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摘要：目的研究人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細胞耐藥的逆轉作用及機制。方法本研究所選取的親本細胞為鼻咽癌細胞CNE-2，同時建立耐順鉑人鼻咽癌耐藥細胞株系CNE-2；采用ATT檢測法對親本細胞和耐藥CNE-2在經過人參多糖作用前后順鉑的抑制濃度，同時計算出耐藥指數；利用流式細胞儀對人參多糖對耐藥CNE-2的增殖抑制率進行檢測；使用RT-PCR法對經過人參多糖作用前后CNE-3中的β-cateninmRNA表達進行檢測；使用顯微鏡對經過人參多糖作用前后的β-catenin蛋白表達進行觀察。結果經人參多糖作用后的耐藥CNE-2對順鉑的抑制濃度與耐藥指數降低更為顯著（P<0.05）；人參多糖對耐藥CNE-2具有明顯的增殖抑制作用；經人參多糖作用后的β-cateninmRNA表達量得到明顯降低（P<0.05）；經人參多糖處理后，蛋白表達區逐漸轉移至細胞膜。結論人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細胞耐藥有著顯著逆轉作用，而因β-catenin信號轉導途徑誘導CNE-2凋亡是該藥物的主要機制。

關鍵詞：人參多糖；耐順鉑；鼻咽癌；細胞耐藥；逆轉作用

引言

鼻咽癌具有較高的致死率與發病率，該疾病對化學治療手段與放射治療手段較為敏感，在近年來，隨著耐藥細胞株的出現，使鼻咽癌患者在患病后5年內的存活率僅達到60%左右。根據相關調查資料顯示[1]，人參中所包含的人參多糖成分在進入人體后，能夠起到明顯的逆轉腫瘤耐藥以及抗腫瘤的效果，但其中的機制尚不明確。由此，為了進一步觀察人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細胞耐藥的逆轉作用及機制，本研究將鼻咽癌細胞CNE-2作為親本細胞展開研究分析，并將詳細結果報道如下。

1資料與方法

1.1使用材料。人參多糖注射液（產自山西普德藥業公司，規格為3g/L）、順鉑（產自上海源葉生物）、人鼻咽癌耐藥細胞株系CNE-2（由天津市腫瘤系研究所提供）、二甲基亞砜、二甲基四氮唑藍、CCK8試劑（來源于國內卡邁舒生物科技）。

1.2實驗方法1.2.1將培養箱內溫度調整為37℃，且濕度適宜，將耐藥細胞株誘放置其中培養。使用順鉑含量為3.3μmol/L的培養基對培養細胞進行1d的培養，并測定培養過程中的IC50。使用順鉑含量為3.3μmol/L的培養基對培養細胞進行沖擊培養，時長1d。后更換為順鉑IC50逐漸提高的培養基，直至培養細胞能在順鉑含量為3.3μmol/L的環境中穩定成長，且能夠實現長達3次或3次以上的連續傳代，經最后測定順鉑IC50為7.5μmol/L，并將其命名為耐藥CNE-2。1.2.2使用MTT法測定藥物敏感型和人參多糖干預。取對應的耐藥CNE-2以及親本細胞，將細胞密度調整為1×105個/mL，并在其中加入孔板96個，設置處理孔進行細胞培養，培養時長為48h，在每隔處理孔中加入10mg/ml的15μLMTT，持續培養4h后將培養基吸出，并在每個孔中加入200μLDMSO，輕微震蕩使結晶溶解。在酶標儀上對各個孔的吸光度數值進行檢測，后使用MTT分析法展開數據分析，同時計算出耐藥指數與IC50，以此得出最終的藥物敏感性。耐藥指數=/耐藥細胞IC50/親本細胞IC50。1.2.3使用CCK8法觀察人參多糖對耐藥CNE-2的增值影響。使用對應的耐藥CNE-2制作密度為5×104個/L細胞血液，并把細胞懸液接種在孔板上，于1d之后，在孔板上加入不同濃度的人參多糖培養液，在設置空白對照的同時，進行比色試驗。細胞增殖抑制率=（1-AGPS/A空白對照）×100%。1.2.4觀察人參多糖對耐藥CNE-2中β-cateninmRNA的表達影響。使用RT-PCR法，并取對數長生期，選擇經人參多糖培養液處理48h后的耐藥CNE-2，提取其中的RNA，對β-cateninmRNA的表達進行檢測觀察。1.2.5觀察人參多糖對耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區域的影響。將耐藥CNE-2接種與6個孔板之中，并放置在溫度為37℃的CO2培養箱中過夜，當細胞株鐵壁后，將0.4g/L的人參多糖培養液加入其中，處理時長為48h。使用顯微鏡對檢測結果進行觀察[2]。

1.3統計法分析。本研究所獲的所有數據均通過統計學軟件SPSS20.0統計處理，計數資料用“[n（%）]”表示，用“χ2”檢驗；計量資料用“（±s）”表示，用“t”檢驗，若P<0.05，提示差異有統計學意義。

2結果

2.1觀察在經過人參多糖作用前后耐藥CNE-2的耐藥指數與對順鉑的IC50。在經過人參多糖作用前的耐藥CNE-2與親本細胞對順鉑的IC50為（0.16±0.12）μmol/L、（7.51±2.82）μmol/L，耐藥CNE-2對順鉑的耐藥指數為26.7；在經過濃度分別為0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L的人參多糖作用48h后，耐藥CNE-2與親本細胞對順鉑的IC50為（3.22±1.13）μmol/L、（1.15±0.52）μmol/L、（0.65±0.39）μmol/L，耐藥指數為9.6、6.4、3.3。由此可見，相較于作用前，經人參多糖作用后的耐藥CNE-2的耐藥指數與對順鉑的IC50明顯降低（P<0.05）。

2.2觀察人參多糖對耐藥CNE-2增殖產生的影響。人參多糖對耐藥CNE-2增殖有著明顯的抑制效果（P<0.05），見表1。

2.3觀察在經過人參多糖作用后耐藥CNE-2中β-cateninmRNA的表達。在經過不同濃度的人參多糖作用48h之后，耐藥CNE-2中的β-cateninmRNA的表達量為2.4觀察經人參多糖作用后耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區域變化。經人參多糖作用前，耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區域主要在細胞質以及細胞核；經人參多糖作用后，耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區域逐漸轉移至細胞膜。

3討論

根據相關研究資料顯示[3]，人參多糖能夠有效提高人體免疫力，同時還具有良好的抗腫瘤與治療腫瘤疾病的效果，且能減少一定的不良反應，具有較高的使用價值。本研究結果顯示，經人參多糖作用后的耐藥CNE-2對順鉑的抑制濃度與耐藥指數降低更為顯著（P<0.05）；人參多糖對耐藥CNE-2具有明顯的增殖抑制作用；經人參多糖作用后的β-cateninmRNA表達量得到明顯降低（P<0.05）；經人參多糖處理后，蛋白表達區逐漸轉移至細胞膜。證實了使用人參多糖治療鼻咽癌，對該疾病患者來說具有重大的現實意義。綜上所述，人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細胞耐藥有著顯著逆轉作用，而因β-catenin信號轉導途徑誘導CNE-2凋亡是該藥物的主要機制。

參考文獻

[1]孫冰潔.人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細胞耐藥的逆轉作用及其機制[J].山東醫藥,2017,57(20):31-33.

[2]吳曉民,趙丹,朱艷萍,等.人參多糖的藥理作用與臨床研究進展[J].人參研究,2016,28(05):40-46.

[3]趙燕.人參皂苷Rg3對鼻咽癌Th1/Th2細胞因子表達情況及臨床治療效果分析[J].陜西中醫,2018,39(01):101-103.

作者：徐林娣 單位：江陰市中醫院