑霉、毛霉具有明顯的抑菌效果，效果最好的是黃芩。臨床試驗中可以明顯看到金銀花組的攻菌保護率高于其他組。對比體內和體外試驗，可能由于動物體內環(huán)境復雜，且雞只個體差異等原因造成試驗結果不一致，所以其作用機理還需繼續(xù)探討和研究。本試驗主要采用植物源中草藥水提取來測定其抑菌效果，可以考慮抑菌與提高免疫力相復合成為研發(fā)新型抗菌藥物提供新的思路及墊定基礎，為畜牧獸醫(yī)疾病防治開啟新篇章。

由于藥物提取物中某些有效成分可能不溶于水或遇熱易破壞，同時提取物抑菌試驗前需經(jīng)過高壓滅菌，這些操作過程可能會導致某些藥物的抑菌能力及藥理活性下降，但是此方法所需設備簡單，操作方法簡便。還發(fā)現(xiàn)通過試驗雞人工感染大腸桿菌造模試驗可得不同日齡的雞對大腸桿菌的抵抗力有所不同，可能是因為自身抗體和抵抗力不同，對造模也有一定的影響。本試驗過程中，操作嚴格認真，定量準確，且藥物粘稠度等因素對試驗影響較小，所以試驗結果經(jīng)過多次驗證較為可靠，可作為進一步篩選和研究的參考資料，至于其具體的作用效果、提取物在體內的抗菌活性如何及配伍組方時各個藥物中成分的協(xié)同或拮抗作用如何，尚需進一步研究。

作者：曹艷子林洋高麗劉中原梅冬雪江國托單位：大連三儀動物藥品有限公司