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《醫學研究生學報》2014年第六期

1結果

1．1主要優點①可操作性強。手術操作空間大，出血量少，術野清晰;可以容易地發現胸主動脈并將其夾閉，避免了對腹部及下肢的固定;去除針尖的灌注針不易刺破心臟及血管，插至升主動脈，較單純插入左心室進行固定，效果明顯提高。②省時。從胸腔暴露至開始灌注時間約30s，此時心臟搏動依然有力;灌注時間約5min，此時右心耳流出清亮液體;固定開始后即可發現大鼠上肢及胡須抽動，約5min后大鼠頸部僵硬，15min完成固定。③省液。灌注液耗量80～100mL;固定液耗量約80mL。

1．2固定后效果大鼠只有頭部及上肢固定并僵硬，腹部和下肢并未固定，鼠尾依然柔軟。固定后，腦組織冰凍切片行免疫熒光檢測，正置熒光顯微鏡下神經元細胞核特異性抗原-Neun表達清晰，見圖1。

2討論

在有關腦組織的各種常規病理形態、免疫組化等實驗研究中需要對腦組織進行固定處理，以保持蛋白類抗原。因為腦組織耐氧能力差，抗原易發生變性，所以需要對腦組織快速固定［5－6］。整塊腦組織浸沒于固定液，因為固定液不能以相同的速度迅速到達組織的各個部位，所以固定效果差［7－8］。通過大鼠天然的循環系統直接進行灌注固定，因固定液可快速、均勻地分布到腦組織各個部位，所以腦組織標本制備多采用此法［9－10］。關于進針方式目前主要有2種［11］:①經頸總動脈灌注固定，注射針針尖向著頭部的方向注入固定液，液體的出口開在頸靜脈或左心房上;②在心尖部位進針;打開胸腔，用針頭插入左心室，同時右心房開一孔。

第1種方法技術難度大，成功率低，故常不用;第2種方法操作相對簡便，雖幾經完善，但存在操作難度大、耗時耗液、固定效果不佳等多處不足。陳浩宇等［12］采用夾閉腹主動脈，代小思［13］采用夾閉胸主動脈與主動脈弓交界處等方法均存在操作繁瑣且耗時較長的缺點，且未對開胸及進針方法行具體描述。Gage等［1］詳細描述了開胸方法，但對全身進行灌注固定，存在耗時、耗液的不足。本方法進一步改善灌注固定方法，使其基本完善。創新性主要體現在:改變以往開胸術式、夾閉胸主動脈及處理灌注針頭。針對上述3點，有關注意事項:①充分游離胸前壁，操作過程中動作輕柔，剪至胸骨角處，暴露心臟及主動脈弓;②夾閉胸主動脈，提起左側肺臟，可清楚看到位于脊柱左側的胸主動脈，其右側為食管，需要注意，避免錯夾;③插灌注針，未經處理的輸液管針頭，因過于鋒利，易插破心臟和血管，在該操作中用眼科剪在心尖部剪開的深度要淺，防止剪破心臟，影響灌注固定效果，通過剪口，插入灌注針，動作要輕慢，針尖方向略偏左側，以免刺入右心房，灌注針進入升主動脈后，可明顯看到其位置，稍加固定，防止滑脫。若對心臟進行固定，可采用股動脈灌注方法［14］，Kasukurthi等［15］報道浸泡固定和經心灌注固定對周圍神經的實驗結果沒有明顯差異?？傊摲椒ㄡ槍δX組織等灌注固定具有可操作性強、省時、省液、提高灌注固定效果的優點，值得推廣。

作者：盧文朋栗世方單位：青島大學附屬醫院神經外科