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作者：尹剛賈堂宏劉志功孫炳衛(wèi)龔維明劉淑恒郭淑亞張慶國(guó)

【摘要】目的：研究堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)促進(jìn)隨意型真皮下血管網(wǎng)皮瓣（SVNF）成活的作用。方法：分別在4只純白色家豬兩側(cè)背部各形成6個(gè)SVNF，長(zhǎng)16cm，寬4cm，將24個(gè)皮瓣隨機(jī)分為bFGF組和對(duì)照組，于術(shù)后6d測(cè)量各組皮瓣成活率及皮瓣新生血管密度。結(jié)果：術(shù)后6d，bFGF組與對(duì)照組SVNF成活率分別為（81.2±1.7）%和（66.2±1.8）%(P＜0.05)，皮瓣近、中、遠(yuǎn)段皮瓣血管密度分別為（16.7±6.0）、(29.7±5.5)、（14.9±6.0）/mm2和（16.6±4.0）、（21.4±5.2）、（3.5±5.1）/mm2(P＜0.05)。大體觀察和組織學(xué)觀察bFGF組均優(yōu)于對(duì)照組。結(jié)論：皮瓣下局部注射bFGF后，通過(guò)促進(jìn)SVNF遠(yuǎn)端基底部和邊緣部的血運(yùn)，可以提高SVNF成活率，縮短皮瓣的斷蒂時(shí)間，擴(kuò)大皮瓣長(zhǎng)寬比例。

【關(guān)鍵詞】真皮・外科皮瓣・成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2

BFGFimprovestheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap

【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheapplicationvalveofbFGFtoimprovetheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap.Methods:Fourwhitehealthypigswereused,eachpighad6SVNFonback,16cm×4cm，totally24flapsweredividedrandomlyinto2groups:ThebFGFgroupsandthecontrolgroups.Onpostoperativeday6,weobservedtheappearanceoftheflaps.Thesurvivalareaofeachflapwasmeasuredandtheflapwasharvestedforhistologicalanalysisandthedensityofangiogenesiswasalsoexamined.Results:Onpostoperativeday6,thesurvivalratesofthebFGFgroupandthecontrolgroupwere(81.2±1.7)%and(66.2±1.8)%respectively,theangiogenesisdensityofthemiddleandthedistalsegmentinthebFGFgroupwas(16.7±6.0)/mm2,(29.7±5.5)/mm2,(14.9±6.0)/mm2respectively,while(16.6±4.0)/mm2,(21.4±5.2)/mm2,(3.5±5.1)/mm2respectivelyinthecontrolgroup.ThebFGFgroupwassuperiortothecontrolgroupintheappearanceandhistologicalanalysisoftheflaps.Conclusion:TheresultssuggestthattheinjectionofbFGFlocallycanpromotethesurvivalratebyacceleratingthebloodcirculationoftheSVNF’bottomandedge,shortenthedivisiontimeofSVNFandbroadentheratiooflengthandwidth.

【KEYWORDS】Dermis・Surgicalflap・Fibroblastgrowthfactor2

臨床上經(jīng)常見皮膚撕脫傷、熱壓傷、嚴(yán)重?zé)齻麆?chuàng)面，早期良好的組織覆蓋是外科修復(fù)的重要研究?jī)?nèi)容，對(duì)恢復(fù)患肢功能，保留良好的外觀至關(guān)重要。隨意型真皮下血管網(wǎng)皮瓣（subdermalvascularnetworkflap,SVNF）是近20年來(lái)新出現(xiàn)的一種皮瓣，此型皮瓣充分發(fā)揮了真皮下血管網(wǎng)的作用，廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷外科、燒傷整形美容外科，但其供血范圍有一定限度，皮瓣長(zhǎng)寬比例一般不超過(guò)2.5∶1，故而限制其推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）皮瓣下局部注射給藥，探討bFGF能否提高SVNF的成活率，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物純白色3個(gè)月齡健康家豬4只（由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），體重（20±2.5）kg，雌雄不限。

1.2動(dòng)物模型的建立在每只家豬兩側(cè)背部形成6個(gè)SVNF，切斷從腹乳線處發(fā)出的軸型血管后形成隨意型皮瓣，長(zhǎng)16cm，寬4cm。皮瓣長(zhǎng)軸與豬的縱軸垂直。

1.3藥物及給藥方法bFGF購(gòu)自東大生物工程公司。SVNF形成后，即刻在皮瓣距蒂部12cm、14cm處及皮瓣最遠(yuǎn)端分別選擇6個(gè)注射點(diǎn)，給予皮下注射。處理如下：bFGF組：每一位點(diǎn)真皮下層注射含有bFGF的肝素化生理鹽水0.1ml，共0.6ml。對(duì)照組：每一位點(diǎn)皮下注射0.1ml肝素化生理鹽水，共0.6ml。藥物注射后，將皮瓣原位縫合，皮瓣遠(yuǎn)段1/3打包加壓包扎。家豬麻醉清醒后，單籠飼養(yǎng)，每日肌肉注射青霉素400萬(wàn)U預(yù)防感染。

1.4檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1大體觀察術(shù)后6d將家豬再次全麻后拆除打包線，肉眼觀察各組皮瓣

顏色，質(zhì)地及豬毛生長(zhǎng)情況。

1.4.2皮瓣成活率術(shù)后6d，用透明硫酸紙標(biāo)記出皮瓣壞死區(qū)域和成活區(qū)域。應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析儀計(jì)算出各組皮瓣成活面積占總面積之比，即皮瓣成活率。

1.4.3組織學(xué)觀察分別在皮瓣近、中、遠(yuǎn)1/3處切取1cm×1cm×1cm的組織塊，包括皮下脂肪組織和少量肌肉組織，10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，包埋，HE染色，光鏡下觀察組織學(xué)變化。

1.4.4血管密度檢測(cè)采用SP免疫組化染色顯示真皮下層新生的血管，然后利用10倍光鏡，隨機(jī)計(jì)算出每個(gè)組織切片中選出的5個(gè)視野中血管斷面的個(gè)數(shù)。利用計(jì)算機(jī)圖像自動(dòng)處理系統(tǒng)計(jì)算出相同視野下的組織面積，即為1mm2組織中血管斷面的密度。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理求出每組皮瓣成活率及血管密度的x±s。實(shí)驗(yàn)測(cè)得的數(shù)據(jù)組間采用單因素方差分析比較，進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1大體觀察兩組皮瓣近端呈粉白色，豬毛生長(zhǎng)良好，質(zhì)地柔軟，用刀切割出血活躍。兩組皮瓣中段為淡紫紅色。bFGF組皮瓣遠(yuǎn)段呈粉白色，局部淡紅色，有豬毛生長(zhǎng)，對(duì)照組皮瓣遠(yuǎn)段部分發(fā)黑、結(jié)痂，無(wú)豬毛生長(zhǎng)，質(zhì)地硬，切割時(shí)不流血。

2.2皮瓣成活率術(shù)后6dSVNF成活率bFGF組為（81.2±1.7）%，對(duì)照組為（66.2±1.8）%(P＜0.05)。

2.3組織學(xué)觀察術(shù)后6d對(duì)照組遠(yuǎn)段皮膚表皮層變偏平，真皮層細(xì)胞排列紊亂，膠原組織有斷裂現(xiàn)象，真皮層和真皮下層新生的血管生長(zhǎng)不活躍，有大量的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。bFGF組皮瓣遠(yuǎn)段皮膚各層結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變，復(fù)層上皮細(xì)胞排列整齊，真皮層膠原組織無(wú)腫脹及斷裂，真皮層和真皮下層新生小血管生長(zhǎng)活躍，無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.4血管密度檢測(cè)術(shù)后6d，兩組皮瓣遠(yuǎn)段新生血管密度見表1和圖1-3。表1術(shù)后6d兩組皮瓣血管密度比較（略）

3討論

創(chuàng)面愈合過(guò)程包括炎癥反應(yīng)、血管再生、細(xì)胞移行、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的重建，創(chuàng)面愈合受多種肽類生長(zhǎng)因子的調(diào)控，這些因子通過(guò)自分泌和旁分泌的機(jī)制影響著創(chuàng)面愈合的進(jìn)程，其中堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）在創(chuàng)面愈合中起重要作用。bFGF不僅能促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等與組織修復(fù)有關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)增殖反應(yīng)外，而且還能刺激成纖維細(xì)胞分泌膠原蛋白等合成新的細(xì)胞外基質(zhì)［1］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，bFGF能夠通過(guò)促進(jìn)皮瓣遠(yuǎn)段血運(yùn)重建，改善真皮下血管網(wǎng)皮瓣血供，促進(jìn)皮瓣成活，縮短斷蒂時(shí)間，繼而提高SVNF的成活率。bFGF廣泛存在于體內(nèi)所有細(xì)胞中，其中腦垂體含量最高，其他組織僅為其含量1/10~1/50，細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是bFGF的貯存庫(kù)，細(xì)胞合成的bFGF釋放入ECM,與其中的硫酸肝素結(jié)合是非活性狀態(tài)，活性形式bFGF的釋放必須依賴于肝素酶的降解，一般以為，這些嚴(yán)格的調(diào)控機(jī)制對(duì)于bFGF隨時(shí)調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的增殖和分泌對(duì)創(chuàng)傷組織的修復(fù)極為有利。bFGF有廣泛的生物活性，不僅能促進(jìn)靶細(xì)胞的有絲分裂，還有非有絲分裂的激素樣效應(yīng)，包括改變細(xì)胞趨化性，誘導(dǎo)或者抑制細(xì)胞合成，分泌一些特殊蛋白質(zhì)和調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化。誘導(dǎo)毛細(xì)血管的生長(zhǎng)是bFGF的一個(gè)非常重要的功能，幾乎在所有富含血管的組織中均含有bFGF。真皮下血管網(wǎng)的血供包括［2］：（1）蒂部血供。血供通過(guò)蒂部較小的肌皮穿支的分支進(jìn)入真皮下血管網(wǎng)，到達(dá)皮瓣遠(yuǎn)端。（2）創(chuàng)基創(chuàng)緣血供。真皮下血管網(wǎng)充分暴露，與受區(qū)緊密接觸，有利于血管網(wǎng)與受區(qū)早期建立交通，隨著血管網(wǎng)逐步調(diào)整，原來(lái)的干血管被選擇性的部分保留下來(lái)，起著重要供血渠道的作用。bFGF能促進(jìn)皮瓣早期斷蒂［3］，因?yàn)閎FGF不僅有利于新生血管從受區(qū)基底部向皮瓣快速生長(zhǎng)，還能加強(qiáng)基底與皮瓣間血管斷端的直接吻合。在皮瓣轉(zhuǎn)移后，新生血管尚未長(zhǎng)入皮瓣組織，直接血管吻合可改善皮瓣血供，特別有利于處于存活與壞死交界區(qū)內(nèi)的細(xì)胞向好的方向發(fā)展，對(duì)于皮瓣存活率的提高是有較大益處的。bFGF以肝素結(jié)合物的形式存在［4］，并以此形式與受體結(jié)合而產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。肝素可提高其生物學(xué)活性，并可保護(hù)其不被各種理化因素滅活，外源性肝素有利于bFGF結(jié)合到靶細(xì)胞表面受體上，促進(jìn)bFGF生理作用的發(fā)揮，故臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)加入肝素化生理鹽水以增加其活性。

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