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《西部中醫藥雜志》2014年第七期
1含量測定
1.1色譜條件HypersilODS-2柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-0.4%磷酸溶液(11∶89)為流動相;檢測波長327nm;流速1.0mL/min。
1.2對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成57μg/mL的溶液,即得。
1.3供試品溶液的制備取復方金銀花滴丸約0.2g,精密稱定,置25mL棕色量瓶中,加入50%甲醇20mL,超聲處理30分鐘,放冷,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
1.4專屬性試驗取上述對照品溶液、陰性對照品溶液及供試品溶液,照“2.2.1”項下色譜條件,各進樣10μL,測得HPLC圖譜。結果表明供試品與對照品保留時間一致,陰性樣品在綠原酸相應保留時間無干擾峰出現,專屬性良好。
1.5線性關系考察分別吸取“2.2.2”項下對照品溶液(濃度為57μg/mL)4、5、6、7、8、9、10mL,各置于10mL量瓶中加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別進樣10μL,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積為縱坐標,對照品濃度為橫坐標(μg/mL),計算得回歸方程為:y=(5.5x-8.7)×103,r=0.9999。結果表明,綠原酸在22.8~57.0μg/mL呈良好線性關系。
1.6精密度實驗取“2.2.2”項下對照品溶液,重復進樣6次,每次進樣10μL,測得峰面積,并計算出RSD為0.99%,表明精密度良好。
1.7穩定性實驗取“2.2.3”項下對照品溶液,分別在0、2、4、6、8、10、12小時各進樣10μL,記錄峰面積并計算出RSD為0.72%。表明復方金銀花供試品在12小時內是穩定的。
1.8重復性實驗取復方金銀花滴丸樣品5份,按“2.2.3”項下供試品溶液制備法,制得5份供試品溶液,分別進樣10μL,測得峰面積,并計算出RSD為1.20%,表明本法重現性良好。
1.9回收率實驗精密稱取適量的已測知含量的復方金銀花滴丸(含量為5.23mg/g)6份,置25mL量瓶中,分別加入適量的對照品溶液,按“2.2.3”項下供試品溶液的制備方法制得樣品,各取10μL,進樣,記錄色譜圖,計算回收率,結果見表1。
1.10樣品測定取3批復方金銀花滴丸,制備供試液,按色譜條件進樣測定,按外標法計算樣品中綠原酸含量,結果表明3批樣品綠原酸含量分別為5.25、5.28、5.27mg/g。
2討論
本品處方藥材黃芩中的主要成分為黃芩苷,以黃芩苷對照品為對照進行了定性鑒別,斑點明顯,分離效果好;連翹是以連翹對照藥材為對照進行了薄層色譜鑒別,斑點明顯,分離效果好。金銀花的主要成分為綠原酸,據文獻報道,綠原酸的含量測定流動相選用乙腈-0.4%磷酸溶液(11∶89),可使綠原酸與雜質有效分離,并且改善拖尾現象,并且重復性和精密度良好,所以選用此流動相。
作者:任一杰張華張喜民鄧月婷賈繼禧劉潔麗單位:甘肅隴神戎發藥業股份有限公司蘭州市第一人民醫院