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【摘要】蜂蜜淀粉酶值檢測是控制蜂蜜產品質量和安全的重要指標之一。為促進高校與社會食品檢驗方法的銜接，激發學生的學習熱情，山東農業大學衛生檢驗教研組采用最新國標檢測方法取代陳舊方法應用于蜂蜜淀粉酶值實驗教學。在實施的過程中，通過增加碘溶液預熱管數保證淀粉酶酶促反應溫度的一致性，采用全自動酶標儀替代分光光度計提高學生實驗效率等改進措施，提高了實驗數據和結果的精確度和準確性，改善了實驗教學秩序，確保了國標檢測方法法在蜂蜜淀粉酶值實驗教學中的應用。

關鍵詞：實驗教學；國標法；蜂蜜淀粉酶值；改進

蜂蜜的營養價值很高，口感獨特，深受消費者歡迎[1-2]。在蜂蜜所含有的一系列營養物質中，生物酶是其主要的生物活性物質，其中淀粉酶的含量最高，能夠促進人體對食物的消化和營養物質的吸收[3-4]。但目前市場上蜂蜜產品的質量參差不齊，真假難辨[5-8]。而蜂蜜淀粉酶活性的檢測是控制商品化蜂蜜產品質量和安全的重要指標之一[9-10]。蜂蜜淀粉酶值的檢測方法有試管比色法和分光光度計法，其中分光光度計法是最新的國家標準方法[11-12]。緊跟時代的步伐，與時俱進是高校實驗教學改革的靈魂，促進實驗教學內容的革新對于學生掌握新概念、新知識、新技能，開闊視野和思路具有極為重要的意義。為和社會銜接，學校對蜂蜜淀粉酶值檢測的實驗教學進行了一系列的改革，其中“國標進課堂”取代陳舊實驗方法就是其中一項重要舉措。在改革的過程中發現實驗教學不同于簡單的實驗驗證，需要幾十人同時進行，涉及到儀器、耗材、場地的共享使用，簡單地照搬照抄國標方法并不能直接用于實驗教學。為使國標法更好地適應實驗教學，山東農業大學動物科技學院衛生檢驗教研組對蜂蜜淀粉酶值檢測的部分內容進行了改革和創新。

1實驗方案的設計

1.1材料

1.1.1蜂蜜

來源于山東泰安某養蜂場的新鮮百花蜜。

1.1.2試劑及配制

碘化鉀、碘、乙酸鈉(CH3COONa•3H2O)、可溶性淀粉、氯化鈉、冰乙酸等均為國產分析純。按國標GB/T18932.16-2003要求[12]分別配制0.5mol•L-1氯化鈉溶液、乙酸鹽緩沖液、2%淀粉溶液、碘溶液等。

1.1.3儀器

超純水系統，Pall，USA；微量移液器，Eppendorf，Germany；電子恒溫水浴鍋，常州國立，中國；Elx808多功能全自動酶標儀，Biotek，USA；可拆分酶標板，江蘇光明器材。

1.2方法

1.2.1樣品準備

將采購的蜂蜜樣品充分攪拌均勻，勿加熱。每組分裝100g于燒杯中作為待檢樣品，標記后供淀粉酶值測定用，常溫保存，勿冷藏。

1.2.2標定淀粉溶液

三支試管分別裝有10mL水和5mL淀粉溶液和10mL碘溶液，放入40℃水浴中預熱15min。然后將5mL淀粉溶液全部加入到10mL水的試管中混合均勻作為待檢的樣品混合液，從中吸取1mL混合液加入到10mL的碘溶液試管中，再加入一定體積的水稀釋（先加入少量，需多次加入確定準確的水的體積）。取200µL加入酶標板的檢測孔中，以水作為空白參照，用多功能全自動酶標儀在660nm波長測定溶液的吸光度（原國標中是用分光光度計進行檢測，需取2mL加入比色皿中待檢），若吸光度值較高則繼續加水進行檢測，直到產生0.760±0.02的吸光度值。記錄多次加入的全部水的體積數，并以此作為檢測樣品溶液時的稀釋系數。淀粉溶液新配制后應重新進行標定。1.2.3樣品檢測1.2.3.1全自動酶標儀的檢測條件波長為660nm；陰性對照為水。1.2.3.2樣品處理稱取精確至0.01g的蜂蜜樣品5g，加入水15mL和乙酸鹽緩沖液2.5mL，玻璃棒攪拌混勻后全部轉移到提前加入氯化鈉溶液1.5mL的25mL容量瓶中，加水定容，作為樣品溶液待檢。1.2.3.3樣品檢測5mL淀粉溶液1支、10mL樣品溶液1支和10mL碘溶液15支（原國標方法中碘溶液是1支），均提前放入40℃水浴中預熱15min。將5mL淀粉溶液全部轉入樣品溶液，然后充分混合開始計時。5min時取樣品混合溶液1mL加入到盛有10mL碘溶液的試管中，以標定淀粉溶液時確定的水的體積數稀釋并混勻充分。取200µL加入酶標板的檢測孔中，以水作為空白參照，用多功能全自動酶標儀于660nm波長處測定待檢樣品吸光度（原國標方法中使用分光光度計進行檢測，需取2mL待檢液加入比色皿中，且比色皿要不斷清洗，并漂洗）。如吸光度值大于特定吸光度值0.235，則重新吸取樣品混合液加入到另1支碘溶液中進行測定，每隔5min檢測1次，直到吸光度值小于0.235為止。1.2.4數據處理以吸光度值為縱坐標，檢測時間為橫坐標，在對數坐標紙上作圖，連接各點成直線。然后在直線上查出樣品吸光度與0.235交叉點所對應的檢測時間，結果按以下公式計算:X=300/t其中X為所測樣品溶液的淀粉酶值，單位為毫升每克小時（mL•g-1•h-1)；t為對應的檢測時間，單位為分(min)。

2實驗教學的實施

2.1學生分組

在實驗開始前，指導教師提前1w進行實驗布置，學生自由組合成2-3人的小組，小組內成員合理分工，并指定1人負責實驗用品的領用、歸還以及數據的統計、報送等。由班長負責統計分組數及小組成員名單，并于實驗開始前上報給指導教師，由實驗教師審核成員組合及分工是否合理。實驗樣品、耗材、器皿等均按小組編號分發。

2.2實驗準備

指導教師提前布置實驗內容，制定實驗目標和要求。實驗教師進行實驗器材分組，并準備好備份。然后學生以實驗小組為單位，課前進行合理分工，查閱相關資料，熟悉實驗器材，制定出具體的實驗方案。指導教師針對每個小組的實驗方案提出指導性意見和建議。

2.3實驗過程的改進

國標方法“蜂蜜中淀粉酶值的測定方法分光光度法GB/T18932.16-2003”在用于本科實驗教學時，由于參與實驗人數多、實驗場地擁擠、儀器數量有限等原因，在實驗教學過程中出現了諸多問題，不能有效保障實驗秩序的穩定和實驗結果的有效性。為有利于實驗教學的順利進行，衛生檢驗教研組對實驗方法及儀器檢測等進行了部分改進。首先為減少誤差，使實驗中所用試劑準確保持在40℃，樣品檢測中除了提前將樣品、淀粉溶液和碘溶液放在水浴中保溫外，需準備15支10mL的碘溶液而不是1支。原因是淀粉和樣品混合液共有15mL，每次取1mL可以取15次，而碘溶液10mL只能使用1次，即使大瓶的碘溶液放在水浴中能保持在40℃，但分裝用的試管沒有預熱仍會造成誤差，從而影響實驗結果。預熱15支碘溶液比原國標方法中僅預熱1支碘溶液能更有效地保證實驗結果精確度、科學性和有效性。其次檢測儀器使用多功能酶標儀替代分光光度計。在樣品檢測過程中需要5min測定1次，若OD值變化較快，則需要1min測定1次，時間間隔比較短，不同小組之間不可能共用1臺分光光度計。以1個班10-15個小組計至少需要10-15臺分光光度計，而目前實驗室的條件最多只能提供4臺，遠遠不能滿足需要。再加上更換、清洗比色皿以及校零的時間，誤差在所難免。而多功能酶標儀配合使用可拆分一次性酶標條，一個小組1條8個孔，自己做好標記，每次加樣1孔，一臺酶標儀可同時檢測12個小組，且不用清洗，自動校零，大大提高了時間的精確性和結果的準確性。

2.4實驗考核

實驗課程的考核以小組為單位進行，兼顧小組中個人的表現。分別從文獻查閱是否充分、實驗方案設計是否合理、實驗操作是否規范、實驗結果判斷是否合理以及實驗衛生整潔程度等方面做出評價。

3實驗教學效果

3.1實驗秩序

該次實驗教學經過對參與實驗的學生提前分組，以小組為單位進行實驗方案的設計和準備，然后獨立完成實驗操作以及數據的記錄和整理計算，發現除個別組準備不充分，儀器操作不夠熟練外，其余組都進行了充分的資料收集和器材準備，實驗進行得有條不紊，井然有序。完全不同于之前實驗課中無準備、無目的性地照著板書上實驗步驟呆板地稱量加樣、少數學生動手多數學生在實驗室中轉圈、依賴老師操作儀器等狀況。準備不充分的小組在看到別的小組實驗進展順利時明顯感受到了壓力，這將對以后的實驗準備工作起到一定的督促作用。

3.2改進效果

從蜂場采集的新鮮蜂蜜淀粉酶值一般在8-10之間，測定過程至少需要持續30-45min，5min測定一次則需要測定10-15次，國標中樣品混合液可以待檢15次，而碘溶液只有1支，測定過程中需要不斷重裝碘溶液，碘溶液的溫度得不到保證，且學生需要不斷在實驗室中來回走動，造成秩序混亂。溫度是影響酶促反應的決定性因素，反應溫度的差異將會直接導致酶促反應的快慢不一致，致使最終計算出的淀粉酶值出現誤差。改進后的國標法直接準備好15支碘溶液，需要測定時隨取隨用，既避免了實驗過程中學生頻繁找試管、洗試管、重裝碘溶液的麻煩，保證了實驗溫度的一致性和實驗結果的精確度，又使實驗進行得井然有序，保障了實驗秩序。分光光度計一般只有4個比色皿槽，其中1個要加入空白對照，僅余下3個槽位可以放置待檢樣品，放置好后需要手動拉桿檢測，檢測樣品少，且需要時間比較長。另外比色皿需要及時清洗、再用待檢液漂洗，在本實驗中樣品需要5min檢測一次，就會顯得手忙腳亂，導致實驗結果出現不可避免的誤差。而全自動酶標儀具有連續波長，波長選擇范圍比較大，能夠滿足不同波長的需求。可檢測比色皿、24孔板、96孔板等。實驗中使用可拆分96孔酶標板，可同時檢測96個樣品，即使一個小組1條，也可以同時檢測12個小組的樣品。且全自動酶標儀可以自動進樣，然后進行掃描檢測，只要提前在電腦上設計好板的布局，將酶標板放在檢測臺上，點擊“檢測”就可以了，檢出結果會自動扣除空白或者陰性對照，一目了然。既避免了實驗過程中清洗比色皿更換樣品的環節，又縮短了學生等待檢測的時間，減少了實驗誤差，有效保障了實驗數據和結果的準確性。

3.3考核結果

鑒于本科實驗教學中學生的獨立性稍差，無法單獨完成整個實驗設計及具體操作，因此采用小組內團隊合作的形式進行實驗。在考核時要兼顧到小組的整體成果和小組內個人的貢獻和表現。在對每個小組的實驗過程進行考核時發現大部分小組對數據的記錄、整理、計算等非常清晰，課后能夠對實驗過程和實驗結果進行完整的總結匯報和正確的結果分析，甚至有的小組還配備了圖片說明實驗過程中隨時間變化淀粉酶分解淀粉后剩余淀粉和碘溶液反應產生顏色的變化過程。表明學生在實驗過程中對出現的結果及數據變化進行了充分的思考和分析，這次實驗教學的改進充分調動了學生的實踐動手熱情，也促進了高校對創新型人才的培養。

4結語

“民以食為天，食以安為先”，國標進課堂進行蜂蜜的衛生檢驗，縮短了高校與社會之間的距離，激發了學生的學習熱情。而改進后的國標法應用于實驗教學保障了實驗結果的準確性，減少了誤差。同時高值精密儀器的使用也拓寬了學生的視野[13]，調動了學習的積極性，提高了實踐動手能力，收到了超出預期的實驗教學效果。

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[13]曾明榮,趙鵬,韓媛媛.加大實驗開放力度，提高學生創新能力[J].實驗科學與技術,2016,14(1):202-205.

作者：楊萍萍；袁朋；徐瑞雪，李建亮，崔言順 單位：山東農業大學動物科技學院