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《成都大學學報》2016年第2期

摘要:

建立以高效液相色譜法(HPLC)測定帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體的方法．以硅烷鍵合硅膠為填充劑;以正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相，流速，1.0mL/min，柱溫，30℃，檢測波長，215nm．實驗表明，帕瑞昔布鈉與位置異構(gòu)體分離度為1.86，理論塔板數(shù)分別為8041和8929;在0.04μg/mL～0.64μg/mL范圍內(nèi)，帕瑞昔布鈉異構(gòu)體線性關(guān)系良好(A=70.647c－1.401，r=0.9998);重復性良好(RSD為0.12%);平均回收率為94.47%(RSD為3.03%，n=9)．采用HPLC法測定帕瑞昔布鈉中的位置異構(gòu)體，操作簡單，準確度高且靈敏度好，可為控制帕瑞昔布鈉質(zhì)量提供依據(jù)．

關(guān)鍵詞:

高效液相色譜法;雜質(zhì)檢測;帕瑞昔布鈉;位置異構(gòu)體

0引言

帕瑞昔布鈉的化學名為N-［［4-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑基)苯基］磺酰基］丙酰胺鈉，分子式為C19H17N2O4SNa，分子量為392.41，其化學結(jié)構(gòu)式如圖1所示．帕瑞昔布鈉是一種人工合成藥物［1］，其對骨科、外科、婦科等臨床各科患者術(shù)后鎮(zhèn)痛有良好的效果，副作用較?。?－6］．帕瑞昔布鈉中位置異構(gòu)體是帕瑞昔布鈉的構(gòu)造異構(gòu)(位置異構(gòu))體，是本品合成第一步磺化過程中在苯環(huán)上產(chǎn)生的間位異構(gòu)，主要是苯環(huán)間位結(jié)構(gòu)化合物N-［3-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑基)苯基］磺酰胺，其化學結(jié)構(gòu)式如圖2所示．由于功能團位置的不同，其生物活性也可能不同，本研究參考《中國藥典》2010年版二部附錄［7］，利用HPLC分析能將帕瑞昔布鈉與其位置異構(gòu)體進行有效分離的檢測條件，并初步確定測定帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體的方法，通過對其他批次樣品中的位置異構(gòu)體含量的測定，進而對該方法進行方法學驗證．本方法操作簡單，準確度高且靈敏度好，可為控制帕瑞昔布鈉質(zhì)量提供依據(jù)．

1儀器與試藥

1.1儀器

實驗所用儀器包括:奧泰SSI-1500型高效液相色譜儀(美國，AIITECH);UV-759CRT型紫外—可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);BP-210D型電子分析天平(德國，Sartorius);KH-5200E型超聲波清洗器(頻率40kHz，超聲時長15min，上海滬粵明科學儀器有限公司)．

1.2試藥

帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體對照品，成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司自制(批號，ZI130701);帕瑞昔布鈉(研究用批號，130801，含量測定批號，130903、130904、130905、131101、131102、131103);正己烷、異丙醇(Merk)，色譜純．

2方法與結(jié)果

2．1色譜條件

實驗的色譜條件為:色譜柱，硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相，正己烷—異丙醇(85∶15);流速，1.0mL/min;柱溫，30℃;檢測波長，215nm;進樣量，10μL．

2．2溶液的制備

2．2．1對照品溶液

取帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體對照品適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成每1mL約含帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體0.8μg的溶液，制得對照品溶液．

2．2．2供試品溶液

取帕瑞昔布鈉適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋制成每1mL約含帕瑞昔布鈉0.4mg的溶液，制得供試品溶液．

2．3系統(tǒng)適應性實驗與專屬性實驗

取帕瑞昔布鈉和帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體對照品各適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成每1mL約含帕瑞昔布鈉0.4mg和帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體0.8μg的溶液．在“2.1”項條件下測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3．色譜圖顯示，帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體、帕瑞昔布鈉依次出峰，分離度為1.86，理論塔板數(shù)分別為8929和8041，并且空白溶劑無干擾，均符合檢測要求．

2．4線性實驗

精密量取“2.2.1”項下的帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體對照品溶液0.5、2、4、6、8mL，分別置于10mL量瓶中，用正己烷—異丙醇(50∶50)定溶，制成系列對照品溶液，搖勻，分別進樣10μL，以“2.1”項下條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖．以峰面積A為縱坐標，相應濃度c為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為，A=70.647c－1.401，r=0.9998．表明其在0.04～0.64μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好．

2．5檢測限與定量

限取帕瑞昔布鈉異構(gòu)體對照品適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成一定濃度的溶液．在“2.1”項條件下進樣，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖．若該色譜圖主峰峰高與空白基線相對應位置的基線噪音比值較大，則逐級稀釋供試品溶液，直至比值為10∶1時，注入儀器的量為定量限;當比值為3∶1時，注入儀器的量為檢測限．根據(jù)信噪比為3∶1和10∶1時的供試品濃度和進樣體積，計算出帕瑞昔布鈉異構(gòu)體的檢測限和定量限分別為，0.23ng和0.52ng．

2．6重復性實驗

取帕瑞昔布鈉及帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體對照品適量，共6份，分別加正己烷—異丙醇(50∶50)制成約每毫升含帕瑞昔布鈉0.4mg、帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體0.8μg的供試品溶液，在“2.1”項條件下，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖．計算帕瑞昔布鈉峰面積的RSD為1.20%，帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體峰面積的RSD為0.12%．結(jié)果表明，本方法進樣重復性良好．

2.7溶液穩(wěn)定性實驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液10μL在“2.1”項條件下，于0、2、4、6、8、24、48h時分別進樣，記錄色譜圖．結(jié)果對照品溶液峰面積的RSD為3.29%，表明對照品溶液在室溫下48h內(nèi)穩(wěn)定．精密量取“2.6”項下的1份供試品溶液10μL在“2.1”項條件下，于0、2、4、6、8、24、48h時分別進樣，記錄色譜圖．結(jié)果供試品溶液中帕瑞昔布鈉峰面積的RSD為4.04%，帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體峰面積的RSD為0.68%，表明供試品溶液在室溫下48h內(nèi)穩(wěn)定．

2．8加樣回收率實驗

精密量取“2.2.2”項供試品溶液9份，分別加入不同量對照品儲備溶液(4.0μg/mL)，并用正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋成濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各3份．在“2.1”項條件下進樣，記錄色譜圖．按外標法計算得平均回收率為94.47%、RSD為3.03%(n=9)．

2．9耐用性實驗

分別調(diào)整流動相比例［(85+5)%正己烷］、流速［(1.0－0.4)mL/min］、波長［(215±5)nm］、柱溫［(30±5)℃］和色譜柱(Phenomenexsilica4.6×250mm，5μm)，考察本法的耐用性．結(jié)果顯示，色譜條件在上述范圍內(nèi)的變化不影響測定結(jié)果．

2．10樣品中位置異構(gòu)體含量的測定

取6批樣品，按“2.2.2”項配制成供試品溶液，分別取10μL，在“2.1”項條件下進樣，記錄色譜圖，檢測樣品中帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體，結(jié)果均未檢出，結(jié)果見圖3～圖5．

3討論

3．1波長的選擇

取帕瑞昔布鈉與帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體適量，分別用乙腈—水(40∶60)配置成每1mL含各物質(zhì)約0.02mg的溶液，按照紫外—可見分光光度法［9］在200nm～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明，帕瑞昔布鈉與帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體具有不同的紫外特征峰，最大吸收波長略有差異，但均具有較大的紫外末端吸收，參考相關(guān)文獻，最終選擇波長215nm作為帕瑞昔布鈉中位置異構(gòu)體含量測定的檢測波長．

3．2流動相的選擇

由于帕瑞昔布鈉位置異構(gòu)體是帕瑞昔布鈉合成第一步磺化過程中在苯環(huán)上產(chǎn)生的間位異構(gòu)，兩者極性比較相近，采用有關(guān)物質(zhì)檢測條件下的反相液相色譜法不能有效地分離，因此采用正相液相色譜法對本品的異構(gòu)體進行分離和檢查．以正己烷—異丙醇為流動相體系進行流動相的比例篩選．試驗考察了正己烷—異丙醇(50∶50)、正己烷—異丙醇(75∶25)、正己烷—異丙醇(85∶15)等流動相對帕瑞昔布鈉及位置異構(gòu)體的分離效果．結(jié)果顯示，以正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相時，帕瑞昔布鈉及位置異構(gòu)體的峰分離完全，且出峰時間適宜，專屬性強．

3．3樣品溶解溶劑的選擇

實驗比較了以乙腈—水(40∶60)、乙腈—水(47∶53)、正己烷—異丙醇(50∶50)、正己烷—異丙醇(75∶25)、正己烷—異丙醇(85∶15)作為樣品溶解溶劑．結(jié)果顯示，正己烷—異丙醇(50∶50)對帕瑞昔布鈉及位置異構(gòu)體的溶解性較好．

4結(jié)論

本研究采用高效液相色譜法，以硅烷鍵合硅膠為填充劑和正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相，對帕瑞昔布鈉中的位置異構(gòu)體進行了含量檢測．結(jié)果說明，本方法可有效的測定帕瑞昔布鈉的間位和對位異構(gòu)體，為帕瑞昔布鈉的實際生產(chǎn)提供了理論依據(jù)．

參考文獻:

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［6］周敦，董紅華，金寧，等．選擇性COX-2抑制劑超前鎮(zhèn)痛對骨科圍手術(shù)期鎮(zhèn)痛的療效觀察［J］．實用骨科雜志，2011，17(11):1044－1046．

［7］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

作者:聶忠莉 郭兆元 曾吉 王曉玲 葉丁 張勇 郭瑞 單位:成都大學藥學與生物工程學院 成都大學四川抗生素工業(yè)研究所 成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司