本站小編為你精心準備了子宮內膜癌細胞表達纖維蛋白原的檢查參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

[摘要]目的探討子宮內膜癌細胞是否表達纖維蛋白原。方法納入于醫院接受子宮切除手術的16例子宮內膜癌患者（內膜癌組），同期4例良性子宮腫瘤切除的病例（對照組），采用Westernblot和qRT-PCR實驗，分別檢測各子宮內膜組織標本中纖維蛋白原蛋白和三鏈（a、b、g）mRNA表達水平。結果Westernblot檢測結果顯示，81.25%（13/16）的內膜癌組標本存在纖維蛋白原蛋白表達，而對照組未觀察到其表達；qRT-PCR檢測結果顯示，內膜癌組有7例標本（43.8%）存在至少一個纖維蛋白原鏈mRNA的表達，而對照組均未觀察到其表達。表達纖維蛋白原mRNA的全部7例標本在Westernblot檢測中均呈較高水平表達。結論絕大多數子宮內膜癌細胞具備表達纖維蛋白原的能力，是子宮內膜癌高纖維蛋白原血癥的重要來源之一。

[關鍵詞]子宮內膜癌；纖維蛋白原；表達

子宮內膜癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一[1]。近年來子宮內膜癌導致死亡風險急劇上升[2]。因此，深入探討子宮內膜癌的生物學行為，對改善其診斷和治療策略具有重要價值。纖維蛋白原是一類340kD的二聚體蛋白，由三種多肽鏈構成（a、b和g鏈）。通常認為，纖維蛋白原由肝臟產生分泌，進入血液循環，其濃度為200~380mg/L，半衰期為4d[3]。最近，子宮內膜癌的相關研究顯示，術前高纖維蛋白原水平與腫瘤臨床分期較晚相關，是患者預后差、生存期短的標志物[4]。然而，腫瘤組織是否產生纖維蛋白原，尚存在很多爭議。本研究擬通過Westernblot和qRT-PCR技術檢測子宮內膜癌的纖維蛋白原表達情況，探討子宮內膜癌細胞是否表達纖維蛋白原。

1材料與方法

1.1標本來源

收集2014年1月~2015年4月在醫院行子宮切除術的16例子宮內膜癌和4例子宮良性腫瘤患者的子宮內膜組織標本，排除子宮內膜增生患者及慢性炎癥性疾病、凝血障礙疾病或其他原因造成的異常纖維蛋白原血癥患者。

1.2Westernblot檢測

用蛋白裂解液[20mmol/LTris（pH8.0），137mmol/LNaCl，20mmol/L二硫蘇糖醇（DTT），1%NP-40.2mmol/L釩酸鈉，100μg/ml苯甲基磺酰氟，1μg/ml抑蛋白酶肽]充分裂解組織標本，冰浴30min，12000轉/min離心10min。取上清，BCA蛋白濃度測定試劑盒（碧云天生物公司）定量蛋白。取等量蛋白上樣，采用12%的SDS-PAGE凝膠電泳，半干式轉移法轉至硝酸纖維素膜。用5%的脫脂牛奶封閉后，使用相應的抗體雜交后，采用BeyoECLPlus超敏ECL化學發光試劑盒（碧云天生物公司)，在凝膠成像化學發光檢測儀ChemiDocTMXRS+(美國Bio-rad公司)顯色檢測，GAPDH作為檢測內參。

1.3qRT-PCR檢測

按照總RNA提取試劑盒（大連寶生物公司）說明書，分別提取組織標本的總RNA，所得RNA純度經鑒定符合實驗要求。使用RT-PCR試劑盒（大連寶生物公司）進行反轉錄和PCR擴增，GAPDH作為RT-PCR實驗的內參。參考文獻[5]的方法，并經BLAST驗證引物特異性，確定并合成纖維蛋白原a、b、g鏈的PCR擴增引物（英駿生物技術有限公司，中國上海），序列如表1所示。使用CFX96TMrea-timesystem熒光定量PCR儀（美國Bio-Rad公司）檢測。q-RTPCR切點閾值設置為對照組人群纖維蛋白原相應鏈均值加上3倍標準差，高于該值即為陽性表達。

1.4統計學方法

應用SPSS19.0統計軟件分析數據，計量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1Westernblot檢測結果

16例子宮內膜癌標本中，3例呈現低表達，其余13例（81.3%）呈現中高度表達（圖1），而對照組4例標本均未觀察到陽性表達，兩組陽性表達率有顯著差異（P＜0.01）。

2.3qRT-PCR檢測結果

子宮內膜癌組中，7例（43.8%）存在至少一個纖維蛋白原鏈mRNA的表達，其中2例（12.5%）表達a鏈mRNA，5例（31.3%）b鏈，4例g鏈（25.0%），4例同時表達b和g鏈。而對照組未觀察到纖維蛋白原鏈mRNA的表達。表達纖維蛋白原mRNA的全部7例標本在Westernblot檢測中均呈較高水平表達。

3討論

高纖維蛋白原血癥參與調控腫瘤惡性生物學行為，可能與腫瘤引發全身炎癥反應相關，因此，高纖維蛋白原血癥是惡性腫瘤的潛在標志[6]。但是，高纖維蛋白血癥的成因卻存在爭議。本研究通過對子宮內膜癌組織進行Westernblot和qRT-PCR檢測，證明子宮內膜癌細胞具有產生纖維蛋白原的能力。體外實驗證明，惡性腫瘤細胞能夠產生纖維蛋白原[7]；臨床宮頸細胞、肺癌和腸癌組織的細胞漿內可以檢測到纖維蛋白原的mRNA[8-9]。動物實驗檢測結果也顯示，纖維蛋白原缺失的轉基因小鼠的腫瘤細胞侵襲遷移能力較弱。研究發現，纖維蛋白和血小板的聚合物，可以庇護腫瘤細胞逃逸免疫細胞的監視[10]。此外，纖維蛋白原可以結合參與新血管生成和細胞增殖的相關因子（如成纖維細胞生長因子2、血管內皮生長因子），從而參與促進腫瘤的生長[11]。此外，纖維蛋白原與腫瘤細胞外基質表達的受體整合素相互作用，從而使轉移性腫瘤細胞定植到遠處組織[11]。上述研究結果都證明纖維蛋白原在腫瘤轉移中發揮重要作用。因此，腫瘤細胞通過表達纖維蛋白原可能導致惡性生物學行為，具有更高的侵襲轉移能力。

子宮內膜癌患者的高纖維蛋白原血癥與不良預后之間存在顯著聯系[4]，但尚未明確的是纖維蛋白原水平上升導致的血漿高凝狀態，是由于肝臟釋放纖維蛋白原增加，還是腫瘤本身產生的所致。本研究發現，43.8%的子宮內膜癌患者存在至少纖維蛋白原一個鏈的mRNA表達，而對照組均無表達。Westernblot分析顯示，纖維蛋白原高表達僅見于子宮內膜癌患者，而對照組沒有。纖維蛋白原是否可作為鑒別子宮內膜癌良惡性的指標，有待進一步的大樣本、多中心、多病變組織的深入研究證實。既往免疫組化和PCR分析支持腫瘤細胞具有合成纖維蛋白原的能力。一項體內研究證實，比較術中肺癌病變肺葉的肺靜脈和上腔靜脈的血漿，發現腫瘤組織是纖維蛋白原的來源之一[12]。本研究進一步證明，在子宮內膜癌組織，癌細胞具有纖維蛋白原分泌功能，是子宮內膜癌患者血清纖維蛋白原的重要來源之一。但本研究尚未發現纖維蛋白原三鏈mRNA陽性表達的病例，可能是由于患者數量偏少，或者是情況確實如此，有待擴大樣本量進一步的驗證。總之，本研究證實了子宮內膜癌細胞具備合成并分泌纖維蛋白原的能力，是患者高纖維蛋白原血癥的重要來源。子宮內膜癌細胞分泌纖維蛋白原的相關機制及其治療價值，是未來研究的重要內容。

作者：雷放；謝先豐