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1方法與結(jié)果

1.1根、莖、葉（過(guò)中脈）橫切面的顯微鑒別纈草的根橫切面呈類圓形。表皮為1列類圓形或類長(zhǎng)方形細(xì)胞，細(xì)胞較大，多切向延長(zhǎng)，排列緊密，壁木栓化。下皮細(xì)胞1～2層，類橢圓形或不規(guī)則形，壁稍厚。皮層較寬，細(xì)胞內(nèi)含有眾多淀粉粒，油細(xì)胞散在。內(nèi)皮層細(xì)胞1層，細(xì)胞切向排列，凱氏點(diǎn)明顯。中柱鞘細(xì)胞1～2層，切向排列。維管束外韌型。韌皮部狹窄，形成層不明顯，木質(zhì)部排列成環(huán)狀，導(dǎo)管類圓形或多角形。中部有髓（圖2A）。纈草的莖橫切面呈類圓形，有波狀棱脊14～20個(gè)。表皮為1列較小類方形或長(zhǎng)方形細(xì)胞，外被角質(zhì)層和非腺毛。表皮下為數(shù)列厚角細(xì)胞，在棱脊內(nèi)側(cè)厚角組織較發(fā)達(dá)。內(nèi)皮層明顯。維管束外韌型；形成層成環(huán)；木質(zhì)部外側(cè)為2～6層木纖維細(xì)胞，多角形，排列成環(huán)，導(dǎo)管多角形或類圓形，數(shù)個(gè)徑向排列。髓部寬廣，中央破裂成空洞狀（圖2B）。纈草葉的上、下表皮均為1列切向延長(zhǎng)的細(xì)胞，類圓形；非腺毛2～5細(xì)胞，先端細(xì)胞較長(zhǎng)，表面有疣狀突起。柵欄細(xì)胞1列，不過(guò)中脈。海綿細(xì)胞類圓形，排列疏松。中脈上下表皮細(xì)胞下均有厚角組織，下部厚角組織較發(fā)達(dá)，中脈遠(yuǎn)軸面頂端凸起。中脈維管束新月形，外韌型。導(dǎo)管多角形或類圓形，數(shù)個(gè)徑向或成群排列。

1.2粉末的特征纈草粉末呈灰綠色。非腺毛較多，多斷碎，具明顯的疣狀突起。石細(xì)胞較多，類圓形、長(zhǎng)橢圓形，壁厚，孔溝明顯。花冠裂片頂端表皮細(xì)胞外壁突起呈乳頭狀。花粉粒類圓形，直徑48～65μm，表面有圓顆粒狀雕紋，具3孔溝。可見(jiàn)草酸鈣晶體，呈方塊狀或類簇晶狀。木纖維成束，直徑12～24μm。孔紋導(dǎo)管多見(jiàn)，直徑19～41μm；螺紋導(dǎo)管直徑10～32μm。淀粉粒極多，多為單粒，呈圓形或橢圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀，層紋不明顯（圖3）。

1.3薄層鑒別取纈草粉末3g，加甲醇60mL，超聲30min，過(guò)濾，揮去濾液中的甲醇，殘?jiān)屑蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版附錄VIB薄層色譜法，吸取供試品溶液各15μL，分別條狀點(diǎn)樣于同一硅膠GF254薄層板，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯－丙酮（50．51）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。各供試品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖4）。

1.4浸出物、總灰分、酸不溶性灰分、水分的測(cè)定照《中國(guó)藥典》2010年版附錄XA項(xiàng)下浸出物測(cè)定法中的冷浸法、附錄IXK項(xiàng)下總灰分測(cè)定法和附錄IXH項(xiàng)下水分測(cè)定法第二法，分別測(cè)定樣品中浸出物、總灰分、酸不溶性灰分和水分。計(jì)算10批樣品中的浸出物為2．36％～8．72％，平均5．08％；總灰分為852％～10．94％，平均9．66％；酸不溶性灰分為0．59％～2．42％，平均1．28％；水分為10．34％～11．57％，平均10．92％（表1）。

2討論

纈草的顯微鑒別要點(diǎn)為：根橫切面主要從表皮細(xì)胞、內(nèi)皮層細(xì)胞的特征，皮層的寬度、油細(xì)胞的分布等進(jìn)行鑒別；莖橫切面主要從棱脊的數(shù)目、維管束的形狀、皮層和髓部的寬度進(jìn)行鑒別；葉橫切面主要從非腺毛、中脈維管束的特征進(jìn)行鑒別；粉末主要從石細(xì)胞、花粉粒、草酸鈣晶體的形狀、大小進(jìn)行鑒別。

纈草三酯和纈草烯酸是纈草具鎮(zhèn)靜作用的主要有效成分，纈草三酯是纈草屬的特征性化合物。但實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：纈草根及根莖的薄層色譜在與上述對(duì)照品相對(duì)應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)清晰；而纈草全草的薄層色譜無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。經(jīng)HPLC驗(yàn)證，纈草全草中纈草三酯的含量極微，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，纈草烯酸的含量亦極微。鑒于此，文中建立的TLC法暫無(wú)對(duì)照品。曾分別考察了石油醚（30～60℃）－丙酮、三氯甲烷－甲醇、乙酸乙酯－甲醇、石油醚（60～90℃）－丙酮、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯－丙酮等展開劑系統(tǒng)，其中，石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯－丙酮（5051）系統(tǒng)下展開時(shí)，各特征斑點(diǎn)分離度良好，Rf值適中，因此確定為展開系統(tǒng)。分別使用乙醚和甲醇提取供試品，兩種溶劑提取的供試品的特征斑點(diǎn)差異小，因此，選用甲醇作為提取溶劑。對(duì)展開環(huán)境條件的耐用性進(jìn)行了考察，不同飽和時(shí)間下纈草的特征斑點(diǎn)均無(wú)拖尾，可不飽和直接點(diǎn)樣展開。對(duì)展開的溫度、濕度分別進(jìn)行了考察，最佳相對(duì)濕度為32％～65％，最佳展開溫度為5～25℃。

作者：鐘世紅 古銳 黃明貴 馬貞 曹赟 單位：成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 成都中醫(yī)藥大學(xué)