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摘要:目的評價某兒童型蛋白質(zhì)粉增強免疫力的作用。方法將受試樣品按0.825、1.650、3.300g/(kg•BW)3個劑量給予小鼠連續(xù)灌胃30d后進行免疫試驗。試驗項目為細胞免疫功能試驗、體液免疫功能試驗、單核－巨噬細胞吞噬功能試驗和NK細胞活性測定方法。結(jié)果1.650、3.300g/(kg•BW)兩個劑量組ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞增殖能力較溶劑對照組明顯增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，3.300g/(kg•BW)劑量組單核－巨噬細胞碳廓清能力及小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能均明顯高于溶劑對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，1.650、3.300g/(kg•BW)兩個劑量組小鼠NK細胞活性(數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換值)明顯高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，1.650g/(kg•BW)劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)明顯高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論某兒童型蛋白質(zhì)粉具有增強免疫力作用。

關(guān)鍵詞:兒童型蛋白質(zhì)粉;免疫功能;小鼠

多數(shù)蛋白質(zhì)粉是以大豆分離蛋白質(zhì)為主材料，加上乳清蛋白等輔助蛋白一起加工而成的一類蛋白食品。該類食品不僅服用方便，而且脂肪含量低［1］。大豆分離蛋白的氨基酸構(gòu)成較為合理，含有大量人體必需氨基酸，為優(yōu)質(zhì)植物性蛋白質(zhì)。大豆分離蛋白還含有多種對人體生理機能有特殊作用的功能性成分，如大豆異黃酮、皂甙、膳食纖維等，能夠預(yù)防諸多“現(xiàn)代文明病”的發(fā)生［2－5］。乳清蛋白由于含有免疫球蛋白，能夠刺激人體免疫系統(tǒng)。乳鐵蛋白可以促進鐵的吸收，是一種具有多種生物活性功能的鐵結(jié)合蛋白，還具有抗氧化、增強免疫調(diào)節(jié)等功能［6－8］。不同于動物蛋白，大豆分離蛋白和乳清蛋白對動物不會產(chǎn)生高血脂、高膽固醇等副作用。本兒童型蛋白質(zhì)粉將大豆分離蛋白質(zhì)、乳清蛋白和乳鐵蛋白組成混料，由于多種蛋白必須氨基酸互補作用，可以使其功能互補，增強其營養(yǎng)價值。目前國內(nèi)未見兒童型蛋白質(zhì)粉增強免疫功能的相關(guān)報道。本次研究按照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的相關(guān)要求，探討了某兒童型蛋白質(zhì)粉增強免疫力的作用。

1材料與方法

1.1受試物某兒童型蛋白質(zhì)粉，淡黃色粉末，由國內(nèi)某公司提供。廠家推薦攝入量為10g/(人•d)，換算成單位體重推薦攝入量為0.33g/(kg•BW)(兒童體重按照30kg計算)。用蒸餾水配制成試驗所需濃度。

1.2實驗動物健康成年SPF級昆明小鼠200只，雌性，體重范圍18.5～22.0g。購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(湘)2016－0002。

1.3動物飼養(yǎng)環(huán)境屏障環(huán)境，溫度為21～23℃，濕度為42%～66%。實驗動物使用許可證號為SYXK(湘)2017－0001。輻照滅菌清潔級飼料，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供。飼料生產(chǎn)許可證號為SCXK(京)2014－0010。

1.4主要儀器與試劑超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、離心機、酶標儀、723分光光度計、分析天平、SA緩沖液(美國Gibco公司)、Hank's液(美國Gibco公司)、RPMI1640培養(yǎng)基(美國Gibco公司)、小牛血清(HYCLONE公司)、刀豆蛋白A(美國Sigma公司)、噻唑藍(美國Sigma公司)。

1.5劑量選擇將實驗動物按體重隨機分為5個大組，用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ標識，每組40只動物。其中Ⅰ組動物開展NK細胞活性測定實驗和ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗，Ⅱ組動物完成臟/體比值計算、血清溶血素測定和抗體生成細胞檢測，Ⅲ組動物開展遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗，Ⅳ組動物開展碳廓清實驗，Ⅴ組動物開展小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗。每一大組動物按體重隨機分為4組，每組10只動物，分別為溶劑對照組以及低、中、高3個劑量組。實驗設(shè)0.825、1.650、3.300g/(kg•BW)3個劑量組(分別相對于人體推薦量的2.5倍、5倍和10倍)。各劑量組用蒸餾水配制，按0.2ml/(10g•BW)每天灌胃一次，溶劑對照組給予等體積的蒸餾水。連續(xù)灌胃30d后對實驗動物的各項免疫指標進行測定。

1.6免疫指標的測定臟器/體重比值計算，ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(MTT法)，遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗(DTH法)，抗體生成細胞檢測實驗(Jerne改良玻片法)，血清溶血素測定實驗(血凝法)，小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗，小鼠碳廓清實驗，以及NK細胞活性測定實驗，均按照規(guī)范方法進行［9］。

1.7實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS15.0軟件包對實驗數(shù)據(jù)(或轉(zhuǎn)換值)進行方差分析，檢驗水準選擇α=0.05。

2結(jié)果

2.1蛋白質(zhì)粉對小鼠免疫器官胸腺和脾臟的臟器/體重比值影響低、中、高3個劑量組小鼠胸腺/體重和脾臟/體重值與溶劑對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)(見表1)。2.2蛋白質(zhì)粉對小鼠細胞免疫功能的影響中、高劑量組ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力明顯高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低、中、高3個劑量組小鼠足跖腫脹度與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)(見表2)。

2.3蛋白質(zhì)粉對小鼠體液免疫功能的影響中劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)明顯增多，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低、中、高3個劑量組小鼠抗體積數(shù)與溶劑對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)(見表3)。

2.4蛋白質(zhì)粉對小鼠單核－巨噬細胞吞噬功能的影響高劑量組單核－巨噬細胞碳廓清能力增強，并且巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均升高，與溶劑對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)(見表4)。

2.5蛋白質(zhì)粉對小鼠NK細胞活性的影響中、高劑量組小鼠NK細胞活性(數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換值)明顯升高，與溶劑對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)(見表5)。

3討論

免疫是維持機體不患感染性疾病的穩(wěn)態(tài)狀態(tài)，是一系列復(fù)雜的生理學(xué)機制，使個體識別、區(qū)分外來物，并進行中和或清除。機體的免疫系統(tǒng)可分為非特異性免疫系統(tǒng)和特異性免疫系統(tǒng)。非特異性免疫又稱為固有免疫，一般包括機體的組織屏障、固有免疫細胞和固有免疫分子3類，具有可遺傳、作用范圍廣等特點。特異性免疫又稱為獲得性免疫，包括細胞免疫和體液免疫，具有特異性和免疫記憶等特點。免疫功能的評價包括固有性免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答的評價，固有性免疫應(yīng)答評價包括單核－巨噬細胞吞噬功能測定和NK細胞活性的測定，獲得性免疫應(yīng)答的評價包括細胞免疫功能測定和體液免疫功能測定。單核－巨噬細胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的標志之一，當細菌、異物等抗原物質(zhì)進入機體后可迅速被其吞噬和清除，因而巨噬細胞廓清指數(shù)的多少可以反映其吞噬功能的強弱［10－13］。本次實驗結(jié)果顯示，兒童型蛋白質(zhì)粉可以明顯增強小鼠單核－巨噬細胞吞噬功能和NK細胞活性，對機體非特異性免疫有較強的促進作用。獲得性免疫是機體對外界物質(zhì)刺激后形成的一種特異性反應(yīng)，比如胸腺是T細胞的主要生成場所，通過細胞免疫反應(yīng)來調(diào)節(jié)機體免疫平衡［14－20］。本次實驗結(jié)果還顯示兒童型蛋白質(zhì)粉可以明顯增強細胞免疫功能，對機體特異性免疫有較強的促進作用。本次實驗結(jié)果表明:該兒童型蛋白質(zhì)粉可以增強小鼠的細胞免疫功能、單核－巨噬細胞的吞噬功能以及NK細胞活性，所以具有增強免疫力的功能。本次體液免疫功能評價中僅發(fā)現(xiàn)中劑量組溶血空斑數(shù)增加，低、高劑量組無影響，并且各劑量組抗體積數(shù)無明顯變化，故該產(chǎn)品不能增強小鼠的體液免疫功能。有報道顯示［21］，蛋白質(zhì)粉可以明顯增強小鼠體液免疫功能，與本次研究結(jié)果不完全一致，可能與兒童型蛋白質(zhì)粉配方具有一定的關(guān)系，有待進一步研究。

參考文獻

［1］盧文婷，王安.蛋白質(zhì)粉急性經(jīng)口毒性及致突變作用研究［J］.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18(2):333－335.

［2］劉志勝，李里特，辰巳英三.大豆蛋白營養(yǎng)品質(zhì)和生理功能研究進展［J］.中國食物與營養(yǎng)，1999，19(4):21－23.

［3］臧學(xué)麗，劉娟.大豆分離蛋白改性技術(shù)的研究進展［J］.吉林農(nóng)業(yè)，2018，30(1):62.

［4］尹秀蓮，趙瑜輝，管明，等.大豆分離蛋白提取及其凝膠制備影響因素研究［J］.食品與發(fā)酵科技，2017，45(6):62－66.

作者：胡雄飛 余曉巍 吳軍 胡楚元 熊志軍 單位：湖南省職業(yè)病防治院