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酶聯免疫實驗對食品分析的重要性范文

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酶聯免疫實驗對食品分析的重要性

1實施過程及具體實驗步驟

根據筆者的教學經驗,該綜合性實驗約需教學時數,10~12學時,具體操作過程如下。

(1)帶教老師講述ELISA的原理,應用及注意事項。

(2)通過觀看酶聯免疫吸附實驗操作視頻,了解整個實驗流程及操作要點。

(3)將學生分組,每組3人,開展ELISA綜合實驗。

(4)實驗操作結束,帶教老師與學生共同討論分析實驗結果。

具體的實驗操作步驟如下:以測定牛奶和魚肉中的氯霉素為例,采用酶標抗原的直接競爭法,介紹本實驗具體實驗步驟。

(1)包板:將抗體用包被液稀釋一定的倍數,加入96孔酶標板中,100μL/孔。37℃孵育,過夜。

(2)封板:洗板兩次,加入封閉液120μL/孔,37℃孵育,3小時。

(3)樣品前處理:封板時,分別對樣品牛奶和雞肉進行前處理。

(4)烘干:將封閉好的板倒掉封閉液,37℃烘干。

(5)加樣:加標準品/樣本50μL/孔,然后加入酶標記物50μL/孔,再振蕩混勻,用封板膜蓋板,37℃條件下反應30min。

(6)顯色:洗板4~5次,每次浸泡30s,拍干。每孔加入底物緩沖液50μL,再加底物液50μL,輕輕振蕩混勻,37℃或室溫環境避光顯色10min。

(7)測定:每孔加入終止液50μL,輕輕振蕩勻,設定酶標儀于450nm處測定吸光度值。

(8)結果判定:以標準品百分吸光率為縱坐標,以氯霉素標準品濃度(ng/mL)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯霉素實際濃度。

2結語

ELISA實驗是一個綜合性實驗,涉及到有機化學,食品化學,生物化學以及免疫學等方面的相關知識。因此,學生通過本實驗,可以取得以下效果:(1)鞏固理論識,加強對相關知識的理解,并對該技術在食品安全檢測領域的重要性有一定的認識。(2)結合視頻及具體實驗操作,了解整個實驗的操作流程。(3)學生之間分組進行實驗,加強相互協作及團隊意識。在食品科學與工程、食品營養、食品質量與安全、生物工程等專業的食品分析實驗課中,我們為部分同學開設了ELISA綜合實驗,檢測過的對象包括氯霉素、鹽酸克倫特羅、三聚氰胺、和孔雀石綠等。本實驗內容豐富充實,實驗現象生動有趣,深受學生的歡迎。

作者:沈玉棟李瑞婷單位:華南農業大學食品學院

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