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摘要：應用化學發光法（chemiluminescentimmunoassay，CLIA）檢測來自住院及門診220例樣本的hcv－cAg、HCV－Ab，并對其進行HCV－RNA定量分析，以了解HCV－cAg在HCV診斷中的應用價值。結果表明，第一組75例高危人群篩查樣本中HCV－Ab有15例陽性（20％），HCV－cAg6例陽性（8．0％），HCV－RNA7例陽性（9．3％）。第二組70例確診組樣本中HCV－Ab66例陽性（94．3％）、HCV－cAg62例陽性（88．6％）、HCV－RNA60例陽性（85．7％）。第三組75例健康人群的篩查樣本中HCV－Ab5例陽性（6．7％）、HCV－cAg2例陽性（2．7％）、HCV－RNA無陽性病例。HCV－Ab和HCV－cAg聯合檢測陽性率與HCV－RNA比較差異有統計學意義（P＜0．05）。在篩查HCV感染時，CLIA法檢測HCV－cAg的檢出時間早于HCV－Ab，HCV－cAg與HCV－Ab聯合檢測對術前患者HCV篩查更具有臨床價值。

關鍵詞：化學發光法；丙型肝炎病毒；HCV－cAg；HCV－Ab

HCV已呈全球性流行。據世界衛生組織統計，全球HCV的感染率約為3％，估計約1．7億人感染HCV，每年新發病例約3．5萬例［1］。在我國，病毒性肝炎的發病患者數始終位于所有傳染病的前列，而HCV的發病率在病毒性肝炎中呈現逐年上升趨勢。在目前還沒有疫苗的情況下，早期發現、早期治療至關重要。化學發光法（chemilumi－nescentimmunoassay，CLIA）檢測HCV－cAg可將窗口期縮短至35．8d，并且抗原量與RNA水平呈平行變化趨勢。CLIA檢測HCV－cAg采用全自動預處理步驟裂解病毒顆粒，并結合抗原抗體復合物，消除檢測HCV－cAg時HCV－Ab的干擾。HCV－cAg檢測能對HCV感染進行診斷并能監測感染者的病情變化。本文對本院住院輸血和手術前及門診的患者，以及市疾控中心患者共計220份樣本，進行HCV－cAg、HCV－Ab和HCV－RNA檢測，以了解HCV－cAg試劑在篩查HCV感染時的有效性。

1對象與方法

1．1研究對象

研究對象為2016年1月至2018年2月來我院就診、體檢的人員，將其分為3組：第一組HCV高危人群組（75例）為根據《中華人民共和國衛生行業標準———丙型病毒性肝炎篩查及管理》中對于高危篩查人群的要求進行收集，標本采集于市疾控中心就診檢測人員、市看守所聚眾吸毒人員、我院初診檢測HCV的患者、ALT＞80U／L伴膽紅素升高患者以及手術前（含輸血前）做例行檢查的患者。第二組HCV確診組（70例）為總院感染科HCV確證患者、總院腎臟內科HCV確證患者、某市疾控中心確證患者。符合下列任何一項即可診斷為臨床感染HCV病例：（1）符合血清HCV－Ab陽性和流行病學史；（2）符合血清HCV－Ab陽性和臨床表現；（3）符合血清HCV－Ab陽性和血清ALT、AST升高。納入標準：（1）年齡1～78歲，性別不限；（2）符合HCV的診斷標準。排除標準：肝硬化、重疊HBV感染、自身免疫性肝炎。第三組陰性對照組（75例）為同期體檢的健康人。對3組分別進行HCV－Ab、HCV－cAg、HCV－RNA檢測。

1．2方法

采用分離膠專用試管抽取患者靜脈血3mL，離心取血清，并放置在－70℃冰箱中保存。（1）HCV－cAg檢測：采用HCV－cAg微粒子CLIA檢測試劑盒進行HCV－cAg檢測，試劑盒由美國雅培公司提供。（2）HCV－Ab檢測：采用HCV－Ab微粒子CLIA檢測試劑盒進行HCV－Ab檢測，試劑由美國雅培公司提供。（3）HCV－RNA檢測：采用RT－PCR，測定范圍在103～107拷貝／mL，HCV－RNA陰性判定標準：小于103拷貝／mL。HCV－RNA檢測試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供。

1．3統計學處理

采用SPSS17．0進行數據處理分析，數據均以百分率（％）表示，用χ2檢驗比較差異，用kappa檢驗檢測結果的一致性。以P＜0．05為差異有統計學意義。

2結果

2．13組樣本HCV－Ab、HCV－cAg、HCV－RNA檢測結果

結果見表1。高危組中HCV－cAg與HCV－RNA陽性率結果相一致，分別為8．0％和9．3％。確診組中HCV－cAg與HCV－RNA的陽性率結果分別為88．6％和85．7％，其中HCV－Ab的陽性率達到94．3％。陰性對照組中，HCV－Ab檢測陽性率高于HCV－cAg，分別為6．7％和2．7％。總體上HCV－Ab的陽性檢出率高于HCV－cAg。

2．2高危組75例樣本HCV－Ab、HCV－cAg和HCV－RNA檢測結果

以HCV－RNA為金標準，將不同組合模式下的HCV－Ab＋HCV－cAg與HCV－RNA進行相關性分析。分析結果表明，HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（＋）組檢測的陽性率為66．7％，高于HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（－）組的20．0％，說明HCV－Ab和HCV－cAg聯合檢測有助于提高HCV的陽性篩查率，減少假陽性的產生（P＜0．05，表2）。

2．3確診組樣本HCV－Ab、HCV－cAg和HCV－RNA檢測結果

以HCV－RNA為標準，對確診組的70例樣本進行檢測，最后確診60例樣本為HCV－RNA陽性，10例為陰性。將不同組合模式下的HCV－Ab＋HCV－cAg與HCV－RNA進行相關性分析。分析結果顯示，HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（＋）組檢測結果陽性率為96．4％，分別高于HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（－）組合下的86．4％、HCV－Ab（－）＋HCV－cAg（＋）組合下的87．5％。以上結果表明HCV－Ab聯合HCV－cAg能提高檢測的陽性率（P＜0．05，表3）。

3討論

目前血清HCV－RNA檢測已成為診斷HCV感染的“金標準”，其定量分析法的特異度為（98～99）％，高敏感度的病毒核酸擴增技術甚至可以在HCV感染后6d內檢測到HCV－RNA。病毒核酸擴增技術準確敏感，但試劑成本較高、操作繁瑣、實驗室各項條件要求極高，影響了此方法在HCV常規篩查中的應用。檢測HCV感染最初推薦用HCV－Ab指標。在臨床上，對大部分肝臟疾病患者而言，篩查檢測的靈敏度和特異度均較高，HCV－Ab假陽性情況較為少見。然而，在HCV感染率低的人群中（如無償獻血者、現役或退役軍人、普通人群、衛生保健從業人員、性病門診就診者），假陽性率較高，陽性預測值較低［2］。HCV－Ab產生假陽性的主要原因有：高IgG血癥、RF干擾、超氧化物歧化酶干擾、用于試劑制備的HCV－cAg不純［2］。由于以上原因，不能僅僅依靠篩查實驗陽性反應結果來診斷一個人是否患HCV。因此，研究者需要應用具有更高特異度的補充實驗進行確證篩查。HCV－cAg作為一種新的HCV感染診斷指標，可用于獻血人員的篩查，且因其檢測時間段為感染后14～70d，窗口期比HCV－Ab短，可明顯增強輸血安全，亦能監測抗病毒治療療效。因此HCV－cAg的檢測對HCV的早期感染以及免疫功能紊亂和一些不產生HCV－Ab的患者很有價值［3］。HCV－cAg對HCV－Ab有一定的補充作用，但由于HCV－cAg的檢測靈敏度較低，在HCV的篩查中尚不能取代HCV－Ab的作用，只能作為補充，聯合檢測HCV－cAg與HCV－Ab可以提高HCV的篩查率［4］。有資料顯示，伴隨病毒血癥的發生，大多數HCV感染者血清中可檢測到HCV－cAg，其滴度和RNA水平明顯相關，在血清中的含量也可作為病程進展的指示，或抗體陽性慢性患者抗病毒治療的監控指標［5－6］。現行的常用篩檢方法有ELISA，它具有簡便、快速、靈敏度及特異度較好的特點，但對灰區結果判讀的可靠性通常較差［7］。CLIA的優勢主要體現在具有發光反應的高靈敏度［8］，具有免疫反應的特異度［9］。與ELISA法比較，該方法優點在于全自動化分析，省時以及可重復率高，定量最小值可達皮克級［10］。熒光定量PCR法檢測HCV－RNA可反映患者體內病毒復制情況，是HCV感染的確證實驗。它檢測的窗口期短，約為14d［11］，但受到實驗操作繁瑣、價格昂貴等諸多因素的影響，難以在常規實驗室或基層醫院應用推廣和普及［12］。本實驗采用微粒子CLIA，定量檢測人血清或血漿中HCV－cAg含量，能夠診斷HCV感染及監測患者病情，并且該操作實現全面自動化，整個過程在雅培Architecti2000進行，大大減少了對實驗者的操作要求，也提高了檢測的精密度。HCV－cAg在血液中比HCV－Ab出現早，HCV感染后，檢測HCV－Ab窗口期長達70余天，因此在感染早期，HCV－Ab陰性不能排除HCV感染；急、慢性活動性HCV感染的標志是HCV－cAg的存在，類似于HbsAg在活動性HBV感染中的診斷意義。通過對3組共220例樣本進行HCV診斷，結果表明HCV－Ab檢測的陽性率高于HCV－cAg和HCV－RNA，HCV－cAg陽性率與HCV－RNA陽性率結果一致，差異無統計學意義。以HCV－RNA檢測為金標準，通過對高危組和確診組進一步分析，HCV－Ab和HCV－cAg聯合檢測陽性率顯著高于單獨HCV－Ab檢測。由于CLIA法檢測HCV－cAg能縮短HCV病毒感染的窗口期，并且抗原量與RNA水平呈平行變化趨勢，因此通過CLIA法將HCV－Ab和HCV－cAg兩者有效聯合診斷能夠提高HCV檢出率和診斷可靠性。

參考文獻

［1］李婷婷，殷森，黎誠耀．丙型肝炎疫苗最新研究進展———挑戰與希望并存［J］．現代免疫學，2015，35（1）：81－87．

［2］陳新月，任姍．《丙型肝炎防治指南》（2015年更新版）解讀［J］．北京醫學，2015，37（12）：1186－1188．

［3］邵芳．HCV抗原、HCV抗體及HCV－RNA聯合檢測與ALT的相關性及其臨床意義［J］．中國中西醫結合消化雜志，2014，22（2）：81－82.

作者：孟繁君 王利新 王琦 單位：寧夏醫科大學總醫院心腦血管病醫院