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《畜牧與獸醫(yī)雜志》2014年第九期

1材料與方法

1.1樣品處理乙醚麻醉后進(jìn)行眼角采血，部分血液放入裝有肝素的抗凝管進(jìn)行血常規(guī)檢測，另一部分放入滅菌的EP管中，37℃溫箱30min，放入離心機(jī)3500r/min離心20min，取上清液放入－20℃冰箱中保存;采取心臟、肝臟、腎臟、睪丸、卵巢并稱重，計(jì)算器官指數(shù)(器官重/體重×100%)，將組織用波恩氏液固定保存。

1.2血液和血清生化指標(biāo)測定大鼠血液和血清送往東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院送檢。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析數(shù)據(jù)均用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)，差異顯著性檢驗(yàn)用單因子方差分析(one-wayANOVA，LSD)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2結(jié)果

2.1羊奶乳蛋白分析通過SDS－PAGE蛋白電泳分析結(jié)果如圖1所示，轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶與普通山羊羊奶的乳蛋白成分基本相同。

2.2生長曲線和平均日增重灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶、灌胃普通山羊羊奶和灌胃生理鹽水的雄性和雌性大鼠的生長曲線基本一致，生長趨勢無顯著差異(圖2)，對大鼠的平均日增重也均無顯著影響(表1)(P＞0.05)。

2.3器官指數(shù)和組織學(xué)觀察結(jié)果為了檢測轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶對重要組織器官的影響，連續(xù)15d灌胃大鼠后，發(fā)現(xiàn)雄性和雌性大鼠的心臟、肝臟、腎臟、睪丸、卵巢的器官比重均無顯著影響(P＞0.05)(表2)。HE染色后檢測結(jié)果顯示，短期15d飼喂轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶不會形成重要組織形態(tài)學(xué)的病變。

2.4血常規(guī)和血清生化指標(biāo)測定結(jié)果表3血常規(guī)結(jié)果顯示，無論是雄性還是雌性大鼠，連續(xù)15d灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶與灌胃普通山羊羊奶及灌胃生理鹽水對大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白等血常規(guī)指標(biāo)無顯著影響(P＞0.05)。普通山羊羊奶組雌性大鼠的血小板計(jì)數(shù)顯著高于轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶組和生理鹽水組(P＜0.05);而生理鹽水組雌性大鼠的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶組和普通山羊羊奶組(P＜0.05)。對大鼠的總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶等血清生化指標(biāo)無顯著影響(P＞0.05)。

2.5免疫指標(biāo)測定結(jié)果表5顯示無論是雄性還是雌性大鼠，連續(xù)15d灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶與灌胃普通山羊羊奶及灌胃生理鹽水對大鼠的IgG、IgE、IFN－γ和IL－2等免疫指標(biāo)無顯著影響(P＞0.05)。

3討論

近年來，隨著生命科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展與進(jìn)步，各種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品層出不窮］。轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品與人類的健康息息相關(guān)，所以在其投入市場前進(jìn)行相關(guān)安全性評價(jià)是至關(guān)重要的。雖然已有許多轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品安全評價(jià)的法律法規(guī)及管理政策出臺［12］，但都流于形式，目前尚且缺乏對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的有效評價(jià)體系。因此，需采取科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)求真務(wù)實(shí)的態(tài)度，加快安全評價(jià)體系的建立健全，以確保轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。本研究經(jīng)SDS－PAGE蛋白電泳分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶與普通羊奶相比乳蛋白成分沒有變化。

參照轉(zhuǎn)基因食品安全性評價(jià)程序和方法及經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)對化學(xué)品測試的相關(guān)導(dǎo)則，本研究采用每100g體重灌胃1mL的劑量，另外為了減少初乳與常乳中乳成分差異帶來的影響，本研究將不同泌乳階段的羊奶等體積混合，每天1次用轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶直接灌胃大鼠并設(shè)有普通山羊羊奶及生理鹽水對照組，評價(jià)轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶對飼喂短期15d的雌、雄大鼠生長及代謝機(jī)能的影響。檢測指標(biāo)集中在生長曲線、平均日增重、器官比重、組織形態(tài)學(xué)觀察等表觀指標(biāo)及與糖、脂、蛋白三大物質(zhì)代謝密切相關(guān)的生化指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶的大鼠與普通山羊羊奶組及生理鹽水的大鼠在生長曲線、平均日增重?zé)o顯著差異，大鼠的重要臟器均無明顯病變，說明轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶并不影響大鼠的正常生長。血常規(guī)是進(jìn)行臨床檢查的重要指標(biāo)之一，本研究表明灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶對大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白等血常規(guī)指標(biāo)無顯著影響，說明轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶不影響血液系統(tǒng)性能。普通山羊羊奶組雌性大鼠雖然在血小板計(jì)數(shù)指標(biāo)上顯著低于另外兩組，但其血小板分布寬度、血小板壓積、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞壓積等指標(biāo)與另外兩組無顯著差異。

同樣的，理鹽水組雌性大鼠雖然淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于另外兩組，但其淋巴細(xì)胞比率與另外兩組無顯著差異，且差異值在正常生理值范圍之內(nèi)。肝臟、腎臟是重要的解毒、排毒器官。谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶等是反應(yīng)肝臟功能的重要生化指標(biāo)，尿素氮等是反映腎臟功能的重要生化指標(biāo)，灌胃轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶與灌胃普通山羊羊奶及灌胃生理鹽水的大鼠在這些生化指標(biāo)均無顯著差異，說明轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶對大鼠的代謝機(jī)能無顯著影響。IgG和IgE是體液免疫的主要效應(yīng)分子，IFN－γ和IL－2是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)分子，這些免疫指標(biāo)沒有顯著差異，說明轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶沒有破壞免疫功能，在今后的研究中將著重觀察中長期飼喂轉(zhuǎn)gh基因山羊羊奶對大鼠的生長、代謝機(jī)能等是否會產(chǎn)生影響，為轉(zhuǎn)基因羊奶的產(chǎn)業(yè)化利用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

作者：徐文雯胡唯偉胥婧祎楊帆陸輝俞慧清楊倩庾慶華單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院上海轉(zhuǎn)基因研究中心