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作者:蘇艷佳吳微微郝宏蕾任文彥郁麗娟葉新斌單位:浙江省公安物證鑒定中心
成功率比較分析
在12775份樣本中有11658份檢材采用兩種試劑盒進行檢驗,分別得到15個(IdentifilerTM試劑盒)和8個(AGCUMini試劑盒)完整的STR基因座及性別位點數據,分型均獲成功;有625份檢材采用IdentifilerTM試劑盒未成功分型,而采用AGCUMini試劑盒分型成功,見圖2;其余492份檢材,采用兩種試劑盒均未獲成功分型。計算成功率IdentifilerTM試劑盒為91.3%;AGCUMini試劑盒為96.1%。隨機抽取兩種試劑盒均獲成功分型血樣中的10份,以及IdentifilerTM試劑盒未成功分型,而AGCUMini試劑盒分型成功血樣中的10份進行定量分析。
結果顯示模板DNA濃度前者在0.62~1.17ng/μL之間、后者在0.32~0.46ng/μL之間。說明AGCUMini體系對微量物證的STR分析能力優于IdentifilerTM體系。對不同濃度梯度的模板DNA(9947A)進行分析,結果采用AGCUMini系統,10μL擴增體系中40pg模板DNA(9947A)可得到完整分型,其靈敏度高于IdentifilerTM試劑盒,而與MinifilerTM試劑盒相當。
遺傳學數據
AGCUMini系統包含的8個基因座中,D19S253基因座未見浙江人群中的遺傳學調查數據。本文對699份浙江漢族無關個體D19S253基因座多態性進行了調查。結果該基因座共檢出9個等位基因,37個基因型,分布經χ2檢驗符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),其基因頻率見表1。D19S253基因座雜合度(H)為0.8140、匹配概率(Pm)為0.0690、個體識別力(DP)為0.9130、非父排除率(PE)為0.6250、多態性信息含量(PIC)為0.7729,屬高鑒別力的遺傳標記(DP>0.9,H>0.7),適于在浙江漢族人群的法醫學個體識別和親權鑒定中選用。
討論
AGCUMini系統采用MiniSTR技術,通過對引物序列的改進,減短了擴增產物長度,有利于對降解及微量DNA的分型檢驗。本文結果也顯示,以相同量的模板DNA,AGCUMini系統對降解及微量DNA的檢驗成功率更高。但由于擴增產物片段短,等位基因片段長度范圍相互重疊的幾率比STR高,因此復合擴增的基因座數目有限,和商品化STR試劑盒相比較,要想達到同樣的個人識別力,必須增加復合擴增的次數。而AGCUMini系統聯合應用其它相關STR試劑盒,可有效提高識別能力。
本文聯合AGCUMini和IdentifilerTM試劑盒,通過分型檢測,應用乘積法則進行計算,結果顯示單獨和聯合使用上述兩種試劑盒的累積個體識別能力分別為1~3.5×10-11、1~1.7×10-17、1~1.4×10-24,累計非父排除概率分別為0.9999、0.9999984、0.9999999975,能力明顯提高。此外,根據文獻,三聯體親子鑒定至少應檢驗15個PE≥0.5741的基因座。而聯合應用IdentifilerTM和AGCUMini體系后,基因座數量可達20個,其中PE值滿足要求的有15個,可以滿足三聯體親子鑒定的要求。
AGCUMini系統包含的STR基因座中除D19S253外,其余7個均包含在常見商業化試劑盒中,這使該系統具備良好的數據兼容性,其分型結果可直接與現有的數據進行檢索和比對。在全國“打拐”DNA數據庫建庫中,本實驗室檢驗的樣本中有2名被拐兒童樣本分別比中2對被拐兒童父母。聯合應用IdentifilerTM和AGCUMini系統,計算累計父權指數為2.76×1011和1.48×1014,從而作出在遺傳學角度確信親子關系的結論。