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摘要：目的探討實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測(cè)新生兒巨細(xì)胞病毒（CMV）在不同標(biāo)本類(lèi)型中的陽(yáng)性檢出率。方法選取2015年1月至2016年6月該院收治的662例疑似感染CMV的新生兒作為研究對(duì)象，根據(jù)收集標(biāo)本類(lèi)型的不同分為尿液組（337例）、血液組（325例）。參照CMV檢測(cè)的標(biāo)本要求采集標(biāo)本后，按照達(dá)安基因人CMV核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR－熒光法）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果檢測(cè)結(jié)果顯示，新生兒CMV感染的總陽(yáng)性率為7．40％，不同標(biāo)本類(lèi)型CMV陽(yáng)性檢出率存在差異，其中尿液陽(yáng)性檢出率為8．9％，而血液陽(yáng)性檢出率則為5．85％。新生兒尿液和血液CMV陽(yáng)性感染拷貝數(shù)分布呈偏態(tài)分布，數(shù)據(jù)集中在103～105，幾何均數(shù)分別為3．19×104、4．75×103，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0．0246）。結(jié)論臨床檢測(cè)新生兒CMV感染，尿液標(biāo)本優(yōu)于血液標(biāo)本檢測(cè)，其陽(yáng)性檢出率更高，可更好地指導(dǎo)臨床醫(yī)生用藥。

關(guān)鍵詞：新生兒；巨細(xì)胞病毒感染；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)；陽(yáng)性率

巨細(xì)胞病毒（CMV）是新生兒產(chǎn)后感染最常見(jiàn)的病原微生物之一，可導(dǎo)致新生兒出現(xiàn)黃疸、耳聾、智力障礙等癥狀，嚴(yán)重威脅新生兒的身心健康［1］。因CMV感染通常呈無(wú)癥狀的感染，隱密性較強(qiáng)，早期確診CMV對(duì)新生兒的治療顯得尤為重要［2－4］。本研究選取本院收治的662例疑似感染CMV的新生兒作為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行CMV核酸檢測(cè)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1．1一般資料

回顧性研究2015年1月至2016年6月來(lái)本院就診疑似感染CMV的新生兒患者662例。年齡0～120d，中位年齡76d。根據(jù)新生兒的患病情況，收集其尿液或血液標(biāo)本，進(jìn)行后續(xù)的核酸定量檢測(cè)。根據(jù)收集標(biāo)本類(lèi)型的不同分為尿液組（337例）、血液組（325例）。

1．2儀器與試劑

CMVDNA定量檢測(cè)試劑為廣州達(dá)安基因股份有限公司人CMV核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR－熒光法），所用擴(kuò)增儀器為ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)LifeTechnologies）。

1．3方法

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作和PCR實(shí)驗(yàn)條件具體要求。PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，根據(jù)CMV不同拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品（1．0×104、1．0×105、1．0×106、1．0×107）、陰性質(zhì)控品及待檢樣本的擴(kuò)增曲線(xiàn)，觀察得出結(jié)果。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphpadPrism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，CMVDNA平均拷貝數(shù)采用幾何均數(shù)（G＝nx1槡x2……xn）計(jì)算所得組間比較采用U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2．1CMVDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品（1．0×104、1．0×105、1．0×106、1．0×107）、代表性陽(yáng)性樣品（DNA拷貝數(shù)5．2×105。

2．2新生兒不同標(biāo)本CMV陽(yáng)性檢出率以CMVDNA拷貝數(shù)≥1×103判讀為陽(yáng)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，662例新生兒檢出CMV49例，陽(yáng)性檢出率為7．40％，其中尿液標(biāo)本陽(yáng)性檢出率為8．9％（30／337），血液標(biāo)本陽(yáng)性檢出率為5．85％（19／325）。

2．3新生兒CMV陽(yáng)性感染標(biāo)本的拷貝數(shù)分布兩組新生兒CMV陽(yáng)性感染標(biāo)本的拷貝數(shù)分布均呈右偏態(tài)分布，數(shù)據(jù)大多集中在103～105，尤以103～104段的人數(shù)最多。尿液組和血液組陽(yáng)性標(biāo)本CMV拷貝數(shù)的幾何均數(shù)分別為3．19×104、4．75×103，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0．0246）。

3討論

CMV是新生兒產(chǎn)后感染最常見(jiàn)的病原微生物之一，可在尿液、血液等廣泛傳播［5］。PCR擴(kuò)增檢測(cè)是診斷CMV的標(biāo)準(zhǔn)方法之一［6］。然而在臨床檢測(cè)中CMV的檢出率始終不高。本研究擬采集新生兒尿液、血液等不同來(lái)源標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)尿液、血液樣本中CMV的DNA拷貝數(shù)，探索最佳的標(biāo)本選擇途徑，從而提高新生兒CMV的正確檢出率。CMV最容易侵犯的部位是腎臟、肝膽系統(tǒng)的管道上皮細(xì)胞，在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制后經(jīng)尿液排出，因此尿液中CMVDNA拷貝數(shù)較高［7］。沈丹等［8］在確診或高度懷疑為CMV性肝炎的兒童患者中，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，檢測(cè)患者血清、外周血單個(gè)核細(xì)胞及3次混合尿3種標(biāo)本CMVDNA的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本的CMV檢出率最高，定量檢測(cè)結(jié)果最高。鐘瑞芬等［9］采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和IgM抗體化學(xué)發(fā)光法兩種方法分別檢測(cè)新生兒尿液和血液中的CMV，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果與上述結(jié)果類(lèi)似。本研究采用新生兒尿液和血液標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)尿液CMV檢出率較血液高，且拷貝數(shù)的幾何均數(shù)為3．19×104，顯著高于血液中CMV的拷貝數(shù)（4．75×103）一個(gè)數(shù)量級(jí)。由于新生兒的特殊性，尿液較血液更易于采集，有利于后續(xù)治療連續(xù)采集、檢測(cè)。因此，尿液是新生兒檢測(cè)CMVDNA的最佳標(biāo)本選擇。早期使用更昔洛韋對(duì)免疫能力較強(qiáng)的新生兒進(jìn)行抗CMV病毒治療，可在很大程度上減輕癥狀、降低病死率。前期研究結(jié)果顯示，CMV在感染機(jī)體后通常呈潛伏期感染，90％以上的新生兒先天性感染無(wú)任何臨床癥狀［10］。與此同時(shí)，CMVDNA檢測(cè)是確診新生兒感染CMV的最可靠方法。因此CMVDNA檢測(cè)結(jié)果的假陰性會(huì)極大地延誤新生兒患者的治療時(shí)機(jī)。本研究發(fā)現(xiàn)，尿液標(biāo)本中CMV的陽(yáng)性檢出率較血液標(biāo)本高，且其平均拷貝數(shù)也較血液標(biāo)本高出一個(gè)數(shù)量級(jí)，可在一定程度上降低CMV檢出假陰性的發(fā)生，進(jìn)而有效地對(duì)臨床是否采取抗病毒治療給予指導(dǎo)意見(jiàn)。綜上所述，新生兒CMV感染的陽(yáng)性檢出率與標(biāo)本的采集途徑存在一定的相關(guān)性，尿液是新生兒CMVDNA檢測(cè)的最佳標(biāo)本。采用尿液檢測(cè)新生兒CMV的感染狀況，對(duì)于臨床指導(dǎo)CMV的抗病毒治療，提高新生兒CMV感染的預(yù)后有很好的積極意義。

參考文獻(xiàn)

［1］許玲芬，孫梅，毛志芹，等．?huà)雰壕藜?xì)胞病毒肝炎臨床分析及更昔洛韋療效評(píng)價(jià)［J］．中國(guó)實(shí)用兒科雜志，2002，17（8）：472－474．

［2］鄧慧玲，謝燕，符佳，等．尿巨細(xì)胞病毒－DNA定量動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)在嬰兒巨細(xì)胞病毒肝炎診治中的臨床意義［J］．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，27（14）：2128－2129．

作者：張美娜；趙虎；李仁哲；唐敏英；吳琳；詹世淮；王慶華；譚建明 單位：福州總醫(yī)院泌尿外科