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1鱖魚傳染性脾腎壞死病

毒病鱖魚是我國重要名特優魚類之一，隨著人們對名貴水產品需求不斷增加，鱖魚養殖業不斷發展，產值逐年上升。1994年在廣東省暴發并逐漸傳播開來鱖魚病毒病，成為限制鱖魚養殖業發展的制約因素，至今仍深度影響鱖魚產業。1997年吳淑勤等通過電鏡發現了病鱖脾臟中的病毒顆粒，病毒直徑約150nm，并證明該病毒能引起鱖魚大規模死亡。1998年何建國等通過回歸感染進一步證明了該病毒的病原性，并通過組織學研究發現鱖魚脾臟和腎臟是其感染的主要器官，且該病毒可導致鱖魚脾臟和腎臟壞死，因而命名為傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）。

2ISKNV的形態結構

1998年何建國等人根據該病毒為具囊膜20面體，細胞質內寄生，直徑大小為150nm等特點，認為ISKNV屬虹彩病毒科。核心含有一條線狀雙鏈DNA，基因組由111362個堿基組成，而且胞嘧啶（G）5’端特征是高度甲基化，鳥嘌呤（C）和胞嘧啶（G）含量占54.78%。包括125個預測開放讀碼框ORF，與其他種類的虹彩病毒有高度同源性的ORF有35個，這些ORF主要與蛋白功能有關。

3ISKNV的檢測方法

病毒病的診斷有病原分離、血清學、免疫學和分子技術四個不同的階段。常規的病毒分離，是指對動物進行攻毒感染實驗、及利用敏感細胞進行病毒培養和電鏡觀察，是一種對病毒進行分離培養、純化和對其致病能力進行研究的手段。常規血清學方法特異性雖高，但存在不敏感的缺點。近年來，隨著免疫印跡酶連免疫吸附、免疫熒光和膠體金等免疫方法的出現和發展，病毒的免疫學診斷已兼具特異性和靈敏性。若以ISKNV流行病學調查或者抗原、抗體的檢測作為目標，可采用免疫學診斷為主要方法，分子生物學檢測為輔。若以檢測ISKNV存在及其種類、病毒含量、隱性感染等為目的，則主要采用分子生物學方法。為使結果準確，必須結合多種檢測方法。

4ISKNV的流行病學

由ISKNV分子流行病學結果可知，ISKNV宿主非常廣泛。海水魚類中已有6目、19科、52種魚類被檢出感染該病毒，平均感染率為14.6%，斜帶石斑、青斑、大黃魚、美國紅魚等種類都易流行ISKNV病害。淡水魚類中已有鱖魚、草魚、烏鱧、尼羅羅非魚、大口黑鱸等被檢出感染該病毒。養殖水體溫度在25℃～34℃時，感染ISKNV的鱖魚發病死亡率達90%以上，發病至死亡平均時間為17d，28℃～30℃則是健康養殖鱖魚發病的最危溫度，這與廣東省夏天氣溫高導致鱖魚ISKNV病發病率高的現象相吻合。在20℃時，健康養殖鱖魚則不發生ISKNV病害。

5鱖魚ISKNV病的組織病理學

根據近年來在廣東省內分離檢測到ISKNV感染的病料觀察得知，患病鱖魚典型癥狀：脾、腎腫大，呈紫黑色；肝呈白色，有出血點，花肝癥狀；鰓白色，貧血癥狀；腸內充滿透明流晶樣液體。組織切片顯示，被ISKNV感染的鱖魚脾臟、頭腎細胞病變非常嚴重，可觀察到明顯的細胞腫大特征，且細胞核萎縮。電鏡下觀察顯示，脾臟、頭腎細胞中的細胞質內有大量病毒粒子。

6ISKNV病的防治方法

鱖魚養殖戶慣用聚維酮碘、二氧化氯等化學藥物或氟苯尼考等抗生素進行預防和治療ISKNV病，但效果不佳。也有報道使用中草藥、黃芪多糖、維生素、免疫多糖等預防和治療ISKNV病，機理為激活鱖魚免疫系統，增加鱖魚細胞免疫和體液免疫，從而預防ISKNV病害發生，且具備副作用小、藥殘低等優點。ISKNV致病的誘發或協同因子包括水體理化指標、養殖模式、飼養管理、氣候突變、病原感染、近親繁殖種質退化等。預防鱖魚ISKNV病最安全有效的方法是免疫預防，根據鱖魚流行病學特點，在ISKNV病爆發季前，可注射滅活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗來減少病害的發生和流行。發現病鱖需及時隔離及早治療，應合理用藥，以減少因抗生素濫用而導致的藥殘現象。

7鱖魚ISKNV病疫苗

隨著國內外對水產品質量安全的日益重視，ISKNV病引發的藥殘問題已成為鱖魚產業發展的瓶頸。為踐行生態友好持續發展型漁業，研發與ISKNV病原對應的高效鱖魚虹彩病毒疫苗勢在必行。1997年以來中國水產科學研究院珠江水產研究所首先采用滅活組織漿疫苗對鱖魚病毒病進行防治，實驗室結果顯示組織漿疫苗可對鱖魚產生較好的免疫效果，新鮮制備疫苗的保護率在80%以上，該所連續6年對廣東南海等地生產場的種苗、親魚進行免疫注射，免疫種苗存活率提高5.6%～40%，免疫親魚子代存活率比未免疫親魚子代存活率普遍高5%～15%，證明免疫是預防鱖魚ISKNV病的有效途徑。但是鱖魚組織漿疫苗批次間有效抗原含量差異大，效果不穩定，疫苗制備困難、推廣較緩。2004年以來珠江水產研究所聯合中山大學等科研機構對鱖虹彩病毒病重組亞單位疫苗開展研究，2004～2016年篩選了多個抗原基因，制備的重組亞單位疫苗、DNA疫苗實驗室保護率分別在60%、50%以上，由于尚未找到高保護性抗原，致使重組亞單位疫苗、DNA疫苗的免疫保護率仍然低于全病毒滅活疫苗。因此病毒滅活疫苗是依然是目前最常用疫苗。滅活疫苗技術的關鍵點是構建病毒的體外繁殖系統，實現魚類病毒在細胞系上大規模繁殖，輔助實驗室制備或工廠化生產疫苗。2008年中山大學建立了第一個對ISKNV高度敏感的鱖魚仔魚細胞系（MFF-1），并使用該細胞系生產出ISKNV滅活疫苗。2015珠江水產研究所建立了對ISKNV敏感的鱖腦組織細胞系，分離了多株鱖魚ISKNV，為鱖ISKNV滅活疫苗的創新性研究奠定了基礎。

作者：何賢臣；劉丹陽；尹海富 單位：1.150001黑龍江省水生動物資源增殖保護站；2.164300黑龍江省黑河邊境漁政管理站；3.150030東北農業大學水產養殖系